神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病的病灶以及發(fā)病機(jī)制都較為復(fù)雜,且對(duì)機(jī)體損害較大,對(duì)老年人身體和心靈的健康造成嚴(yán)重的威脅。由突觸的變性以及神經(jīng)元的丟失所引起的阿爾茨海默癥(Alzheimer's disease;AD)又被稱作老年癡呆病,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病之一,其發(fā)病機(jī)制不明,治療藥物有限。該疾病的臨床特點(diǎn)是學(xué)習(xí)及記憶能力受損,以及認(rèn)知功能缺陷。AD在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)并且還沒有良好治愈的方法,亟待研發(fā)高效、低毒的AD防治藥物。真菌被用作功能性食品,表現(xiàn)出多種藥理活性,副作用少,常作為藥物使用。蜜環(huán)菌(Armillaria mellea)又稱榛蘑,是一種藥食兩用真菌,已經(jīng)在東亞地區(qū)使用了數(shù)百年。用于傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的蜜環(huán)菌,具有很多藥理作用,包括延緩衰老,催眠鎮(zhèn)靜,提高機(jī)體免疫力等。多糖作為蜜環(huán)菌的主要成分,具有清除超氧化物自由基的能力,表現(xiàn)出抗氧化性質(zhì)。然而,蜜環(huán)菌對(duì)阿爾茨海默癥的影響尚未得到系統(tǒng)報(bào)道。本文主要從抗氧化和抗凋亡途徑研究蜜環(huán)菌多糖對(duì)阿爾茨海默癥的治療效果及初步機(jī)制。本研究包括以下幾部分:1.蜜環(huán)菌胞內(nèi)粗多糖的制備本研究通過熱水浸提法,sevag法,透析,分級(jí)醇沉等步驟得到一系列不同乙醇濃度醇沉的粗多糖,命名為AMPSa~e,得率分別為0.93%,1.30%,1.93%,1.60%,1.00%。采用70%乙醇沉淀獲得的蜜環(huán)菌多糖(AMPSc)在L-谷氨酸(L-Glu)誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞凋亡模型和AlCl_3加D-半乳糖(D-gal)誘導(dǎo)的AD小鼠模型中考察其對(duì)阿爾茨海默癥的治療作用。2.蜜環(huán)菌多糖體外抗阿爾茨海默癥活性及機(jī)制的研究MTT法測(cè)定L-Glu誘導(dǎo)的HT22細(xì)胞凋亡模型中細(xì)胞存活率,DCFH-DA熒光染色法檢測(cè)HT22細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)的累積,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HT22細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位(MMP)的改變以及細(xì)胞凋亡比例,并通過試劑盒檢測(cè)分析HT22細(xì)胞內(nèi)caspase-3的活性。結(jié)果表明,AMPSc顯著改善細(xì)胞活力,抵抗細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞內(nèi)活性氧的積累,阻止caspase-3的活化和恢復(fù)MMP。3.蜜環(huán)菌多糖體內(nèi)抗阿爾茨海默癥活性及機(jī)制的研究在AlCl_3加D-gal誘導(dǎo)的AD小鼠模型中,經(jīng)過8周建模和4周給藥治療,進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試和生理生化指標(biāo)測(cè)定。結(jié)果表明,AMPSc增強(qiáng)了自主活動(dòng)測(cè)試中的水平運(yùn)動(dòng),在旋轉(zhuǎn)棒測(cè)試中改善了耐力時(shí)間,并減少了水迷宮測(cè)試中的逃避潛伏時(shí)間。在4周AMPSc給藥治療后,從血清和下丘腦中膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)含量的增加和乙酰膽堿(Ach)濃度的升高以及乙酰膽堿酯酶(AchE)水平的下降可以看出AD小鼠的中樞膽堿能系統(tǒng)功能得到改善。此外,AMPSc不僅可以提高AD小鼠血清及下丘腦中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性,而且還抑制了AD小鼠下丘腦中ROS的水平升高,從而改善了AD小鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激狀態(tài)。最后,AMPSc降低AD小鼠海馬神經(jīng)的凋亡,β-淀粉樣蛋白(Aβ)沉積,氧化損傷和p-Tau蛋白聚集。綜上所述,體內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)均從抗氧化和抗凋亡途徑證明了蜜環(huán)菌多糖抗阿爾茨海默癥的活性,本研究為蜜環(huán)菌多糖作為治療或預(yù)防神經(jīng)退行性疾病的神經(jīng)保護(hù)候選物提供了藥理學(xué)證據(jù)。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 2.1 蜜環(huán)菌多糖的制備Figure 2.1 The preparation of Armillaria mellea crude polysaccharides.結(jié)果與討論 胞內(nèi)多糖的提取通過熱水浸提法對(duì)蜜環(huán)菌菌絲體中的胞內(nèi)多糖進(jìn)行提取，采用 Sevag 試劑分級(jí)醇沉等方法，得到蜜環(huán)菌胞內(nèi)粗多糖（AMPS）。AMPS 為棕黃色粉末回收率為 0.76%。 分級(jí)醇沉多糖得率表 1.1 不同濃度乙醇醇沉蜜環(huán)菌多糖得率e 1.1 Effect of different ratios of ethanol on the polysaccharides yield from Armea mycelium

軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以 x±S.D.表示，性，隨后進(jìn)行多重比較（Dunn's test）。當(dāng)胞活力沉的蜜環(huán)菌多糖對(duì) L-谷氨酸誘導(dǎo)損傷 HT 法檢測(cè) AMPSa-e 對(duì) HT22 細(xì)胞的存活率。時(shí)，細(xì)胞存活率達(dá) 50 %（P < 0.001；圖 3.L 的 AMPSb 和 AMPSc 預(yù)處理 3 h 后，HT< 0.05），而 AMPSa，d 和 e 沒有影響，因續(xù)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)的研究。

第 3 章 蜜環(huán)菌多糖體外抗阿爾茨海默癥活性及機(jī)制的研胞活力Sc 對(duì) 25 mM 的 L-谷氨酸誘導(dǎo)損傷 HT22 細(xì)測(cè) AMPSc 對(duì) HT22 細(xì)胞的存活率。結(jié)果表用 40 或 80 μg/mL 的 AMPSc 預(yù)處理 3 小時(shí) 13.7％（P < 0.05；圖 3.2）。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2853750