目的:娑羅子為七葉樹科植物七葉樹、浙江七葉樹或天師栗的干燥成熟種子,有和胃止痛,理氣、疏肝的功效;臨床常用于治療肝胃氣滯,胃脘疼痛,胸腹脹滿等病癥。七葉皂苷是娑羅子提取物的主要活性成分,其抗炎消腫、抗氧化、降低神經(jīng)損傷、抗腫瘤作用等藥理作用明顯,七葉皂苷多以鈉鹽的形式應(yīng)用于臨床,主要用于治療術(shù)后水腫、慢性靜脈功能不全、腦溢血、顱腦損傷等疾病。娑羅子中化學(xué)成分復(fù)雜,為了更好控制其質(zhì)量,本實(shí)驗(yàn)對(duì)產(chǎn)自于陜西、河南、浙江、湖北、廣西等地區(qū)10批娑羅子藥材進(jìn)行研究,建立了指紋圖譜并進(jìn)行了 LC-MS分析,以期為娑羅子藥材質(zhì)量控制提供思路參考和依據(jù)。此外,目前文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)于娑羅子中七葉皂苷提取分離工藝大都采用有機(jī)試劑方法,處于實(shí)驗(yàn)室探索階段,本文通過大孔樹脂工藝對(duì)主要有效成分七葉皂苷部位(β-七葉皂苷,即七葉皂苷A、七葉皂苷B)進(jìn)行了富集純化,以獲得高含量(50%以上)的皂苷部位中間體,更好的為生活生產(chǎn)服務(wù)。方法:1本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-PDA技術(shù)對(duì)娑羅子70%濃度乙醇的提取物進(jìn)行指紋圖譜研究,首先通過對(duì)柱溫、流動(dòng)相、波長(zhǎng)、提取溶劑濃度因素等進(jìn)行了單因素考察,在此基礎(chǔ)上確定指紋圖譜實(shí)驗(yàn)條件,建立娑羅子指紋圖譜。依據(jù)國(guó)家藥典委員會(huì)出版的《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)A版》軟件進(jìn)行分析,生成娑羅子的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜,確定共有峰,以七葉皂苷A作為參照峰,進(jìn)行相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的計(jì)算。2在指紋圖譜色譜條件下采用HPLC-MS技術(shù)對(duì)娑羅子藥材乙醇提取液進(jìn)行檢測(cè)和分析,通過分析探討質(zhì)譜裂解規(guī)律及與相關(guān)文獻(xiàn)比對(duì),推測(cè)可能化學(xué)成分,研究娑羅子藥材化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。3以娑羅子七葉皂苷提取率為指標(biāo),同時(shí)兼顧出膏率因素影響,在對(duì)提取時(shí)間(c1h、c2h、c3h、c4h、c5h)、乙醇濃度(ai%、a2%、a3%、a4%、a5%)、提取次數(shù)(d1次、d2次、d3次、d4次、d5次)、料液比(b1倍、b2倍、b3倍、b4倍、b5倍)等單因素考察基礎(chǔ)上,再選擇合適因素水平進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn),參照考察指標(biāo)確立最佳提取工藝并驗(yàn)證。4首先以吸附率和解吸附率為指標(biāo)優(yōu)選合適的娑羅子七葉皂苷純化富集工藝大孔吸附樹脂,再以七葉皂苷A、七葉皂苷B含量及其轉(zhuǎn)移率為考察指標(biāo),采用單因素考察的方法對(duì)大孔樹脂純化工藝上樣濃度(e1g/mL、e2g/mL、e3g/mL、e4g/mL、e5g/mL生藥量)、上樣流速(f1BV/h、f2BV/h、f3BV/h、f4BV/h 和 f5BV/h)、醇洗濃度(a1%、a2%、a3%、a4%、a5%)、醇洗流速(f1 BV/h、f2BV/h、f3BV/h、f4BV/h 和 f5BV/h)、徑高比(g1、g2、g3)水平進(jìn)行優(yōu)化,進(jìn)行下一步的L9(34)正交純化工藝試驗(yàn),獲得穩(wěn)定的純化富集工藝。5運(yùn)用優(yōu)選出的最佳提取純化工藝制備方法考察10批中間體小樣(不同產(chǎn)地的10批藥材)七葉皂苷A、七葉皂苷B含量,初步確定由本工藝制得的中間體方法合理性。結(jié)果:110批娑羅子藥材含有13個(gè)共有色譜峰,通過標(biāo)準(zhǔn)品指認(rèn)了七葉皂苷A、七葉皂苷B、七葉皂苷C、七葉皂苷D色譜峰,不同批次娑羅子藥材共有峰相對(duì)保留時(shí)間RSD較小,而相對(duì)峰面積的RSD較大,在10批娑羅子藥材中大部分相似度在0.9以上,有三批產(chǎn)地藥材相似度差異較大,小于0.9。不同產(chǎn)地間娑羅子藥材化學(xué)成分大體相同,但含量存在差別。2通過HPLC-MS分析技術(shù),探討質(zhì)譜裂解規(guī)律及與相關(guān)文獻(xiàn)比對(duì),推測(cè)鑒定了娑羅子中15個(gè)化學(xué)成分。3娑羅子中七葉皂苷最佳提取工藝為:取適量娑羅子藥材,加入b2倍量a4%乙醇浸泡1h后,加熱回流提取,提取d2次,提取時(shí)間為每次c1h,過濾,合并2次提取液,即得。4娑羅子中七葉皂苷最佳富集工藝為:采用C型大孔樹脂純化富集七葉皂苷部位,上樣濃度為e5g/mL,上樣流速為f1BV/h,乙醇洗脫濃度為a3%濃度乙醇,乙醇洗脫流速為f2BV/h,樹脂柱徑高比為g2,主要收集從第3/4個(gè)柱體積到第3個(gè)柱體積的前3/4部分的a3%乙醇洗脫液。5不同產(chǎn)地的10批藥材均可以獲得七葉皂苷A、七葉皂苷B含量為50%以上的中間體,初步確定由本工藝制得的中間體方法合理性。結(jié)論:該指紋圖譜研究方法精密度、穩(wěn)定性及重復(fù)性良好,不同產(chǎn)地娑羅子相似性程度不同,來自陜西漢中的5批藥材與河南產(chǎn)地娑羅子相似度較高,相似度在0.9以上,而來自浙江、湖北、廣西產(chǎn)地娑羅子藥材與其相似度較低,說明娑羅子化學(xué)成分含量與產(chǎn)地來源有較大的關(guān)聯(lián)性。結(jié)合LC-MS分析,可以為娑羅子質(zhì)量控制研究提供理論參考依據(jù)。七葉皂苷提取純化富集工藝簡(jiǎn)便易行,其含量、轉(zhuǎn)移率較高,重復(fù)性、穩(wěn)定性良好,適合于工業(yè)化生產(chǎn)需要。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284.2
【部分圖文】：

分離度較好，且主要色譜峰響應(yīng)值高，基線平穩(wěn)。因此選擇２４０?ｎｍ作為檢測(cè)波長(zhǎng)，同??時(shí)此波長(zhǎng)也符合娑羅子所含主要活性成分七葉皂苷類化合物的吸收波長(zhǎng)。不同波長(zhǎng)下的??色譜圖如圖１－３所示。??４３??

２．１．５對(duì)柱溫的考察??本實(shí)驗(yàn)分別考察了?２５°Ｃ、３０°Ｃ、３５°Ｃ、４０°Ｃ柱溫對(duì)分離效果的影響，最終選擇３５°Ｃ??作為實(shí)驗(yàn)分析溫度。不同溫度考察結(jié)果色譜圖如圖１－５所示。??４７??

ＳＢ－Ａｑ（?４．?６?ｍｍ?ｘ?２５０?ｍｍ，５?｜ｉｍ）、Ｗａｔｅｒｓ?ＸＢｒｉｄｇｅ?Ｃ１８?（４．?６?ｍｍ?ｘ?２５０?ｍｍ，５?ｐｍ）等?３??種色譜柱進(jìn)行了考察，最終確定選用分離度良好、峰數(shù)最多、色譜峰信息豐富的Ａｇｉｌｅｎｔ??ＺｏｒｂａｘＳＢ－Ｃ１８（４．６ｍｍｘ?２５０?ｍｍ，５卜ｉｍ）色譜柱，各色譜柱的色譜圖如圖１－６所示。??Ｍ??ＩＮ??ＩＭ??１．１２??Ｍ??０．？??１０＃?１￣￣—／ｗＡＩＩ?Ａ＿Ｊ?Ｕａ???ｉｌ＾－Ｎ??＿？??????■ｍ??＂°＇〇．００?１００?４．００?ｉＶｌ?ｉｎ?１０＾０?１１００?１４．００?１Ｕ０?Ｗ?？．００?２．００?２４Ｊ０?５ｉ？?３．００?３０．Ｕ?３１００?３４．Ｕ?３６．００?Ｍ?４０．００?ＣＭ?Ｕ．００?４６．００?４Ｓ．ＯＯ?５０ｊ）０??Ａｇｉｌｅｎｔ?Ｚｏｒｂａｘ?ＳＢ－Ｃ１８（?４．?６?ｍｍ?ｙ?２５０?ｍｍ
【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2871857