目的:對秦嶺地區(qū)的北柴胡樣品進行遺傳多樣性分析,建立北柴胡藥材質量評價方法,篩選出秦嶺地區(qū)優(yōu)質北柴胡產(chǎn)地。方法:使用CTAB法提取北柴胡樣品基因組總DNA,采用通用引物mat K,進行PCR擴增,對PCR產(chǎn)物進行測序,對不同產(chǎn)地北柴胡的遺傳多樣性進行分析;采用UPLC法,乙腈-0.1%磷酸水為流動相進行梯度洗脫,檢測波長210 nm,柱溫30℃,體積流速0.2 m L?min-1,測定不同產(chǎn)地樣品柴胡皂苷類成分的含量,分析不同產(chǎn)地北柴胡樣品皂苷含量的差異性及變化趨勢;采用UPLC法,乙腈-0.1%磷酸水為流動相梯度洗脫,檢測波長210 nm,柱溫30℃,體積流速0.2m L?min-1,建立不同產(chǎn)地北柴胡醇溶性指紋圖譜,采用SPSS 23.0及SIMCA 14.1軟件對樣品數(shù)據(jù)進行聚類分析及主成分分析;采用UPLC法,乙腈-0.1%磷酸水為流動相梯度洗脫,檢測波長254 nm,柱溫30℃,體積流速0.2 m L?min-1,建立不同產(chǎn)地北柴胡水溶性指紋圖譜,通過聚類分析及主成分分析對數(shù)據(jù)進行分析。結果:北柴胡mat K序列長度為508 bp,34個樣本分為8個單倍型,堿基突變率為1.57%,進化樹聚類結果,部分甘肅省產(chǎn)北柴胡栽培品與野生品可聚為一類,陜西省及山西省產(chǎn)北柴胡部分栽培品與甘肅省產(chǎn)北柴胡樣品聚為一類;皂苷類成分含量研究顯示甘肅產(chǎn)北柴胡藥材(2年生以上)3種柴胡皂苷含量高于平均值9.8705 mg?g-1,陜西產(chǎn)北柴胡皂苷含量接近均值,而山西產(chǎn)北柴胡皂苷含量低于均值,且具有較大的波動性;在建立的不同產(chǎn)地的北柴胡藥材醇溶性指紋圖譜中,標定出14個共有峰,樣品相似度分析,除S17外,其余樣品相似度均高于0.902,聚類分析顯示,甘肅產(chǎn)北柴胡藥材聚類較集中,主成分分析提取出4種主成分,分別為5號峰SSa,8號峰SSd及兩種未知成分10號峰與14號峰。在建立的不同產(chǎn)地北柴胡水溶性指紋圖譜中,標定出18個共有峰,樣品相似度分析顯示,除S17外,其余樣品相似度均高于0.905,聚類分析顯示,3個省份北柴胡樣品,山西省產(chǎn)樣品聚類較分散,甘肅省產(chǎn)樣品聚類距離較近,主成分分析提取出5種主成分,為11號峰SSb2及4種未知化合物,其中3種分別對應5號峰、13號峰、16號峰。結論:通過對秦嶺地區(qū)不同產(chǎn)地北柴胡遺傳多樣性分析,發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地北柴胡樣品遺傳距離較小,具有較近的親緣關系,可認為北柴胡植物形態(tài)的差異性主要是生長環(huán)境的不同導致;通過對北柴胡樣品皂苷類成分含量的研究、醇溶性指紋圖譜及水溶性指紋圖譜研究,發(fā)現(xiàn)秦嶺地區(qū)北柴胡藥材以甘肅省產(chǎn)藥材皂苷類成分含量較高,質量較穩(wěn)定,陜西產(chǎn)藥材次之,而山西省產(chǎn)北柴胡藥材皂苷類含量較低,波動性較大,質量差異性較大。
【學位單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R284
【部分圖文】：

第一章 秦嶺地區(qū)北柴胡遺傳多樣性研究，置于電泳槽中；④點樣：移取 1μL 6×Loading Buffer，移取 5 μL DNA溶合均勻后加入點樣孔中，另取 5 μL λPst Ι Marker加入點樣孔中；⑤電泳：泳儀，調(diào)節(jié)電壓為 150 V，電流為 150 mA，電泳 40 min；⑥紫外檢測：成像系統(tǒng)，和觀察電泳結果，拍照記錄。結果見圖 1-1。

matK序列PCR擴增產(chǎn)物Fig.1-2matKsequencePCRamlificationproducts

圖 1-3 測序結果Fig.1-3 Sequencing result2.5 數(shù)據(jù)處理與分析2.5.1 序列拼接對比及序列特點分析利用 DNASTAR軟件中的 SeqMAN 進行序列拼接。使用 BioEdit軟件進行序列比對，去除低質量序列得到目的基因序列。主要變異位點在 10-20bp、160-210bp、230bp、290-310bp 及 460-470bp 之間，結果見圖 1-4。
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本文編號：2856272