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補(bǔ)中益氣丸對(duì)IEC-6細(xì)胞損傷模型NLRP3炎性體及相關(guān)細(xì)胞因子的影響

發(fā)布時(shí)間:2020-10-18 08:07
   目的:探討補(bǔ)中益氣丸含藥血清對(duì)炎癥刺激引起的大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞(ICE-6)損傷模型中NOD樣受體-3(NLRP3)炎性體復(fù)合物及相關(guān)細(xì)胞因子的影響。方法:根據(jù)中藥復(fù)方血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法,以IEC-6細(xì)胞為研究對(duì)象,設(shè)立胎牛血清組、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)組、空白組、模型組,補(bǔ)中益氣丸組、柳氮磺吡啶組。先用10%2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)大鼠模型血清或者TNF-α(質(zhì)量濃度100μg·L~(-1))刺激IEC-6細(xì)胞24 h,然后加入10%藥物血清繼續(xù)培養(yǎng)24 h后,采用細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)(CCK-8)方法檢測(cè)IEC-6細(xì)胞活率;采用蛋白免疫印跡法(Western blot)測(cè)定NLRP3炎性體的相關(guān)蛋白表達(dá)量,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)和白細(xì)胞介素-18(IL-18)的含量。結(jié)果:與空白組比較,TNF-α組及模型組均可引起IEC-6細(xì)胞增殖率顯著下降(P0.01),細(xì)胞內(nèi)NLRP3炎性體的相關(guān)蛋白表達(dá)顯著增高(P0.01),細(xì)胞因子IL-1β,IL-18含量顯著增高(P0.01);與模型組比較,各給藥組細(xì)胞增殖率顯著增加(P0.01),NLRP3炎性體復(fù)合物蛋白表達(dá)明顯降低(P0.05,P0.01),IL-1β,IL-18分泌顯著降低(P0.01)。結(jié)論:補(bǔ)中益氣丸含藥血清可通過調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞NLRP3炎性體復(fù)合物蛋白及細(xì)胞因子分泌,減輕炎癥刺激引起的腸上皮細(xì)胞損傷。
【文章目錄】:
1 材料
    1.1 動(dòng)物及細(xì)胞株
    1.2 藥物及試劑
    1.3 儀器
2 方法
    2.1 制備血清[5]
    2.2 CCK-8比色法測(cè)定細(xì)胞增殖
    2.3 細(xì)胞分組培養(yǎng)
    2.4 ELISA測(cè)定相關(guān)細(xì)胞因子
    2.5 蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)NLRP3炎性體相關(guān)蛋白的表達(dá)
    2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 對(duì)IEC6損傷模型細(xì)胞增殖率的影響
    3.2 對(duì)IEC6損傷模型細(xì)胞中NLRP3炎性體蛋白表達(dá)的影響
    3.3 對(duì)IEC損傷細(xì)胞模型分泌細(xì)胞因子的影響
4 討論

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