發(fā)布時間：2020-11-22 06:07

　　 目的:探討阿魏酸(Ferulic acid,FA)對小鼠腎缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)損傷的保護作用及其可能的機制。方法:將96只雄性C57BL/6J小鼠隨機分為兩部分,第一部分做檢測實驗,將其隨機分為6組,每組6只,分別為:空白對照組(Control組)、阿魏酸對照組(FA組)、模型組(IR組),低劑量阿魏酸干預組(10 mg/kg FA+IR組)、中劑量阿魏酸干預組(30 mg/kg FA+IR組)、高劑量阿魏酸干預組(100 mg/kg FA+IR組)。模型組小鼠暴露雙側腎臟后,夾閉雙側腎蒂35 min,再灌24 h;空白對照組小鼠只暴露雙側腎臟,不夾閉腎蒂;低、中、高劑量的阿魏酸干預組小鼠,提前一天分別給予10、30、100 mg/kg阿魏酸灌胃,每8 h一次,連續(xù)灌胃3次進行預處理后,再按模型組方法處理;阿魏酸對照組小鼠,提前一天給予100 mg/kg阿魏酸灌胃,每8 h一次,連續(xù)3次;然后各組小鼠同時處死,并取血及腎臟進行檢測。第二部分小鼠用于七天生存率實驗,分組方法同第一部分,每組10只,按上述進行腎臟暴露或阿魏酸預處理,模型組和低、中、高劑量的阿魏酸干預組小鼠的雙側腎蒂夾閉50min后,恢復灌注,每24 h觀察一次小鼠生存情況,并記錄,7 d后處死小鼠,繪制KM生存曲線。為了證明缺血誘導因子-1?(hypoxia inducible factor-1?,HIF-1?)在阿魏酸對小鼠腎缺血再灌注損傷中的作用,我們做了HIF-1?干擾實驗。將12只雄性C57BL/6J小鼠隨機分成兩組,HIF-1?干擾組:FA(100mg/kg)+Ad-HIF-1?siRNA+IR組和對照組:FA(100 mg/kg)+Ad-RFP+IR組。分別用Ad-HIF-1?siRNA或者Ad-RFP轉染雙腎,48 h后,給予100 mg/kg阿魏酸灌胃,每8 h一次,連續(xù)3次,然后按模型組方法處理后,取小鼠血及腎臟進行檢測。試劑盒檢測各組血肌酐(Serum creatine,Scr)、尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)含量;蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin,HE)染色觀察腎臟病理變化情況,末端脫氧核苷酸轉移的UTP缺口末端標記(terminal deoxynucleotidly transferased UTP nick-end labeling,TUNEL)測定法檢測腎臟細胞凋亡情況;半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性檢測試劑盒檢測腎臟中Caspase-3水平;流式細胞術(flow cytometry,FCM)和髓過氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)試劑盒檢測中性粒細胞的浸潤情況;酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清炎性介質腫瘤壞死因子-?(tumor necrosis factor-?,TNF-?)和白細胞介素-1?(interleukin-1?,IL-1?)的表達;高效液相色譜(High performance liquid chromatography,HPLC)檢測腎臟組織中腺苷的含量;定量逆轉錄聚合酶鏈反應(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫印記法(western blot,WB)檢測腎臟組織中HIF-1?、CD39、CD73的表達。結果:1.與空白對照組相比,模型組小鼠7天生存率明顯下降,Scr、BUN水平顯著升高(P0.01),小鼠腎小管損傷程度明顯加重(P0.01)。2.與空白對照組相比,阿魏酸對照組的7天生存率、Scr、BUN水平、腎小管損傷程度、近曲腎小管上皮細胞凋亡情況、Caspase-3活性、中性粒細胞浸潤情況、促炎細胞因子TNF-?和IL-1?及HIF-1?、CD39、CD73在mRNA和蛋白水平表達上都無統(tǒng)計學差異。3.與模型組相比,低、中、高劑量的阿魏酸干預組Scr、BUN水平明顯降低,尤其是給藥劑量為100 mg/kg時,Scr、BUN降低最明顯(P0.01);從KM生存曲線看,低、中、高劑量的阿魏酸干預組的7天生存率都提高,尤其是給藥劑量為100 mg/kg時,7天生存率最高,因此選擇此劑量進行后期的實驗分析。4.與模型組相比,高劑量阿魏酸干預組小鼠近曲腎小管上皮細胞凋亡明顯減少,Caspase-3活性明顯降低(P0.01),中性粒細胞浸潤減少,促炎細胞因子TNF-?和IL-1?顯著減少(P0.01)。5.與模型組相比,高劑量阿魏酸干預組小鼠HIF-1?、CD39、CD73在mRNA和蛋白水平都明顯升高,腺苷產(chǎn)生也明顯增加(P0.01)。6.與FA(100 mg/kg)+Ad-RFP+IR組相比,FA(100 mg/kg)+Ad-HIF-1?siRNA+IR組小鼠HIF-1?、CD39、CD73減少,腺苷產(chǎn)生減少(P0.01),Scr、BUN水平顯著升高(P0.01),腎小管損傷程度明顯加重(P0.01)。結論:阿魏酸能提高腎缺血再灌注損傷小鼠的生存率,改善腎臟功能,減輕腎小管損傷,其可能機制是通過上調HIF-1?促進內源性腺苷產(chǎn)生,從而減輕炎癥反應。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文與- 亞基形成復合物，轉移到細胞核中，通過結合缺氧標基因[28-30]。HIF-1 可通過增加血管生成因子，促進酵解的能力，調節(jié)對局部組織缺血和缺氧的適應[31-37]。小鼠中，腎 IR 損傷明顯加重[38]。然而在用乙酰唑胺（的 AKI 的鼠模型中，Scr 和 BUN 水平下降，說明 HIF-9]。同時，HIF- 還直接誘導 CD73 的表達[40]，而 CD73。研究擬探討阿魏酸對腎缺血再灌注損傷的保護作用，腺苷的產(chǎn)生的相關機制。

27圖 2. 阿魏酸對腎 IR 小鼠的 存率及腎功 的改善作 （n=6）Effects of FA on survival rate and renal function in renal IR mice ( n=6 pe-day survival curve. (B) Scr levels. (C) BUN levels. All data were expresse#P<0.01 compared with control group,**P<0.01 compared with renal IR

圖 3 阿魏酸減輕腎 IR 小鼠的腎小管損傷和細胞凋亡（n=6）etreatment ameliorated renal structural damage and tubular cell aIR( n=6 per group)tative images of structure damage after renal IR on HE-stained k magnification 200. (B) Semiquantitative evaluation of kidney injuf apoptotic cells on TUNEL-stained kidney sections. (D) The caspas. All data were expressed as mean ±SD.##P<0.01 compared with**P<0.01 compared with renal IR model.減輕腎 IR 小鼠的炎癥反應一步研究了阿魏酸在小鼠腎 IR 炎癥反應中的作用。如圖組相比，阿魏酸對照組小鼠腎組織中的炎性細胞因子 IL-1
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本文編號：2894252