發(fā)布時(shí)間：2020-10-28 11:52

　　 第一部分胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯探究胡桃醌(Juglone,Jug)對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞系的生物學(xué)行為的影響及相關(guān)機(jī)制的初步探究。[實(shí)驗(yàn)方法]采用噻唑藍(lán)(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide,MTT)法檢測(cè)Jug對(duì)A375、A2058惡黑細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率并計(jì)算IC50值。流式細(xì)胞儀檢測(cè)Jug對(duì)惡黑細(xì)胞的周期及凋亡影響。蛋白免疫印跡法(Weastem blot,WB)檢測(cè)Jug對(duì)惡黑細(xì)胞干預(yù)后凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2及周期相關(guān)蛋白CyclinDl表達(dá)的影響。劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Jug對(duì)黑色素瘤細(xì)胞侵襲及遷移的影響。[實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論]Jug對(duì)A375、A2058惡黑存在明顯抑制增殖作用,且存在明顯的時(shí)間及濃度依賴,24h IC50值分別為:3.31μg/mL、2.81μg/mL;48h IC50值為:2.33μg/mL、2.16μg/mL。Jug可以通過(guò)增加促凋亡蛋白Bax表達(dá)及減少抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)誘導(dǎo)A375、A2058惡黑細(xì)胞凋亡。Jug可以通過(guò)影響周期相關(guān)蛋白CyclinD1的表達(dá)將A375、A2058惡黑細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。Jug可以明顯降低A375、A2058惡黑細(xì)胞侵襲及遷移能力。第二部分胡桃醌-PLGA納米粒制備及抑瘤作用評(píng)價(jià)[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯制備胡桃醌-聚乳酸-羥基乙酸(PLGA)納米粒,考察其理化性質(zhì)。評(píng)價(jià)其對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞系A(chǔ)375及裸鼠皮下的抑瘤作用及相關(guān)安全性考察。[實(shí)驗(yàn)方法]采用乳化揮發(fā)法制備Jug-PLGA-NPs,對(duì)其粒徑、包封率、載藥率以及體外釋放特征進(jìn)行考察。熒光顯微鏡觀察PLGA-NPs在體外細(xì)胞的攝取情況,小動(dòng)物活體成像儀觀測(cè)PLGA-NPs在BALB/c荷瘤裸鼠尾靜脈注射后體內(nèi)的分布。用MTT法比較Jug-PLGA-NPs與Jug對(duì)A375惡黑細(xì)胞增殖抑制作用,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。構(gòu)建A375裸鼠皮下瘤模型,評(píng)價(jià)Jug及Jug-PLGA-NPs的抑瘤作用,處死后對(duì)內(nèi)臟組織進(jìn)行組織形態(tài)觀察,對(duì)腫瘤組織行CyclinD1蛋白免疫組化檢測(cè)并分析。[實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論]制備的Jug-PLGA-NPs平均粒徑為149.6nm,包封率為68.39%,載藥率5.07%,具有良好的緩釋特征。PLGA-NPs在體外細(xì)胞攝取和體內(nèi)活體成像中具有良好的穿透和靶向性能。不同濃度Jug-PLGA-NPs均能明顯抑制A375細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡,且呈明顯時(shí)間濃度依賴(P0.05),且48h時(shí)略優(yōu)于等濃度Jug。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中Jug與Jug-PLGA-NPs均展現(xiàn)出良好的抑瘤效果,而納米粒組抑瘤作用更好且小鼠耐受性更佳。結(jié)論:負(fù)載Jug的PLGA納米微粒制備簡(jiǎn)便,具有良好的藥物緩釋、腫瘤靶向及體內(nèi)外抗腫瘤能力,且生物安全性尚可,為未來(lái)Jug的臨床應(yīng)用提供了一種新的藥物劑型。
【學(xué)位單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R283.6;R285
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
    一、惡性黑色素瘤的治療藥物現(xiàn)狀
    二、中醫(yī)藥對(duì)惡性黑色素瘤的認(rèn)識(shí)與治療研究
    三、中藥青龍衣及其主要成分胡桃醌抗腫瘤作用研究
第一部分 胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞生物學(xué)行為影響
    一、胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞增殖的影響
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 細(xì)胞株
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 藥物配置及分組
            1.2.2 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖
            1.2.3 DAPI染色觀察藥物對(duì)細(xì)胞凋亡影響
            1.2.3 Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            1.2.4 PI單染法檢測(cè)細(xì)胞周期
            1.2.5 蛋白免疫印跡法檢測(cè)蛋白表達(dá)
        1.3 統(tǒng)計(jì)方法
        1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1.4.1 胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞增殖影響
            1.4.2 胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞凋亡影響
            1.4.3 胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞周期影響
    二、胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞侵襲、遷移的影響
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 細(xì)胞株
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 0.1%結(jié)晶紫染液配制
            2.2.2 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)胡桃醌對(duì)惡黑細(xì)胞遷移影響
            2.2.3 Transwell實(shí)驗(yàn)（不含基質(zhì)膠）檢測(cè)胡桃醌對(duì)惡黑細(xì)胞遷移影響
            2.2.4 Transwell實(shí)驗(yàn)（含基質(zhì)膠）檢測(cè)胡桃醌對(duì)惡黑細(xì)胞侵襲影響
        2.3 統(tǒng)計(jì)方法
        2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.4.1 胡桃醌對(duì)惡黑細(xì)胞侵襲及遷移的影響
    三、討論
    四、結(jié)論
第二部分 胡桃醌-PLGA納米粒制備及抑瘤作用評(píng)價(jià)
    一、胡桃醌-PLGA納米粒子制備
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 細(xì)胞株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 納米粒子制備
            1.2.2 納米粒子的粒徑分布及電鏡形態(tài)
            1.2.3 胡桃醌濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
            1.2.4 Jug-PLGA-NPs的包封率及載藥量測(cè)定
            1.2.5 Jug-PLGA-NPs粒徑穩(wěn)定性檢測(cè)
            1.2.6 Jug-PLGA-NPs的體外釋放實(shí)驗(yàn)
        1.3 統(tǒng)計(jì)方法
        1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1.4.1 各處方制備Jug-PLGA-NPs外觀
            1.4.2 各處方制備納米粒子粒徑、包封率及載藥量
            1.4.3 納米粒的表征
            1.4.4 納米粒子的穩(wěn)定性及體外釋放
    二、胡桃醌-PLGA納米粒體外對(duì)A375細(xì)胞增殖影響及體內(nèi)外靶向性驗(yàn)證
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及動(dòng)物
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1     MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞増殖影響
            2.2.2     Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
            2.2.3 Jug-PLGA-NPs的體外細(xì)胞攝取
            2.2.4 荷瘤裸鼠活體成像
        2.3 統(tǒng)計(jì)方法
        2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            2.4.1 胡桃醌裸藥及納米粒對(duì)A375惡黑細(xì)胞增殖影響比較
            2.4.2 胡桃醌裸藥及納米粒對(duì)A375惡黑細(xì)胞促凋亡作用比較
            2.4.3 PLGA納米粒子的體外攝取及體內(nèi)靶向情況
    三、胡桃醌-PLGA納米粒對(duì)A375細(xì)胞體內(nèi)抑瘤作用評(píng)價(jià)
        3.1 實(shí)驗(yàn)材料
            3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            3.1.2 主要試劑
            3.1.3 主要儀器及實(shí)驗(yàn)器材
        3.2 實(shí)驗(yàn)方法及流程
            3.2.1 荷A375惡黑細(xì)胞皮下瘤動(dòng)物模型造模
            3.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及給藥方式及劑量
            3.2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀測(cè)指標(biāo)及處理流程
            3.2.4 腫瘤組織CyclinD1免疫組化
            3.2.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)臟HE染色
        3.3 統(tǒng)計(jì)方法
        3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.4.1 胡桃醌裸藥及納米粒體內(nèi)抑瘤作用比較
            3.4.2 藥物體內(nèi)毒性分析
    四、討論
    五、結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄: （中英文縮略詞對(duì)照）
攻讀碩士期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 Guozhuan Li;Liang Yao;Jing Li;Xiaoyan Qin;Zhen Qiu;Weidong Chen;;Preparation of poly(lactide-co-glycolide)microspheres and evaluation of pharmacokinetics and tissue distribution of BDMC-PLGA-MS in rats[J];Asian Journal of Pharmaceutical Sciences;2018年01期

2 Jingchen Gao;Siyuan Chen;Di Tang;Li Jiang;Jie Shi;Shufang Wang;;Mechanical Properties and Degradability of Electrospun PCL/PLGA Blended Scaffolds as Vascular Grafts[J];Transactions of Tianjin University;2019年02期

3 BI Yan-xue;DING Xi-li;ZHOU Gang;LIU Hai-feng;FAN Yu-bo;;Modification of PLGA Scaffolds for Vascular Tissue Engineering[J];Chinese Journal of Biomedical Engineering;2017年03期

4 Miao Zhou;Chen Xiaoming;Lai Yuxiao;Li Shuyi;Cao Shuaishuai;;Biological Evaluation of Three-dimensional Printed PLGA/TCP Scaffold for Jaw Restoration[J];功能材料信息;2016年04期

5 林柳蘭;GAO Haitao;;Modifi cation of β-TCP/PLGA Scaffold and Its Effect on Bone Regeneration in vivo[J];Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science);2016年02期

6 Rui-ling Qi;Xue-jiao Tian;郭睿;Yu Luo;Ming-wu Shen;Jian-yong Yu;史向陽(yáng);;Controlled Release of Doxorubicin from Electrospun MWCNTs/PLGA Hybrid Nanofibers[J];Chinese Journal of Polymer Science;2016年09期

7 LIN Yong Xin;DING Zhi Yong;ZHOU Xiao Bin;LI Si Tao;XIE De Ming;LI Zhi Zhong;SUN Guo Dong;;In vitro and In vivo Evaluation of the Developed PLGA/HAp/Zein Scaffolds for Bone-Cartilage Interface Regeneration[J];Biomedical and Environmental Sciences;2015年01期

8 李爽;呂邵娃;李永吉;楊志欣;趙義軍;;丁香苦苷單體與丁香苦苷PLGA納米粒藥動(dòng)學(xué)比較[J];哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年02期

9 王利;陳衛(wèi)東;;吉非替尼PLGA微球的制備與體外釋放研究[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年10期

10 王利;陳衛(wèi)東;;高效液相色譜法測(cè)定吉非替尼PLGA微球吉非替尼的含量[J];中南藥學(xué);2013年07期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 蔡娟;負(fù)載多西他賽和PI3K抑制劑的納米載藥系統(tǒng)對(duì)胃癌的抑制作用評(píng)價(jià)[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

2 張永濤;多層PLGA支架聯(lián)合PRP修復(fù)兔膝關(guān)節(jié)骨軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

3 毛景松;含納米材料的多功能微球在兔VX2肝腫瘤治療中的作用及生物安全性研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2018年

4 姚愛(ài)瑋（PIYACHAT ROOPNGAM）;應(yīng)用可降解佐劑與樹(shù)突細(xì)胞增強(qiáng)癌癥相關(guān)病毒免疫治療[D];清華大學(xué);2017年

5 楊芝明;溫度敏感性PLGA-PEG-PLGA水凝膠包載化療藥物用于骨肉瘤原位治療的研究[D];吉林大學(xué);2018年

6 Khawar Ali Shahzad（哈瓦）;殺傷性PLGA納米粒誘導(dǎo)小鼠同種皮膚免疫耐受的研究[D];東南大學(xué);2018年

7 張雷;多功能PLGA微粒式人工抗原提呈細(xì)胞對(duì)腫瘤的主動(dòng)免疫治療[D];東南大學(xué);2018年

8 吳剛;可注射式多元RADA肽凝膠的構(gòu)建及其成骨性能的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

9 朱宇航;可注射型微/納米混合PGA纖維增強(qiáng)HA/PLGA復(fù)合支架材料修復(fù)骨缺損[D];吉林大學(xué);2018年

10 李建安;CBD-IGF-1的制備及復(fù)合PLGA導(dǎo)管在神經(jīng)損傷修復(fù)中的作用[D];吉林大學(xué);2018年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳群;PLGA支架上HGFs整合素α5β1力學(xué)信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

2 周強(qiáng)強(qiáng);甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白/聚乳酸—羥基乙酸（PTHrP/PLGA）復(fù)合微球?qū)ζ乒羌?xì)胞增殖分化作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2019年

3 張彬;3D打印制備PLGA/ACECM組織工程軟骨支架修復(fù)兔軟骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2019年

4 張廣興;甘草次酸PLGA微球成型過(guò)程中的溶劑效應(yīng)研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2017年

5 錢凱;PLGA結(jié)合膠質(zhì)源性神經(jīng)細(xì)胞移植治療大鼠脊髓損傷[D];南京醫(yī)科大學(xué);2019年

6 付彪;PLGA納米顆粒負(fù)載人肝素酶疫苗體外抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究[D];西南醫(yī)科大學(xué);2019年

7 岳武恒;胡桃醌對(duì)惡性黑色素瘤生物學(xué)行為影響、胡桃醌-PLGA納米粒制備及抑瘤作用評(píng)價(jià)[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

8 董丹丹;基于紅細(xì)胞膜包裹PLGA納米粒自供氧藥物遞送系統(tǒng)的研究[D];鄭州大學(xué);2019年

9 羅莉;山藥多糖PLGA納米粒的制備及其免疫增強(qiáng)作用的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

10 姜駱永;PLGA/n-HA/α-Fe_2O_3復(fù)合界面螺釘?shù)闹苽浼氨碚餮芯縖D];深圳大學(xué);2018年

本文編號(hào)：2860054