近年來,隨著社會(huì)的發(fā)展和人民生活水平的提高,人們的膳食結(jié)構(gòu)和生活方式也隨之改變,長(zhǎng)期過多地?cái)z入高熱能的食物以及久坐少動(dòng)的不良生活方式使人們體內(nèi)積累過多的脂肪而導(dǎo)致肥胖。脂肪組織和其它器官如心臟、肝臟及骨骼肌中異常過量的脂肪堆積會(huì)導(dǎo)致代謝方面的脂毒性,造成慢性低程度的炎癥反應(yīng)和代謝功能紊亂,增加一系列慢性疾病的風(fēng)險(xiǎn),如心血管疾病、高血壓、血脂紊亂、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝以及癌癥等。如何降低體重,減少肥胖相關(guān)的代謝紊亂的發(fā)生,是當(dāng)下亟待解決的公共健康問題。京尼平是梔子的有效成分,常作為傳統(tǒng)中藥治療糖尿病。但是,其是否能夠改善營(yíng)養(yǎng)過剩導(dǎo)致的高血脂癥和脂肪肝,如何調(diào)控脂質(zhì)代謝,目前尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)以高脂食物(high-fat diet,HFD)喂養(yǎng)的肥胖小鼠為研究對(duì)象,通過灌胃不同劑量的京尼平來分析其對(duì)營(yíng)養(yǎng)過量導(dǎo)致的肥胖和代謝紊亂的影響。每周測(cè)量小鼠的體重和飲食量,并通過代謝籠系統(tǒng)檢測(cè)小鼠的呼吸熵(respiratory quotient,RQ)、能量消耗(energy expenditure,EE)、耗氧量(oxygen consumption,VO2)和活動(dòng)量,分析小鼠基礎(chǔ)代謝指標(biāo)。此外,檢測(cè)小鼠血液和肝臟中脂質(zhì)含量,確定其對(duì)脂質(zhì)代謝的影響。同時(shí),還可以通過免疫組化實(shí)驗(yàn),觀測(cè)小鼠肝臟中的脂滴儲(chǔ)存情況。為了進(jìn)一步探究京尼平調(diào)控脂質(zhì)代謝的分子機(jī)制,我們檢測(cè)了京尼平處理的小鼠和原代肝細(xì)胞中脂質(zhì)代謝相關(guān)基因在mRNA和蛋白水平表達(dá)量的變化。并且對(duì)京尼平處理的原代肝細(xì)胞進(jìn)行油紅染色和甘油三脂(triglyceride,TG)含量測(cè)定,在功能上確認(rèn)京尼平對(duì)脂質(zhì)代謝的調(diào)控作用。因?yàn)樾NA(microRNAs,miRNAs)在調(diào)控脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)中起重要作用,我們推測(cè)其在京尼平調(diào)控脂質(zhì)代謝中也發(fā)揮重要作用。通過生物信息學(xué)分析了調(diào)控脂質(zhì)基因表達(dá)的miRNAs,驗(yàn)證其對(duì)靶基因的調(diào)控作用,并檢測(cè)其是否受京尼平的調(diào)控。并且通過熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn),確定其靶向調(diào)控基因的序列。結(jié)合miRNAs mimic和inhibitor的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),探究miRNAs在京尼平調(diào)控的脂質(zhì)代謝中的介導(dǎo)作用。我們的研究發(fā)現(xiàn),在HFD喂食的肥胖小鼠中,京尼平可以劑量依賴性地降低小鼠體重,而對(duì)小鼠的飲食量沒有影響。此外,代謝籠檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)京尼平還能增加小鼠的VO2、EE和活動(dòng)量。說明京尼平可能通過增加小鼠的能量代謝來降低體重。不僅如此,對(duì)京尼平可以顯著性地降低肥胖小鼠血液和肝臟中脂質(zhì)的含量,改善高血脂癥并降低肝臟內(nèi)脂質(zhì)堆積。在分子水平上,我們檢測(cè)了小鼠肝臟組織中參與脂質(zhì)代謝基因的表達(dá),發(fā)現(xiàn)京尼平在mRNA水平可以特異性地抑制脂質(zhì)合成基因的表達(dá)。在分離的原代肝細(xì)胞中,京尼平也可以劑量依賴性地抑制游離脂肪酸(free fatty acids,FFAs)上調(diào)的脂質(zhì)合成基因的表達(dá)。用生物信息學(xué)分析靶向Srebp-1c 3'非轉(zhuǎn)錄區(qū)(untranslated regions,UTRs)的 miRNAs,并經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其受到京尼平的調(diào)控。結(jié)果發(fā)現(xiàn),京尼平可以上調(diào)miR-142a-5p的表達(dá)。而且,熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,miR-142a-5p可以通過與Srebp-1c 3' UTR中ACTTTATT序列結(jié)合而降低其活性,并且抑制其蛋白表達(dá)水平。在轉(zhuǎn)染miR-142a-5p inhibitor的原代肝細(xì)胞中,京尼平不改變SREBP-1c的蛋白表達(dá)水平,對(duì)脂質(zhì)堆積情況也沒有影響,說明miR-142a-5p介導(dǎo)京尼平對(duì)SREBP-1c表達(dá)和脂質(zhì)堆積的抑制作用。綜上所述,京尼平在小鼠中通過miR-142a-5p/SREBP-1c途徑減輕高脂飲食誘導(dǎo)的高血脂癥并抑制肝臟內(nèi)脂質(zhì)堆積。我們的研究集中在京尼平調(diào)控脂質(zhì)代謝,特別是抑制肝臟內(nèi)脂質(zhì)堆積的分子機(jī)制方面。本研究以miRNA/SREBP-1c為主線,深入闡明京尼平調(diào)控脂質(zhì)代謝的分子機(jī)制,為解決高血脂癥和肝臟內(nèi)脂質(zhì)堆積提供新思路。
【學(xué)位單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

?第１章緒論???多余的脂質(zhì)或不飽和脂肪酸會(huì)被位于細(xì)胞表面的脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)體、模式識(shí)別受體??（Ｐａｔｔｅｒｎ?ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ?ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，?ＰＲＲｓ）或其它細(xì)胞因子受體當(dāng)做病原分子，引起??炎癥反應(yīng)。細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過多時(shí)，則會(huì)激活ＴＬＲｓ通路，促進(jìn)炎性因子的分泌，如??ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－６、ＩＬ－１（Ｂ等，進(jìn)而激活ＩＫＫ（３／ＮＦ－ｋＢ途徑，傳遞炎癥信號(hào)。當(dāng)外源刺??激一直存在，炎癥信號(hào)持續(xù)進(jìn)行時(shí)，細(xì)胞的各項(xiàng)進(jìn)程都會(huì)受到影響，從而加劇了??代謝紊亂疾病的發(fā)生。??

?Ｉ?—??圖１．４肥胖誘導(dǎo)的血脂紊亂［２１］。??１．１．３．３?ＮＡＦＬＤ??當(dāng)血液中脂肪酸含量較高時(shí)，會(huì)酯化為ＴＧ儲(chǔ)存在脂肪組織中，或進(jìn)入肝臟??進(jìn)行氧化分解。但是，高水平的胰島素抑制肝臟線粒體Ｐ氧化能力［２２］，導(dǎo)致脂??肪酸在肝臟內(nèi)酯化為ＴＧ，造成脂肪性肝炎。??ＮＡＦＬＤ的病理進(jìn)程??ＮＡＦＬＤ是一種無過量飲酒史，以肝細(xì)胞脂肪變性和脂質(zhì)蓄積為主要特征的??臨床病理綜合征，是與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關(guān)的獲得性代謝應(yīng)激性肝??損傷，是由包括代謝、基因、環(huán)境和腸道微生態(tài)等多種機(jī)制調(diào)控的復(fù)雜疾�。郏玻常�。??ＮＡＦＬＤ的主要危害包括：一是可進(jìn)展為非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、肝癌等，??并最終有３０％－４０％的患者因其死亡［２４］；二是ＮＡＦＬＤ是代謝綜合征的重要組分

：二?ｐｆ??圖１．５肝臟病變進(jìn)程［３Ｕ。??ＮＡＦＬＤ發(fā)生機(jī)制??肝臟作為糖脂代謝的重要器官，在維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)方面起重要作用。肝臟ＦＦＡ??有３個(gè)主要來源：飲食，內(nèi)源合成和外部組織。它可以經(jīng)線粒體ｐ氧化消耗，也??可以被酯化后，以ＴＧ形式儲(chǔ)存于脂滴中，或被形成其它脂質(zhì)，或者被Ａｐｏｂ包??６??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Predictive Values of Body Mass Index and Waist Circumference for Risk Factors of Certain Related Diseases in Chinese Adults - Study on Optimal Cut-off Points of Body Mass Index and Waist Circumference in Chinese Adults[J];Biomedical and Environmental Sciences;2002年01期

本文編號(hào)：2843315