發(fā)布時(shí)間：2020-10-09 22:04

　　 背景:痤瘡是一種常見(jiàn)的發(fā)生于毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚疾病。它的致病因素有很多,包括雄激素水平增高,皮脂分泌的增多,微生物感染和炎癥反應(yīng)等。其中,皮脂分泌的增多是痤瘡發(fā)病的一個(gè)重要因素。皮脂由皮脂腺分泌,是維持皮膚功能的重要因素。在青春期,雄激素和胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(Insulin like growth factor,IGF-1)等促進(jìn)了皮脂的生成。過(guò)量的皮脂改變了毛囊周邊微環(huán)境進(jìn)而易引起痤瘡的形成。治療痤瘡的方法有口服抗生素、維甲酸等,外用藥物如抗生素、阿達(dá)帕林、過(guò)氧化苯甲酰等以及光動(dòng)力治療等物理療法。目前越來(lái)越多的中藥被用于痤瘡的治療,連翹、蒲公英、金銀花、薏苡仁、白芷、大黃、紫花地丁等,其中黃酮類(lèi)如山柰酚和槲皮素是目前最受關(guān)注的中藥活性提取物。Lim Young-Hee等檢測(cè)到山柰酚濃度依賴(lài)性地抑制痤瘡丙酸桿菌的生長(zhǎng)。此外,在體外實(shí)驗(yàn)中,山奈酚和槲皮素與克林霉素或紅霉素的聯(lián)合使用對(duì)痤瘡丙酸桿菌有協(xié)同抑制作用,而且黃酮類(lèi)與抗生素的聯(lián)合使用對(duì)抗生素耐藥的痤瘡丙酸桿菌也有抑制作用。7-去甲基銀杏雙黃酮(Bilobetin)是銀杏葉的天然成分之一,在大鼠實(shí)驗(yàn)中,可以降血脂、降低肝臟和肌肉中脂質(zhì)代謝產(chǎn)物的沉積,但是其對(duì)皮脂生成是否有抑制作用卻未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)體外培養(yǎng)人皮脂腺細(xì)胞,利用IGF-1誘導(dǎo)制作脂質(zhì)生成模型以進(jìn)一步探討bilobetin對(duì)脂質(zhì)生成的影響及其作用機(jī)制。目的: 探討bilobetin對(duì)IGF-1誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞皮脂生成的影響和作用機(jī)制。方法: 1.MTT法檢測(cè)不同濃度的bilobetin對(duì)人皮脂腺細(xì)胞活性的影響。2.H~3-TdR摻入法檢測(cè)不同濃度的bilobetin對(duì)人皮脂腺細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。3.油紅O染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)bilobetin對(duì)IGF-1誘導(dǎo)的脂質(zhì)生成細(xì)胞模型中脂質(zhì)生成的影響。4.薄層色譜分析法進(jìn)行bilobetin對(duì)IGF-1誘導(dǎo)生成的脂質(zhì)的分離、鑒定和定量。5.熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測(cè)bilobetin對(duì)IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞中角鯊烯合酶活性的影響。6.Western blot方法檢測(cè)bilobetin對(duì)IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞中脂質(zhì)生成相關(guān)調(diào)節(jié)因子SREBP1/2、SCD、FDFT1及細(xì)胞信號(hào)分子IGF-1、IGF-1-R、ERK等表達(dá)水平的變化。結(jié)果: 1.不同濃度的(1μM、2μM、4μM)的bilobetin對(duì)體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞都沒(méi)有細(xì)胞毒性。2.IGF-1促進(jìn)人皮脂腺細(xì)胞的生長(zhǎng),但bilobetin預(yù)處理顯著抑制IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞的生長(zhǎng)。3.IGF-1顯著促進(jìn)人皮脂腺細(xì)胞的脂質(zhì)生成,但bilobetin預(yù)處理濃度依賴(lài)性的抑制IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成。4.Bilobetin顯著抑制IGF-1促進(jìn)的人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成,包括角鯊烯、蠟酯、甘油三酯和膽固醇,特別是顯著抑制角鯊烯和蠟酯的生成。5.Bilobetin顯著抑制IGF-1對(duì)角鯊烯合酶啟動(dòng)子的活性的促進(jìn)作用。6.Bilobetin顯著下調(diào)脂質(zhì)生成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子SREBP1/2及脂質(zhì)生成相關(guān)的酶SCD和FDFT1的表達(dá)。7.IGF-1激活皮脂腺細(xì)胞后,IGF-1受體和AKT的磷酸化水平顯著提高。用bilobetin預(yù)處理不影響IGF-1誘導(dǎo)的IGF-1-R的磷酸化,而AKT的磷酸化被bilobetin顯著抑制。相反,IGF-1誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化不受bilobetin的抑制。結(jié)論: 1.Bilobetin顯著抑制IGF-1對(duì)體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成,包括角鯊烯、蠟酯、甘油三酯和膽固醇,其中顯著抑制角鯊烯和蠟酯的生成。2.Bilobetin可能是通過(guò)抑制角鯊烯合酶啟動(dòng)子的活性,下調(diào)脂質(zhì)生成轉(zhuǎn)錄因子和脂質(zhì)生成相關(guān)的酶如SREBP1/2、SCD和FDFT1的表達(dá)來(lái)抑制IGF-1誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成。3.Bilobetin通過(guò)AKT磷酸化信號(hào)通路抑制了IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

去甲基銀杏雙黃酮對(duì)體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞增、4μM 濃度的 bilobetin 處理的人皮脂腺細(xì)胞增（P＜0.01）（圖 4.1）。銀杏雙黃酮對(duì)體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)作用的胸苷攝取實(shí)驗(yàn)表明 IGF-1 會(huì)促進(jìn)皮脂腺細(xì)會(huì)顯著抑制 IGF-1 誘導(dǎo)的細(xì)胞生長(zhǎng)（圖 4.2A）色實(shí)驗(yàn)顯示 IGF-1 會(huì)促進(jìn)皮脂腺細(xì)胞的脂質(zhì)生成制 IGF-1 誘導(dǎo)的脂質(zhì)生成（圖 4.2B）。析法對(duì)脂質(zhì)進(jìn)一步分離、鑒定和定量顯示 bilo皮脂腺細(xì)胞的脂質(zhì)生成，包括角鯊烯和蠟酯，b

4.2 7-去甲基銀杏雙黃酮對(duì)體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞的 長(zhǎng)和脂質(zhì) 成的抑(4.2A) Bilobetin 對(duì)體外培養(yǎng)的皮脂腺細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。SV-sebocytes 在沒(méi)有 FBS 的培中孵育 1 天，然后在 1 μCi 的[3H]標(biāo)記的胸苷中用 IGF-1 和 bilobetin 孵育 2 天。在閃爍后數(shù)據(jù)用和對(duì)照組的相對(duì)百分比表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，*P＜0.0ilobetin 顯示出抑制 IGF-1 促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。(4.2B) 細(xì)胞用 bilobetin 和 IGF-1 按圖度孵育 1 天。用 Oil Red O staining 法檢測(cè)中性脂質(zhì)。(4.2C) 用 TLC 法檢測(cè) bilobetinGF-1 促進(jìn)的脂質(zhì)生成的影響。Bilobetin 顯著抑制角鯊烯和蠟酯的產(chǎn)生。(4.2D)對(duì)角鯊烯啟動(dòng)子活性的影響。細(xì)胞用 1 MOI 角鯊烯合酶-luc 報(bào)告腺病毒轉(zhuǎn)染，然后用 IGF-1ilobetin 處理 1 天。裂解細(xì)胞并檢測(cè)熒光素酶活性。重復(fù) 3 次實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)用提高倍標(biāo)準(zhǔn)差來(lái)表示，*P<0.01。

作用機(jī)制免疫印跡實(shí)驗(yàn)研究 Bilobetin 對(duì)幾種脂肪生成調(diào)節(jié)因子的表達(dá)。與我們致，IGF-1 處理可以導(dǎo)致脂肪生成轉(zhuǎn)錄因子的增加，SREBP-1 和 SRE如脂質(zhì)生成酶角鯊烯合酶（FDFT1）和 SCD 的增加。bilobetin 預(yù)處理可制 IGF-1 誘導(dǎo)的脂質(zhì)生成調(diào)節(jié)因子的增加（圖 4.3A）。免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了 bilobetin 對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)的影響。當(dāng) IGF-1 激活細(xì)胞，IGF-1 受體和 AKT 的磷酸化水平顯著提高。用 bilobetin 預(yù)處理F-1 誘導(dǎo)的 IGF-1-R 的磷酸化，而 AKT 的磷酸化被 bilobetin 顯著抑制IGF-1 誘導(dǎo)的 ERK1/2 磷酸化不受 bilobetin 的抑制（圖 4.3B）。這些結(jié)bilobetin 的作用機(jī)制主要是與其對(duì) AKT 信號(hào)傳導(dǎo)的抑制能力有關(guān)。

【相似文獻(xiàn)】

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2 侯霄梟;曹珂;胡婷婷;潘展硯;Christos C.Zouboulis;鞠強(qiáng);;苯并芘與肽聚糖體外協(xié)同刺激人皮脂腺細(xì)胞炎癥因子表達(dá)及其意義[J];中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志;2018年02期

3 王辰j(luò);潘展硯;侯霄梟;吳伊旋;Christos C.Zouboulis;鞠強(qiáng);;FICZ對(duì)人皮脂腺細(xì)胞芳香烴受體及炎癥因子mRNA表達(dá)影響及其意義[J];應(yīng)用激光;2017年05期

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6 鞠強(qiáng);尹興平;石繼海;康曉靜;辛燕;夏隆慶;;黃芩苷等中藥單體對(duì)人皮脂腺細(xì)胞內(nèi)雄性激素受體mRNA表達(dá)的影響[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2007年02期

7 鞠強(qiáng),尹興平,石繼海,辛燕,康曉靜,陳l

本文編號(hào)：2834263