目的:探討腎康注射液對UUO模型小鼠腎間質(zhì)纖維化的作用及其機(jī)制,為臨床應(yīng)用中醫(yī)藥防治腎間質(zhì)纖維化提供科學(xué)依據(jù)與指導(dǎo)。方法:將60只雄性C57BL/6小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,按體重隨機(jī)分為兩組,即Sham組(假手術(shù)組)10只,手術(shù)造模組50只。手術(shù)方法:假手術(shù)組小鼠在麻醉狀態(tài)下開腹腔游離左側(cè)輸尿管,但不結(jié)扎;造模組小鼠在麻醉狀態(tài)下行左側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)。造模組小鼠在進(jìn)行UUO造模后再隨機(jī)分為五組:UUO組(模型組),ARB組(氯沙坦鉀組)及H組(腎康注射液高劑量組)、M組(腎康注射液中劑量組)、L組(腎康注射液低劑量組),每組10只。術(shù)后第一天開始藥物干預(yù):sham組與UUO組予生理鹽水(0.13ml/10g)尾靜脈注射及生理鹽水(0.15ml/]0g)灌胃;ARB組予生理鹽水(0.13ml/10g)尾靜脈注射及氯沙坦鉀溶液(0.15ml/10g)灌胃;H組、M組及L組分別予高、中、低劑量腎康注射液0.13ml/10g尾靜脈注射及生理鹽水(0.15ml/10g)灌胃;連續(xù)給藥14天。實(shí)驗(yàn)過程中觀察記錄小鼠的一般情況、體重等。第14天留取尿液,檢測尿微量白蛋白(UALB)。給藥結(jié)束后,摘眼球取血,測定血清肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、尿素(UA)、胱抑素C(Cys-c)水平;取腎組織,行HE、天狼星紅染色觀察腎組織病理形態(tài)變化;TUNEL染色法檢測腎組織中的凋亡細(xì)胞;透射電鏡觀察腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的變化;免疫組織化學(xué)法分析p-PERK、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、caspase12、caspase3的蛋白表達(dá)。結(jié)果:1、血清學(xué)及尿液檢測結(jié)果:與假手術(shù)組相比較,模型組小鼠血清肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、胱抑素C(Cys-c)及尿微量白蛋白(UALB)未見明顯變化(P0.05);與模型組比較,各治療組上述指標(biāo)亦未見顯著變化(P0.05)。2、病理學(xué)觀察結(jié)果:HE染色及天狼星紅染色顯示:假手術(shù)組小鼠患側(cè)腎臟腎小球無明顯的萎縮,腎小管排列緊密整齊,未見腎小管擴(kuò)張及萎縮、炎細(xì)胞浸潤等改變。膠原染色區(qū)域主要位于腎小球基底膜、系膜區(qū)和腎小管間的毛細(xì)血管周圍,而腎小管周圍間質(zhì)范圍較窄。模型組小鼠患側(cè)腎臟組織可見大量的腎小管上皮細(xì)胞壞死、脫落,腎小管擴(kuò)張、炎性細(xì)胞浸潤,部分腎小球萎縮;腎間質(zhì)纖維化范圍顯著擴(kuò)大,膠原陽性染色程度明顯增加;與假手術(shù)組相比,模型組小鼠患側(cè)腎臟腎間質(zhì)膠原陽性染色面積百分顯著升高。與模型組相比,各治療組小鼠患側(cè)腎臟腎小管擴(kuò)張、腎間質(zhì)范圍增加程度及間質(zhì)膠原陽性染色程度均較模型組降低(P0.05),其中腎康注射液高劑量組較為明顯。3、電鏡觀察結(jié)果:假手術(shù)組小鼠患側(cè)腎臟腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈層疊管狀結(jié)構(gòu),排列整齊,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上有少量核糖體附著,細(xì)胞核、線粒體等結(jié)構(gòu)正常;模型組小鼠患側(cè)腎臟腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈不同程度的腫脹,層疊管狀結(jié)構(gòu)改變甚至消失,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)囊腔膨脹,擴(kuò)大,有的呈空泡樣結(jié)構(gòu),膜上附著的核糖體增多;細(xì)胞核腫脹,部分破裂;腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞增生。各治療組小鼠患側(cè)腎臟上述情況有不同程度的減輕;4、免疫組化檢測結(jié)果:(1)假手術(shù)組小鼠患側(cè)腎組織GRP78有少量表達(dá);與假手術(shù)組相比,模型組小鼠患側(cè)腎組織的GRP78的表達(dá)量顯著增多(P0.05),以腎小管區(qū)域表達(dá)為主。與模型組相比,各治療組小鼠患側(cè)腎組織GRP78的表達(dá)顯著減少(P0.05),其中以腎康注射液高、中劑量組較為明顯;(2)假手術(shù)組小鼠患側(cè)腎組織P-PERK、p-eIF2α、ATF4蛋白有少量表達(dá)、CHOP蛋白有極少量的表達(dá)。與假手術(shù)組相比,模型組小鼠患側(cè)腎組織上述蛋白的表達(dá)明顯增多(P0.05),范圍以腎小管及其周圍為主;與模型組相比,腎康注射液高、中、低劑量組及ARB組中,小鼠患側(cè)腎組織P-PERK、p-eIF2α、CHOP蛋白的表達(dá)相對減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各治療組小鼠患側(cè)腎組織ATF4蛋白亦有減少,但差異不顯著(P0.05)。各治療組中,以腎康注射液高劑量組變化更為顯著;(3)假手術(shù)組小鼠患側(cè)腎組織caspase12、caspase3蛋白有少量的表達(dá),與之相比,模型組小鼠患側(cè)腎組織的上述蛋白的表達(dá)顯著增多(P0.05);與模型組相比,各治療組小鼠患側(cè)腎組織caspase12、caspase3的表達(dá)明顯減少(P0.05),其中以腎康注射液高劑量組效果更為明顯。5、TUNEL檢測:熒光顯微鏡下觀察,sham組小鼠患側(cè)腎凋亡細(xì)胞數(shù)量極少,呈散在分布;模型組小鼠患側(cè)腎凋亡細(xì)胞數(shù)量明顯增多,且主要位于腎小管區(qū)域;腎康注射液高、中、低劑量組及ARB組小鼠患側(cè)腎凋亡細(xì)胞數(shù)量較模型組減少。結(jié)論:1、腎康注射液具有改善UUO模型小鼠腎間質(zhì)纖維化的作用,并且高劑量時(shí)效果較為明顯;2、UUO模型小鼠患側(cè)腎臟細(xì)胞發(fā)生了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,其下游可能與caspase12、caspase3等因子的激活有關(guān);3、腎康注射液改善UUO模型小鼠腎間質(zhì)纖維化的作用,其機(jī)制可能與下調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK-eIF2α-ATF4-CHOP通路及相關(guān)蛋白的表達(dá),抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R-332;R285.5
【部分圖文】：

生［６１】。研究表明，ＣＨＯＰ介導(dǎo)細(xì)胞凋亡與激活ｃａｓｐａｓｅ有關(guān)，ＣＨＯＰ激活ｃａｓｐａｓｅ介導(dǎo)??的凋亡級聯(lián)反應(yīng)誘導(dǎo)腎臟細(xì)胞凋亡發(fā)生。腎小管上皮細(xì)胞持久或嚴(yán)重的發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)??激，則可促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化發(fā)生。（圖１）??總之，腎間質(zhì)纖維化本身極其復(fù)雜，涉及到多種病理生理過程，而腎臟固有細(xì)胞的??凋亡不僅會(huì)引起腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞減少，導(dǎo)致腎組織結(jié)構(gòu)功能障礙，也是腎間質(zhì)纖維化的促進(jìn)??因素之一。從結(jié)構(gòu)上或者功能上來說，腎臟具有ＥＲＳ發(fā)生的基礎(chǔ)和條件，慢性腎臟疾??病極易發(fā)生ＥＲＳ，長期持續(xù)的誘導(dǎo)因素的刺激，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激ＰＥＲＫ－ｅＩＦ２ａ＿ＡＴＦ４－ＣＨＯＰ??通路被激活，下游相關(guān)的凋亡因子被活化，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，造成腎臟細(xì)胞大量凋亡??而腎功能明顯減退。因此，深入研究ＥＲＳ介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡與腎間質(zhì)纖維化的關(guān)系，可??２４??

腎康注射液對ＵＵＯ模型小鼠腎間質(zhì)纖維化及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響的研宄表１各組小鼠體重變化（ｘ±ｓ，?ｎ＝１０）??組／時(shí)間?第０天?第３天?第７天?第１０天?第１５天??Ｓｈａｍ?２０．６?土０．６３?２２．２９土０．８６?２２．９９±０．９６?２２．８４士?１．１４?２２．４０±０．８４??ＵＵＯ?２１．１９±１．４２?２１．１８土?１．４５?２１．４５±１．５９?２１．３９土?１．８５?１９．５９±１．１１??ＡＲＢ?２０．９２ｉ０．８７?２０．８３±１．３４?１９．８２±１．８９?２０．０３土?１．７３?２０．２５土?１．１３??ＳＫＩ－Ｈ?２０．６８ｉ０．６１?２１．８３?士０．８０?２１．９０±０．５５?２２．２２士０．５９?２０．４７士?１．１４??ＳＫＩ－Ｍ?２０．７９ｉｌ．ｌｌ?２１．６２?土?１．２９?２０．６７士２．２６?２１．９０±１．１２?１９．９１?土?１．１０??ＳＫＩ－Ｌ?２１．２１?士０．５２?２１．６４士０．９８?２２．３２±０．９８?２２．７０±１．０９?２０．８０±０．９７??

模型組及各治療組小鼠患側(cè)腎臟顏色蒼白，體積增大，外觀腫脹呈囊性，內(nèi)含大量渾濁??水液，腎重明顯增加；切面可見腎孟、腎盞擴(kuò)張，腎實(shí)質(zhì)髓質(zhì)萎縮分界模糊，上述表明??造模成功。（見
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本文編號(hào)：2872462