微生物轉(zhuǎn)化是天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)修飾的有效手段,開發(fā)新的微生物資源是實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化反應(yīng)類型和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物結(jié)構(gòu)新穎多樣化的有力保障。本論文嘗試從植物內(nèi)生真菌中挖掘具有宿主化學(xué)成分轉(zhuǎn)化能力的微生物資源,以期拓展宿主化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)多樣性。論文第一章為緒論,對石杉堿甲及其類似物的結(jié)構(gòu)修飾研究進(jìn)展,以及微生物(包括植物內(nèi)生真菌)轉(zhuǎn)化在天然產(chǎn)物結(jié)構(gòu)修飾方面的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。論文第二章以藥用植物蛇足石杉(Huperzia serrata)為研究對象,從不同產(chǎn)地來源的植株中分離得到了120株內(nèi)生真菌,通過篩選獲得了兩株具有石杉堿甲和石杉堿乙轉(zhuǎn)化能力的菌株ZJUT-HS28和ZJUT-HS39,經(jīng)分子生物學(xué)鑒定,兩菌株分別為Bjerkandera sp.和Irpex lacteus。論文第三章研究了篩選獲得的兩株菌Bjerkandera sp.ZJUT-HS28和Irpex lacteus ZJUT-HS39對石杉堿甲和石杉堿乙的轉(zhuǎn)化作用。綜合運(yùn)用現(xiàn)代色譜和波譜技術(shù),從Irpex lacteus ZJUT-HS39的轉(zhuǎn)化體系中分離鑒定了2個(gè)化合物1和2;其中,化合物1和2互為非對映異構(gòu)體,均為首次報(bào)道的新穎結(jié)構(gòu)石杉堿甲轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。從Bjerkandera sp.ZJUT-HS28的轉(zhuǎn)化體系中分離鑒定了5個(gè)化合物3-7,其中,化合物3為轉(zhuǎn)化產(chǎn)物8?,15?-環(huán)氧化石杉堿乙,為新化合物;化合物4為轉(zhuǎn)化產(chǎn)物8?,15?-環(huán)氧化石杉堿甲,該化合物僅有兩例報(bào)道,均為微生物轉(zhuǎn)化石杉堿甲所得,其中一例為蛇足石杉內(nèi)生真菌轉(zhuǎn)化石杉堿甲所得。論文第四章對分離得到的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行了抗神經(jīng)細(xì)胞炎癥活性的初步研究。結(jié)果顯示化合物1和化合物2具有較強(qiáng)的抗炎活性,能夠顯著提高LPS誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞存活率,為進(jìn)一步探究石杉堿甲的神經(jīng)保護(hù)作用研究奠定了基礎(chǔ)。本論文研究結(jié)果提示,利用內(nèi)生真菌開展宿主植物化學(xué)成分的生物轉(zhuǎn)化,能夠獲得結(jié)構(gòu)新穎的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,為植物來源天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)修飾提供一種新的方法。
【學(xué)位單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284
【部分圖文】：

-2 A 陰溝外側(cè)部位 Hup A 與酶的催化示意圖; B HupA 與膽堿酯酶結(jié)合部位放大re 1-2 A Catalysis of Hup A and Enzyme in the Outside of the Crypt; B amplified mHupA and cholinesterase binding sites堿甲的化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾堿甲的結(jié)構(gòu)修飾主要從結(jié)構(gòu)簡化、C10、吡啶酮環(huán)、脂橋環(huán)、環(huán)外雙等方面著手。在已合成的大量類似物中，只有少部分活性優(yōu)于天然于石杉堿甲是一個(gè)具有三環(huán)結(jié)構(gòu)的剛性分子，其特有的橋環(huán)和氨基構(gòu)改造帶不少的困難，因此其化學(xué)結(jié)構(gòu)改造也具有一定的局限性[10]簡化紀(jì) 90 年代，何煦昌等[11]通過計(jì)算機(jī)模擬研究推測石杉堿甲分子結(jié)構(gòu) 2 ( 1 H ) 吡啶酮結(jié)構(gòu)可能是其藥效部分，設(shè)計(jì)并合成了石杉堿甲類

圖 2-1 部分蛇足石杉內(nèi)生真菌Figure 2-1 Endophytic fungi isolated from Huperzia serrata在本節(jié)中，利用 PDA 平板培養(yǎng)基分離內(nèi)生真菌，一共從藥用植物蛇足石杉(H.serrata)中分離獲得內(nèi)生真菌 120 株，其中莖中最多，葉中次之，根部最少。在分離過程中，隨著分離次數(shù)的增加，分離所得內(nèi)生真菌的重復(fù)率也越高，因此，要根據(jù)菌株的菌落形態(tài)，顏色，大小，生長速率，質(zhì)地以及菌絲體和孢子的形態(tài)特征進(jìn)行區(qū)分，以減少重復(fù)率。由于在分離和組織培養(yǎng)中較易染菌，可在滅菌后的培養(yǎng)基中加入 100 mg/L 的青霉素和 200 mg/L 的鏈霉素即可，以確保所分菌株為內(nèi)生真菌。

檢測 (A 為 Hup A 轉(zhuǎn)化組，-HS28 (A: transformation gro驗(yàn) TLC 圖譜(碘化鉍鉀顯 檢測(A 為 Hup A 轉(zhuǎn)化組，-HS39 (A: transformation gro20株內(nèi)生真菌中初步篩選
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本文編號：2891312