研究目的:基于胃腸動(dòng)力及食欲調(diào)控機(jī)制,探討運(yùn)脾開胃法治療進(jìn)食障礙的效應(yīng)及深層機(jī)理。研究方法:建立厭食癥大鼠模型,通過(guò)腹腔注射受體拮抗劑干擾VIP、Ghrelin信號(hào)通路傳導(dǎo),觀察運(yùn)脾開胃方對(duì)大鼠進(jìn)食量及體重的影響。采用ELISA、SP、WB、qPCR等方法檢測(cè)血清及胃腸組織VIP、Ghrelin、VPAC2、GHSR等下游信號(hào)及腦組織Ghrelin、NPY、AgRP、POMC、CART的表達(dá),觀察工具藥對(duì)VIP、Ghrelin信號(hào)通路及中樞食欲激素的作用。采用酚紅吸光度測(cè)定法檢測(cè)工具藥成分柚皮苷對(duì)小鼠胃排空的影響,并運(yùn)用激光共聚焦技術(shù)檢測(cè)柚皮苷對(duì)細(xì)胞Ca2+的影響。結(jié)果:(1)效應(yīng)觀察:造模14周后,大鼠進(jìn)食量及體重顯著下降,治療4周后,運(yùn)脾開胃組進(jìn)食量及體重顯著增加,優(yōu)于自然恢復(fù)組及受體拮抗組;(2)VIP信號(hào)通路:造模后,大鼠血清、胃組織VIP水平無(wú)差異,腸組織VIP及胃腸組織VPAC2表達(dá)顯著下調(diào),胃組織磷酸化CaM比例顯著增加;經(jīng)治療,胃組織VPAC2顯著上調(diào),受體拮抗后作用減弱,磷酸化CaM比例顯著下降;(3)Ghrelin信號(hào)通路:造模后,血清、胃腸Ghrelin以及腸組織GHSR有所下降,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,胃組織GHSR及胃腸組織p-MLC顯著下降;經(jīng)治療,血清、胃組織Ghrelin顯著增加,拮抗GHSR后進(jìn)一步升高,胃組織GHSR有所上調(diào),但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,拮抗GHSR后顯著上調(diào),腸組織GHSR顯著上調(diào),恢復(fù)至正常水平,而GHSR拮抗后作用減弱,胃腸組織p-MLC顯著升高,且在胃組織中拮抗GHSR后效應(yīng)減弱;(4)中樞食欲激素:造模后NPY、AgRP、POMC、CART出現(xiàn)下降,運(yùn)脾開胃方干預(yù)后顯著升高,拮抗GHSR后作用減弱;(5)胃排空:柚皮苷灌胃后,小鼠胃排空率顯著升高,但低于莫沙比利組,拮抗GHSR后效應(yīng)減弱;(6)細(xì)胞Ca2+:柚皮苷干預(yù)人胃竇平滑肌細(xì)胞15s引起Ca2+內(nèi)流,GHSR拮抗后內(nèi)流受抑制。結(jié)論:(1)運(yùn)脾開胃方能夠顯著提高厭食癥模型進(jìn)食量,抑制體重下降,干擾VIP、Ghrelin信號(hào)通路后作用減弱;(2)運(yùn)脾開胃方通過(guò)上調(diào)VIP受體VPAC2在胃組織的表達(dá),影響重要信號(hào)蛋白CaM表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)平滑肌舒張,調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力;(3)運(yùn)脾開胃方通過(guò)提高血清及胃組織Ghrelin水平、上調(diào)胃腸組織GHSR、p-MLC的表達(dá)來(lái)發(fā)揮其促進(jìn)食欲與調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力的作用;(4)運(yùn)脾開胃方能夠調(diào)節(jié)中樞食欲激素表達(dá),改善食欲調(diào)控紊亂;(5)柚皮苷能夠促進(jìn)小鼠胃排空及細(xì)胞Ca2+內(nèi)流,調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力。
【學(xué)位單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

造模第?６?周?２６．１２±７．２８?２４．６１±７．０６?２３．８８±６．０３?２４．８０±４．５７?２３．８４＋７．８８?２４．４７＋６．１４??造模第?７?周?２７．３４±６．７２?２３．１１±５．８１?２３．７０±５．７９?２３．５１±３．２６?２３．５３±７．０１?２３．０６±５．９７??造模第?８?周?２６．４６±７．６１?２０．９２＋５．２８?２０．７４±４．２０?２１．４２±４．５２?２１．１３±４．７４?２１．５６±４．２２??造模第?９?周?２５．２５±６．５３?２１．２２±７．１４?２１．２７±６．２６?２１．７１±５．６２?２０．７７?＋?７．４?１?２１．７３?＋?５．５３??造模第?１０?周?２５．６１±７．７４?２０．６８±６．８６?２０．３１?土６．６３?１９．６２±５．２９?２０．２１±５．４２?１９．７０±５．３２??造模第?１１?周?２４．９６±７．１２?Ｉ６．６１±３．０６＊?１６．４２±３．５６＊?１６．４０?士?３．２８＊?１６．４５±３．５１＊?１６．４０±３．２８＊??造模第?１２?周?２２．４０±５．９９?１５．１９±３．２２＊?１５．１６±３．１２＊?１５．５８±３．７９＊?１５．３０±３．９５＊?１５．４３±４．２１＊??造模第?１３?周?２２．２１?土５．９２?１７．８１±２．７４?１７．６４±２．９０?１７．８１±３．４６?１７．６３±３．３０?１７．７４＋３．３１??造模第?１４?周?２３．７９±６．４０?１７．２２＋５．２５?１７．７３±４．９８?１７．４１±５．６８?１７．４６±５．３９?１７．１６?＋?５．１３??治療第?１?周?２６．０５±７．８８?１８．０５±４．９１?１８．４２

２?ＶＩＰ信號(hào)通路??２．１材料??２．１．１實(shí)驗(yàn)動(dòng)物??大鼠購(gòu)買及飼養(yǎng)同前。??２．１．２藥物制備??運(yùn)脾開胃方劑量、質(zhì)量控制及制備同前。??２．１．３動(dòng)物飼料??特殊飼料制備同前。??２．１．４試劑和抗體??實(shí)驗(yàn)所需主要試劑及抗體見表３－２－１。??１８??

圖３－２－１?ＶＩＰ四參數(shù)Ｌｏｇｉｓｔｉｃ曲線擬合及標(biāo)準(zhǔn)曲線??．２．４免疫組化法檢測(cè)胃腸組織ＶＩＰ表達(dá)??采用免疫組織化學(xué)法（ＳＰ法）檢測(cè)胃腸組織中ＶＩＰ表達(dá)，簡(jiǎn)要步驟如下：??（１）胃腸組織經(jīng)４％多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋。??（２）石蠟切片常規(guī)脫蠟至水。??（３）?ＰＢＳ?洗滌?２?遍，各?５ｍｉｎ。??（４）抗原修復(fù)。??（５）用ＰＢＳ配置新鮮的３％Ｈ２０２，室溫封閉ｌＯｍｉｎ，蒸餾水洗１次。??（６）?ＰＢＳ?洗?５ｍｉｎ。??（７）滴加５％牛奶封閉液，室溫ｌＯｍｉｎ。??（８）甩掉多余液體后加一抗４°Ｃ過(guò)夜。??（９）第二天?３７°Ｃ復(fù)溫?４５ｍｉｎ。??（１０）同步驟（３）。??（１１）加入生物素化的二抗，３７°Ｃ孵育３０ｍｉｎ。??（１２）同步驟（３）。??°
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本文編號(hào)：2843342