胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤生物學(xué)行為影響、胡桃醌-PLGA納米粒制備及抑瘤作用評(píng)價(jià)
【學(xué)位單位】:南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2019
【中圖分類】:R283.6;R285
【文章目錄】:
中文摘要
Abstract
引言
一、惡性黑色素瘤的治療藥物現(xiàn)狀
二、中醫(yī)藥對(duì)惡性黑色素瘤的認(rèn)識(shí)與治療研究
三、中藥青龍衣及其主要成分胡桃醌抗腫瘤作用研究
第一部分 胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞生物學(xué)行為影響
一、胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1.1 細(xì)胞株
1.1.2 主要試劑
1.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 藥物配置及分組
1.2.2 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖
1.2.3 DAPI染色觀察藥物對(duì)細(xì)胞凋亡影響
1.2.3 Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
1.2.4 PI單染法檢測(cè)細(xì)胞周期
1.2.5 蛋白免疫印跡法檢測(cè)蛋白表達(dá)
1.3 統(tǒng)計(jì)方法
1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.4.1 胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞增殖影響
1.4.2 胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞凋亡影響
1.4.3 胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞周期影響
二、胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞侵襲、遷移的影響
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.1 細(xì)胞株
2.1.2 主要試劑
2.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.1 0.1%結(jié)晶紫染液配制
2.2.2 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胡桃醌對(duì)惡黑細(xì)胞遷移影響
2.2.3 Transwell實(shí)驗(yàn)(不含基質(zhì)膠)檢測(cè)胡桃醌對(duì)惡黑細(xì)胞遷移影響
2.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)(含基質(zhì)膠)檢測(cè)胡桃醌對(duì)惡黑細(xì)胞侵襲影響
2.3 統(tǒng)計(jì)方法
2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.4.1 胡桃醌對(duì)惡黑細(xì)胞侵襲及遷移的影響
三、討論
四、結(jié)論
第二部分 胡桃醌-PLGA納米粒制備及抑瘤作用評(píng)價(jià)
一、胡桃醌-PLGA納米粒子制備
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1.1 細(xì)胞株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
1.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 納米粒子制備
1.2.2 納米粒子的粒徑分布及電鏡形態(tài)
1.2.3 胡桃醌濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
1.2.4 Jug-PLGA-NPs的包封率及載藥量測(cè)定
1.2.5 Jug-PLGA-NPs粒徑穩(wěn)定性檢測(cè)
1.2.6 Jug-PLGA-NPs的體外釋放實(shí)驗(yàn)
1.3 統(tǒng)計(jì)方法
1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.4.1 各處方制備Jug-PLGA-NPs外觀
1.4.2 各處方制備納米粒子粒徑、包封率及載藥量
1.4.3 納米粒的表征
1.4.4 納米粒子的穩(wěn)定性及體外釋放
二、胡桃醌-PLGA納米粒體外對(duì)A375細(xì)胞增殖影響及體內(nèi)外靶向性驗(yàn)證
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及動(dòng)物
2.1.2 主要試劑
2.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
2.2.1 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞増殖影響
2.2.2 Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
2.2.3 Jug-PLGA-NPs的體外細(xì)胞攝取
2.2.4 荷瘤裸鼠活體成像
2.3 統(tǒng)計(jì)方法
2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.4.1 胡桃醌裸藥及納米粒對(duì)A375惡黑細(xì)胞增殖影響比較
2.4.2 胡桃醌裸藥及納米粒對(duì)A375惡黑細(xì)胞促凋亡作用比較
2.4.3 PLGA納米粒子的體外攝取及體內(nèi)靶向情況
三、胡桃醌-PLGA納米粒對(duì)A375細(xì)胞體內(nèi)抑瘤作用評(píng)價(jià)
3.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
3.1.2 主要試劑
3.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
3.2 實(shí)驗(yàn)方法及流程
3.2.1 荷A375惡黑細(xì)胞皮下瘤動(dòng)物模型造模
3.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方式及劑量
3.2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀測(cè)指標(biāo)及處理流程
3.2.4 腫瘤組織CyclinD1免疫組化
3.2.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)臟HE染色
3.3 統(tǒng)計(jì)方法
3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.4.1 胡桃醌裸藥及納米粒體內(nèi)抑瘤作用比較
3.4.2 藥物體內(nèi)毒性分析
四、討論
五、結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄: (中英文縮略詞對(duì)照)
攻讀碩士期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝
【相似文獻(xiàn)】
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