目的:觀察濕疹1號方對脾虛型豚鼠急性濕疹模型皮膚炎癥、屏障功能及免疫功能的影響,探討中藥(濕疹1號方)對脾虛型豚鼠急性濕疹模型的作用機理,為濕疹1號方治療脾虛型急性濕疹提供臨床依據(jù)。材料與方法:1材料:將豚鼠60只隨機分為6組(每組10只),分別為空白對照組、模型組、脾虛急性濕疹中藥低劑量組、脾虛急性濕疹中藥高劑量組、中藥(黃柏膠囊)陽性對照組、西藥(氯雷他定片)陽性對照組。中藥治療高、低劑量組采用傳統(tǒng)方法煎煮濃縮,制成煎劑,灌胃給藥;中藥陽性對照組采用黃柏膠囊,用蒸餾水將其溶解制成混懸液,灌胃給藥;西藥陽性對照組采用氯雷他定片,用蒸餾水將其溶解制成混懸液,灌胃給藥;剩余組以相同量生理鹽水灌胃。2方法:2.1造模方法:因濕疹中醫(yī)辨證多以脾虛為主,故本實驗主要以脾虛型豚鼠急性濕疹模型為研究對象。先予5%DNCB(二硝基氯苯)丙酮溶液25μL外涂于頸部去毛處致敏,然后采用反復小劑量DNCB涂抹法建立急性濕疹模型,在此基礎上采用飲食不節(jié)及疲勞過度致脾虛證法建立脾虛模型,最后形成病證結合的脾虛型豚鼠急性濕疹動物模型。2.2實驗方法:實驗一:濕疹1號方對脾虛型豚鼠急性濕疹模型皮膚炎癥及屏障功能的影響(1)濕疹1號方對脾虛型豚鼠急性濕疹模型耳腫脹度、耳厚度差的影響:末次激發(fā)1天后,處死豚鼠,剪下豚鼠兩側耳廓,用直徑0.9cm的金屬打孔器在兩耳相同部位打孔,電子天平稱得左右耳片重量,計算其質量差作為腫脹程度,將其作為炎癥反應強度的指標。(2)濕疹1號方對脾虛型豚鼠急性濕疹模型背部皮膚組織中水通道蛋白3表達的影響:免疫組化法對豚鼠背部皮膚AQP3的表達水平進行檢測,應用計算機圖像分析系統(tǒng),根據(jù)單位面積中陽性細胞數(shù)所表達的平均光密度值來作為其在組織中的表達情況。實驗二:濕疹1號方對脾虛型豚鼠急性濕疹模型免疫功能的影響(1)濕疹1號方對豚鼠血清中噬酸細胞陽離子蛋白(ECP)的影響:14天后,在豚鼠模型尚未處死時,經(jīng)腹主動脈采血,離心后吸取血清。選用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法對各組豚鼠血清中ECP含量進行測定,嚴格按照試劑盒說明書進行具體步驟的操作。(2)濕疹1號方對脾虛型豚鼠急性濕疹模型CD_4~+T、CD_8~+T及其比值的影響:末次灌胃后2h,經(jīng)心臟穿刺收集豚鼠全血2mL,并抗凝,嚴格按照流式細胞儀操作過程進行具體步驟的操作,檢測豚鼠全血中CD_4~+T、CD_8~+T水平并計算其比值。結果:實驗一:濕疹1號方對脾虛型豚鼠急性濕疹模型皮膚炎癥及屏障功能的影響1.濕疹1號方可減輕脾虛急性濕疹豚鼠皮膚耳腫脹度,縮小耳厚度差,減輕炎癥反應。與空白對照組比較,模型組豚鼠發(fā)生程度不同的耳腫脹,耳厚度差增加,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組比較,各給藥組均能減輕豚鼠耳腫脹程度,減小耳厚度差,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);中藥各劑量組、氯雷他定組與黃柏膠囊組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05或P0.01)且療效優(yōu)于黃柏膠囊組;中藥高、低劑量組與氯雷他定組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.濕疹1號方可下調(diào)脾虛急性濕疹豚鼠皮損中過度表達的AQP3。AQP3蛋白在各組皮膚組織中均有不同程度的表達(淺褐色至棕褐色),在正常組織中呈弱陽性表達。與空白對照組比較,模型組中平均光密度值明顯增高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);與模型組比較,各治療組平均光密度值明顯低于模型組,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);中藥高劑量組平均光密度值與氯雷他定組比較無統(tǒng)計學差異(P0.05)。與空白組比較,模型組中AQP3蛋白表達呈強陽性,棕褐色顆粒在胞膜和胞質中大量分布,染色明顯加深;與模型組比較,治療組AQP3蛋白表達水平均呈不同水平降低,陽性產(chǎn)物不同程度減少,褐色沉積物質的多少與濕疹1號方的劑量呈現(xiàn)負相關性。實驗二:濕疹1號方對脾虛型豚鼠急性濕疹模型免疫功能的影響1.濕疹1號方能有效抑制脾虛急性濕疹豚鼠血清中ECP水平的過度表達。與空白對照組比較,模型組血清中ECP均有明顯升高(P均0.01),表示此模型造模成功。與模型組比較,各治療組血清中ECP含量均顯著下降(P0.05或P0.01)且中藥高劑量組治療效果要優(yōu)于低劑量組和黃柏膠囊組,而高劑量組與氯雷他定組相比無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.濕疹1號方可通過降低脾虛急性濕疹豚鼠CD_8~+T淋巴細胞和升高CD_4~+T淋巴細胞從而使T淋巴細胞亞群之間處于平衡狀態(tài)。模型組中CD_4~+T淋巴細胞水平較空白對照組顯著下降,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),與模型組相比較,中藥高劑量組和氯雷他定組CD_4~+T淋巴細胞水平均有上升趨勢(P0.05),但中藥高劑量組與氯雷他定組相比較,無顯著性統(tǒng)計學差異(P0.05),與模型組相比較,其余各治療組CD_4~+T淋巴細胞水平均有上升趨勢,但變化不明顯,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);模型組中CD_8~+T淋巴細胞水平則較空白對照組顯著升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01),與模型組相比較,中藥高劑量組和氯雷他定組CD_8~+T淋巴細胞水平有下降趨勢(P0.05),但中藥高劑量組與氯雷他定組相比較,無顯著性統(tǒng)計學差異(P0.05),其余各治療組與模型組之間比較均有降低趨勢,但變化不顯著,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);CD_4/CD_8可見模型組較正常組顯著降低(P0.01),中藥高劑量組與模型組之間比較有升高趨勢(P0.05),但中藥高劑量組與氯雷他定組比較,其差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),其余各治療組與模型組之間比較均有升高趨勢,但變化不顯著,無顯著性統(tǒng)計學差異(P0.05)。結論:1.濕疹1號方可減輕脾虛急性濕疹豚鼠皮膚的炎癥反應,降低組織損傷。2.濕疹1號方可下調(diào)脾虛急性濕疹豚鼠皮損中過度表達的AQP3,從而減輕皮膚屏障功能的損傷。3.濕疹1號方能有效抑制脾虛急性濕疹豚鼠血清中ECP水平的過度表達。4.在特定劑量和療程下,濕疹1號方能使脾虛急性濕疹豚鼠CD_8~+T淋巴細胞水平下降而使CD_4~+淋巴細胞水平上升,從而使T淋巴細胞亞群之間達到平衡狀態(tài)。
【學位單位】：遼寧中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1 各組豚鼠耳腫脹度及耳厚度差的比較(—x ±s)疹 1 號方對脾虛型豚鼠急性濕疹模型背部皮膚組織中水通道蛋白 3 表達的影AQP3 蛋白在各組皮膚組織中均有不同程度的表達(淺褐色至棕褐色),在正常組陽性表達。與空白對照組比較，模型組中平均光密度值明顯增高，差異具有義（P<0.01）；與模型組比較，各治療組平均光密度值明顯低于模型組，差異學意義（P<0.01）；中藥高劑量組的平均光密度值與氯雷他定組比較無統(tǒng)計學0.05）。與空白組比較，模型組中 AQP3 蛋白表達呈強陽性，棕褐色顆粒在胞中大量分布，染色明顯加深；與模型組比較，治療組 AQP3 蛋白表達水平均呈降低，陽性產(chǎn)物不同程度減少，褐色沉積物質的多少與濕疹 1 號方的劑量呈現(xiàn)。見表 2、圖 2。

模型組

中藥低劑量組
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本文編號：2882178