[目的]急性腎損傷(AKI)是臨床綜合征中常見且復(fù)雜的疾病,腎功能的喪失主要是由于腎小球?yàn)V過迅速下降所致。腎小球?yàn)V毛細(xì)血管壁在阻止分子量較大的溶質(zhì)從血管中滲出起重要作用,作為其組份之一內(nèi)皮細(xì)胞被糖萼覆蓋,糖萼是由蛋白多糖和可溶性生物大分子組成的一種帶負(fù)電荷的類似漁網(wǎng)樣結(jié)構(gòu),是腎小球壁高選擇性通過的重要組份,HS作為糖萼的重要構(gòu)成成分之一,其破壞或者降解將涉及毛細(xì)血管等微循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)和功能損傷。川芎嗪作為一種天然化合物,是從川芎中提取的活性生物堿,具有對(duì)抗體內(nèi)炎癥、抗癌、抗氧化、抗凋亡等藥理作用。我們研究目的就是探討脂多糖誘導(dǎo)AKI的機(jī)制,用川芎嗪預(yù)先處理后,通過腎臟組織病理學(xué)觀察,尿蛋白、Scr、BUN、組織和細(xì)胞MDA、ROS、SOD等氧化指標(biāo)檢測及腎臟和內(nèi)皮細(xì)胞HS熒光檢測,研究TMP對(duì)LPS誘導(dǎo)AKI的作用機(jī)制,評(píng)價(jià)TMP對(duì)LPS誘導(dǎo)AKI預(yù)防和治療的效果,為AKI的臨床診療提供新的理論依據(jù)。[方法]體內(nèi)實(shí)驗(yàn):把成年健康的雄性C57BL/6小黑鼠隨機(jī)分成5組:正常組(control組)、模型組(LPS 組 10mg/kg)、治療組(LPS+TMP 組,50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg),正常組與模型組給予生理鹽水灌胃1周,治療組分別給予TMP(50mg/kg、100mg/kg、200 mg/kg)灌胃1周,第7天灌胃1h以后腹腔注射LPS,24 h后留血清和腎保存?zhèn)溆�。HE明確小鼠腎臟病理變化及病理學(xué)評(píng)分,用EB染色法測量腎毛細(xì)血管的滲透性,用相應(yīng)試劑盒檢測BUN、Scr及組織中SOD、MDA、ROS,免疫熒光檢測腎組織中HS的含量。體外實(shí)驗(yàn):把HUVEC分成 5 組為正常、模型(LPS,1 μg/mL)、治療(TMP+LPS,100μM/ml,200μM/ml,300 μM/ml),用相應(yīng)試劑盒檢測細(xì)胞中SOD、MDA,免疫熒光檢測細(xì)胞中ROS的含量,MMP的表達(dá)變化及細(xì)胞膜表面HS的含量。[結(jié)果]與正常組相比,模型組小鼠腎組織損傷明顯嚴(yán)重,腎組織外滲的伊文思藍(lán)量、BUN、Scr濃度明顯上升,而治療組中,尤其是中高劑量治療組,有效減輕腎損傷程度,能顯著降低腎組織外滲的伊文思藍(lán)量、BUN、Scr濃度明顯降低。同時(shí),川芎嗪通過減少體內(nèi)應(yīng)激反應(yīng)及保護(hù)線粒體膜電位等抑制LPS所導(dǎo)致的糖萼脫落或降解,最終達(dá)到保護(hù)內(nèi)皮糖萼完整性的目的,保護(hù)了腎小球微血管內(nèi)皮的完整性,進(jìn)而緩解了 LPS誘導(dǎo)的AKI。[結(jié)論]川芎嗪通過保護(hù)線粒體膜電位,進(jìn)而減少體內(nèi)氧化應(yīng)激反應(yīng)等途徑,進(jìn)而抑制LPS所導(dǎo)致的內(nèi)皮糖萼中主要成分HS的脫落或降解,最終達(dá)到保護(hù)內(nèi)皮糖萼完整性的目的,從而保護(hù)腎小球?yàn)V過屏障功能的完整性,有助于減輕脂多糖誘導(dǎo)的急性腎損傷,表明川芎嗪保護(hù)內(nèi)皮糖萼的完整性和有助于減輕LPS誘導(dǎo)的急性腎損傷,保護(hù)腎小球屏障的完整性可能是治療LPS誘導(dǎo)的AKI的潛在候選藥物。
【學(xué)位單位】：濱州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

將ＰＢＳ覆于組織上，３?ｍｉｎ／次，棄去ＰＢＳ，重復(fù)三次，將稀釋好的ＤＡＰＩ均勻滴于載玻片的組織上，孵育８分鐘，注意避光。??輕甩掉０八？１，將？８５覆于組織上，３?１１１丨１１／次，棄去？８５，重復(fù)三次，然后封片，于奧林巴斯熒光光學(xué)顯微鏡下觀察并拍攝。??細(xì)胞活力測定??ＴＴ法測定ＨＵＶＥＣ的存活數(shù)量，將密度為４Ｘ?ｌ〇５／ｍｌ的ＨＵＶＥＣ加入３７°Ｃ的培養(yǎng)箱中繁育，然后在加入不同濃度（５〇ｎＭ、１００＿、２０〇ｎＭ４００?ｍＭ）的ＴＭＰ存在及空白孔（等體積生理鹽水）孵育２４小時(shí)，２４２〇ｎｌ的ＭＴＴ（５?ｍｇ／ｍｌ），繼續(xù)孵育４?ｈ。棄去培養(yǎng)基，然后添加１５０?ｕｌ?Ｄ震蕩器上輕輕搖晃１０?ｎｉｉｎ，使孔內(nèi)的晶體溶化完全。用酶標(biāo)儀檢測各果以百分比表示，未行任何處理組的活細(xì)胞數(shù)量為１００％。如圖１濃度達(dá)到４００?ｐＭ時(shí)，將會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞毒性。??

Ｂｕｎ和Ｓｃｒ均會(huì)上升［６］。在使用ＬＰＳ?（脂多糖）注入小鼠體內(nèi)１２ｈ后建??立的ＡＫＩ模型中，我們檢測血尿素氮和血肌酐的濃度變化情況。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果??表明（圖２）?：?ＬＰＳ組Ｂｕｎ和Ｓｃｒ的濃度與正常組相比明顯增加，對(duì)于治療組，尤??其是中、高劑量治療Ｂｕｎ和Ｓｃｒ的含量明顯低于模型組，同時(shí)也高于正常組，這??提示我們應(yīng)用ＬＰＳ成功誘導(dǎo)ＡＫ丨模型，同時(shí)也表明ＴＭＰ能減輕ＬＰＳ誘導(dǎo)的ＡＫＩ。??６０，?＃?２．５，??ｔｉｉｉｌｉｉｌｉｉｉｉ??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＬＰＳ?５０?１００?２００?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＬＰＳ?５０?１００?２００??ＬＰＳ＋ＴＭＰ（ｍｇ／ｋｇ）?ＬＰＳ＋ＴＭＰ（ｍｇ／ｋｇ）??圖２?ＴＭＰ對(duì)ＬＰＳ誘導(dǎo)的ＡＫＩ模型中ＢＵＮ及Ｓｃｒ的含量變化影響。（＃代表ＬＰＳ組與Ｃｏｎｔｒｏｌ??組對(duì)比，／５＜０．０丨；＊＊代表１＾５＋�。保蓿ǎ保癌枺保保蓿蓿┙M與１＾３組對(duì)比，／５＜０．０丨；＊＊＊代表１＾５＋�。保�??（２００?ｍｇ／ｋｇ）組與?ＬＰＳ?組對(duì)比，尸?＜?０．０１）??Ｆｉｇｕｒｅ?２?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＴＭＰ?ｏｎ?ＢＵＮ?ａｎｄ?Ｓｃｒ?ｃｏｎｔｅｎｔｓ?ｉｎ?ＡＫＩ?Ｍｍｏｄｅｌ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ＬＰＳ．?（＃?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ??ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＬＰＳ?ａｎｄ?Ｃｏｎｔｒｏｌ，?Ｐ?＜?０．０１；?＊＊?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｂｅｔｗｅｅｎ?ＬＰＳ＋ＴＭＰ?（１００??ｍｇ／ｋｇ）?ａｎｄ?ＬＰＳ

?濱州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文???２．川芎嗪能夠緩解ＬＰＳ誘導(dǎo)的腎臟病理變化??在光鏡下觀察可見（圖３），與正常組相比，模型組腎臟組織病理損害明顯，??如腎小球萎縮，里面結(jié)構(gòu)不清晰，腎小球囊腔擴(kuò)張、腎小管上皮細(xì)胞壞死、脫落、??空泡形成，間質(zhì)水腫等改變，病理評(píng)分明顯升高。而治療組腎小球萎縮，腎小球??囊腔擴(kuò)張不明顯或減輕，腎小管上皮細(xì)胞壞死、空泡形成減少，間質(zhì)水腫減輕，??病理評(píng)分明顯低于模型組，而高于正常組。??
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