目的:潰瘍性結(jié)腸炎,是一種病因不明的難愈疾病,目前治療手段常以腎上腺皮質(zhì)激素等抗炎藥物對(duì)癥治療為主,然而此類(lèi)藥物多以口服吸收入血后發(fā)揮作用,導(dǎo)致炎癥局部藥物濃度較低;提高口服劑量,易導(dǎo)致毒副作用增大;改良手段如局部治療藥物,經(jīng)由直腸給藥,雖能夠克服常規(guī)口服給藥的缺點(diǎn),但作用范圍受限,只能用于降結(jié)腸部位炎癥,藥物難以達(dá)到升結(jié)腸和橫結(jié)腸部位,同時(shí)可操作性低,使用不便,患者依從性差,臨床使用面較窄;口服結(jié)腸靶向給藥系統(tǒng)可利用腸道特異的pH、消化道轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間及腸道菌群特異性酶等特點(diǎn)實(shí)現(xiàn)藥物在結(jié)腸部位靶向給藥,但依然存在炎癥部位局部藥物濃度低和藥物經(jīng)結(jié)腸吸收所致的全身毒副作用等問(wèn)題。因此,近年來(lái),結(jié)腸炎癥靶向遞藥系統(tǒng)成為新的研究熱點(diǎn)。本課題利用潰瘍性結(jié)腸炎炎癥部位帶正電的病理特性,依據(jù)電荷吸附原理,選取荷負(fù)電能力較強(qiáng)的酸性多糖輔料,制備黏附型-姜黃素口服結(jié)腸炎癥靶向微丸,實(shí)現(xiàn)結(jié)腸炎癥部位的靶向遞藥,提高藥物濃度,改善藥物治療作用,為后續(xù)結(jié)腸炎癥口服靶向給藥系統(tǒng)的研究與開(kāi)發(fā)提供了新的研究思路與方法。方法:模擬結(jié)腸炎癥環(huán)境,選擇可反映潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative Colitis,UC)臨床嚴(yán)重程度的陽(yáng)離子蛋白乳鐵蛋白為指標(biāo),采用考馬斯亮藍(lán)顯色法測(cè)定透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、海藻酸鈉與果膠與乳鐵蛋白作用前后的蛋白含量變化,篩選具有最佳荷負(fù)電能力的酸性多糖輔料。采用體外黏附實(shí)驗(yàn),以葡聚糖硫酸鈉(Dextran sulphate sodium salt,DSS)為模型藥物,建立急性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型,取炎癥腸段,與所得酸性多糖輔料孵育,通過(guò)半定量熒光成像,檢驗(yàn)所篩選得出的酸性多糖輔料的荷負(fù)電能力。確定其荷負(fù)電能力后,選取該種酸性多糖輔料、姜黃素荷負(fù)電自微乳及微晶纖維素為材料,制備姜黃素結(jié)腸炎癥靶向微丸丸芯,以收率為評(píng)價(jià)指標(biāo),通過(guò)Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)法優(yōu)化處方及工藝。優(yōu)化完成后,考察其圓整度、堆密度等性質(zhì)。合格后,考察尤特奇S100、尤特奇L100及尤特奇L100-55三種包衣材料的性質(zhì),選擇在胃內(nèi)不崩解、穩(wěn)定的包衣材料及處方對(duì)微丸丸芯進(jìn)行包衣。包衣完成后,使用小動(dòng)物活體熒光成像,對(duì)比已包衣微丸及未包衣微丸的靶向性及釋放特性,觀察其是否能達(dá)到結(jié)腸靶向及緩控釋目的。結(jié)果:在模擬結(jié)腸炎癥的各酸性pH下,果膠荷負(fù)電能力最強(qiáng),能與乳鐵蛋白產(chǎn)生最為緊密結(jié)合,使結(jié)合后的乳鐵蛋白溶液吸光度值顯著下降。確定果膠為結(jié)腸炎癥靶向微丸的酸性多糖輔料。而體外炎癥腸段黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與未加入果膠的空白荷負(fù)電自微乳相比,加入果膠之后的自微乳能在結(jié)腸炎癥部位具有更好的黏附及靶向作用。此后,最優(yōu)丸芯制備處方工藝為:輔料果膠與輔料微晶纖維素(Microcrystalline cellulose,MCC)加入量比例為0.35,主藥姜黃素荷負(fù)電自微乳與輔料MCC加入量比例為0.5,滾圓時(shí)間4.5min。實(shí)驗(yàn)使用處方為:MCC 8g時(shí),潤(rùn)濕劑水4ml,擠出速度200 r·min~(-1),滾圓轉(zhuǎn)速2000 r·min~(-1),滾圓時(shí)間4.5min,后干燥15min,即可獲得相應(yīng)光滑圓整的姜黃素結(jié)腸炎癥靶向微丸丸芯。最佳包衣材料及處方工藝為:尤特奇S100(包衣材料)6.25g,枸櫞酸三乙酯0.63g,滑石粉1.25g按條件溶于91.87g乙醇中。包衣鍋轉(zhuǎn)速60rpm,控制熱風(fēng)溫度60℃,噴槍壓力適當(dāng)。包衣至增重達(dá)到15%后,調(diào)整熱風(fēng)溫度至80℃,繼續(xù)熱吹風(fēng)半小時(shí),形成連續(xù)致密的包衣層。分別將未包衣微丸及包衣后微丸給予小鼠,由熒光成像結(jié)果可知,未包衣微丸釋放趨勢(shì)為:由進(jìn)入胃部開(kāi)始釋放,熒光強(qiáng)度由強(qiáng)至弱。包衣微丸釋放趨勢(shì)為:在胃部并無(wú)釋放,進(jìn)入小腸開(kāi)始釋放,熒光強(qiáng)度總體表現(xiàn)為無(wú)→有→強(qiáng)→弱。包衣微丸與未包衣微丸在釋放趨勢(shì)上呈現(xiàn)出顯著差異。證明包衣穩(wěn)定且有效。同時(shí),自8h開(kāi)始至12h,包衣微丸都位于結(jié)腸部位釋放藥物,顯示出較強(qiáng)的熒光強(qiáng)度,可以推斷微丸能夠定位于結(jié)腸部位并于結(jié)腸部位有一定滯留性,基于此點(diǎn)釋放藥物,能夠達(dá)到結(jié)腸炎癥靶向的目的。結(jié)論:利用乳鐵蛋白模型篩選的酸性多糖輔料果膠具有良好的荷負(fù)電能力,能通過(guò)正負(fù)電吸附原理與乳鐵蛋白產(chǎn)生緊密結(jié)合。而由體外黏附實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果可知,對(duì)比空白組,果膠組在結(jié)腸炎癥部位具有更強(qiáng)熒光強(qiáng)度,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),推測(cè)其在結(jié)腸炎癥部位具有更強(qiáng)的黏附性及靶向性。此后利用Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)法優(yōu)化了姜黃素結(jié)腸炎癥靶向微丸丸芯的處方制備工藝,擬合方程R~20.9,P0.001,方程預(yù)測(cè)性好,模型建立成功。根據(jù)模型預(yù)測(cè)條件,成功制備具有較高收率,較大含藥量的微丸丸芯,該丸芯質(zhì)量合格,性質(zhì)穩(wěn)定。包衣材料尤特奇S100性質(zhì)穩(wěn)定,所制備腸溶微丸質(zhì)量合格,增重達(dá)到預(yù)期。利用小動(dòng)物活體成像方法檢驗(yàn)姜黃素結(jié)腸炎癥靶向微丸的結(jié)腸靶向作用,包衣微丸顯示出與未包衣微丸截然不同的釋放趨勢(shì),具有明顯的結(jié)腸靶向作用,且在結(jié)腸部位滯留時(shí)間長(zhǎng),黏附性好。因此可以推斷,所制備的姜黃素結(jié)腸炎癥靶向微丸,對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎應(yīng)具有較優(yōu)的治療效果,對(duì)結(jié)腸炎癥具有良好的靶向作用,能夠?yàn)楹罄m(xù)的治療研究提供新思路、新方法。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R283.6
【部分圖文】：
使用自制灌胃器分別將未包衣微丸與包衣微丸灌胃至小鼠體內(nèi),分別于0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12 h用小動(dòng)物活體熒光成像系統(tǒng)檢測(cè)微丸在小鼠體內(nèi)的位置及觀測(cè)其釋放情況,結(jié)果如圖3.3.1,圖3.3.2。圖3.3.2包衣熒光微丸分別于0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12 h成像情況
2包衣熒光微丸分別于0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12 h成像情況
各輔料的紫外全波長(zhǎng)掃描結(jié)果顯示(圖3.1.1),在蛋白質(zhì)-色素結(jié)合物的紫外最大吸收波長(zhǎng)處(595nm)無(wú)吸收峰,對(duì)后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不會(huì)產(chǎn)生影響。因此,本實(shí)驗(yàn)選擇595nm為檢測(cè)波長(zhǎng)測(cè)定乳鐵蛋白的含量。圖3.1.1各輔料紫外全波長(zhǎng)掃描結(jié)果
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2865087
