背景:痤瘡是一種常見的發(fā)生于毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚疾病。它的致病因素有很多,包括雄激素水平增高,皮脂分泌的增多,微生物感染和炎癥反應(yīng)等。其中,皮脂分泌的增多是痤瘡發(fā)病的一個重要因素。皮脂由皮脂腺分泌,是維持皮膚功能的重要因素。在青春期,雄激素和胰島素樣生長因子-1(Insulin like growth factor,IGF-1)等促進(jìn)了皮脂的生成。過量的皮脂改變了毛囊周邊微環(huán)境進(jìn)而易引起痤瘡的形成。治療痤瘡的方法有口服抗生素、維甲酸等,外用藥物如抗生素、阿達(dá)帕林、過氧化苯甲酰等以及光動力治療等物理療法。目前越來越多的中藥被用于痤瘡的治療,連翹、蒲公英、金銀花、薏苡仁、白芷、大黃、紫花地丁等,其中黃酮類如山柰酚和槲皮素是目前最受關(guān)注的中藥活性提取物。Lim Young-Hee等檢測到山柰酚濃度依賴性地抑制痤瘡丙酸桿菌的生長。此外,在體外實驗中,山奈酚和槲皮素與克林霉素或紅霉素的聯(lián)合使用對痤瘡丙酸桿菌有協(xié)同抑制作用,而且黃酮類與抗生素的聯(lián)合使用對抗生素耐藥的痤瘡丙酸桿菌也有抑制作用。7-去甲基銀杏雙黃酮(Bilobetin)是銀杏葉的天然成分之一,在大鼠實驗中,可以降血脂、降低肝臟和肌肉中脂質(zhì)代謝產(chǎn)物的沉積,但是其對皮脂生成是否有抑制作用卻未見文獻(xiàn)報道。本實驗體外培養(yǎng)人皮脂腺細(xì)胞,利用IGF-1誘導(dǎo)制作脂質(zhì)生成模型以進(jìn)一步探討bilobetin對脂質(zhì)生成的影響及其作用機制。目的: 探討bilobetin對IGF-1誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞皮脂生成的影響和作用機制。方法: 1.MTT法檢測不同濃度的bilobetin對人皮脂腺細(xì)胞活性的影響。2.H~3-TdR摻入法檢測不同濃度的bilobetin對人皮脂腺細(xì)胞生長的影響。3.油紅O染色實驗檢測bilobetin對IGF-1誘導(dǎo)的脂質(zhì)生成細(xì)胞模型中脂質(zhì)生成的影響。4.薄層色譜分析法進(jìn)行bilobetin對IGF-1誘導(dǎo)生成的脂質(zhì)的分離、鑒定和定量。5.熒光素酶報告實驗檢測bilobetin對IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞中角鯊烯合酶活性的影響。6.Western blot方法檢測bilobetin對IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞中脂質(zhì)生成相關(guān)調(diào)節(jié)因子SREBP1/2、SCD、FDFT1及細(xì)胞信號分子IGF-1、IGF-1-R、ERK等表達(dá)水平的變化。結(jié)果: 1.不同濃度的(1μM、2μM、4μM)的bilobetin對體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞都沒有細(xì)胞毒性。2.IGF-1促進(jìn)人皮脂腺細(xì)胞的生長,但bilobetin預(yù)處理顯著抑制IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞的生長。3.IGF-1顯著促進(jìn)人皮脂腺細(xì)胞的脂質(zhì)生成,但bilobetin預(yù)處理濃度依賴性的抑制IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成。4.Bilobetin顯著抑制IGF-1促進(jìn)的人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成,包括角鯊烯、蠟酯、甘油三酯和膽固醇,特別是顯著抑制角鯊烯和蠟酯的生成。5.Bilobetin顯著抑制IGF-1對角鯊烯合酶啟動子的活性的促進(jìn)作用。6.Bilobetin顯著下調(diào)脂質(zhì)生成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子SREBP1/2及脂質(zhì)生成相關(guān)的酶SCD和FDFT1的表達(dá)。7.IGF-1激活皮脂腺細(xì)胞后,IGF-1受體和AKT的磷酸化水平顯著提高。用bilobetin預(yù)處理不影響IGF-1誘導(dǎo)的IGF-1-R的磷酸化,而AKT的磷酸化被bilobetin顯著抑制。相反,IGF-1誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化不受bilobetin的抑制。結(jié)論: 1.Bilobetin顯著抑制IGF-1對體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成,包括角鯊烯、蠟酯、甘油三酯和膽固醇,其中顯著抑制角鯊烯和蠟酯的生成。2.Bilobetin可能是通過抑制角鯊烯合酶啟動子的活性,下調(diào)脂質(zhì)生成轉(zhuǎn)錄因子和脂質(zhì)生成相關(guān)的酶如SREBP1/2、SCD和FDFT1的表達(dá)來抑制IGF-1誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成。3.Bilobetin通過AKT磷酸化信號通路抑制了IGF-1誘導(dǎo)的人皮脂腺細(xì)胞脂質(zhì)生成。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

去甲基銀杏雙黃酮對體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞增、4μM 濃度的 bilobetin 處理的人皮脂腺細(xì)胞增（P＜0.01）（圖 4.1）。銀杏雙黃酮對體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)作用的胸苷攝取實驗表明 IGF-1 會促進(jìn)皮脂腺細(xì)會顯著抑制 IGF-1 誘導(dǎo)的細(xì)胞生長（圖 4.2A）色實驗顯示 IGF-1 會促進(jìn)皮脂腺細(xì)胞的脂質(zhì)生成制 IGF-1 誘導(dǎo)的脂質(zhì)生成（圖 4.2B）。析法對脂質(zhì)進(jìn)一步分離、鑒定和定量顯示 bilo皮脂腺細(xì)胞的脂質(zhì)生成，包括角鯊烯和蠟酯，b

4.2 7-去甲基銀杏雙黃酮對體外培養(yǎng)的人皮脂腺細(xì)胞的 長和脂質(zhì) 成的抑(4.2A) Bilobetin 對體外培養(yǎng)的皮脂腺細(xì)胞生長的影響。SV-sebocytes 在沒有 FBS 的培中孵育 1 天，然后在 1 μCi 的[3H]標(biāo)記的胸苷中用 IGF-1 和 bilobetin 孵育 2 天。在閃爍后數(shù)據(jù)用和對照組的相對百分比表示。統(tǒng)計學(xué)資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，*P＜0.0ilobetin 顯示出抑制 IGF-1 促進(jìn)細(xì)胞生長的作用。(4.2B) 細(xì)胞用 bilobetin 和 IGF-1 按圖度孵育 1 天。用 Oil Red O staining 法檢測中性脂質(zhì)。(4.2C) 用 TLC 法檢測 bilobetinGF-1 促進(jìn)的脂質(zhì)生成的影響。Bilobetin 顯著抑制角鯊烯和蠟酯的產(chǎn)生。(4.2D)對角鯊烯啟動子活性的影響。細(xì)胞用 1 MOI 角鯊烯合酶-luc 報告腺病毒轉(zhuǎn)染，然后用 IGF-1ilobetin 處理 1 天。裂解細(xì)胞并檢測熒光素酶活性。重復(fù) 3 次實驗，統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)用提高倍標(biāo)準(zhǔn)差來表示，*P<0.01。

作用機制免疫印跡實驗研究 Bilobetin 對幾種脂肪生成調(diào)節(jié)因子的表達(dá)。與我們致，IGF-1 處理可以導(dǎo)致脂肪生成轉(zhuǎn)錄因子的增加，SREBP-1 和 SRE如脂質(zhì)生成酶角鯊烯合酶（FDFT1）和 SCD 的增加。bilobetin 預(yù)處理可制 IGF-1 誘導(dǎo)的脂質(zhì)生成調(diào)節(jié)因子的增加（圖 4.3A）。免疫印跡實驗檢測了 bilobetin 對細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的影響。當(dāng) IGF-1 激活細(xì)胞，IGF-1 受體和 AKT 的磷酸化水平顯著提高。用 bilobetin 預(yù)處理F-1 誘導(dǎo)的 IGF-1-R 的磷酸化，而 AKT 的磷酸化被 bilobetin 顯著抑制IGF-1 誘導(dǎo)的 ERK1/2 磷酸化不受 bilobetin 的抑制（圖 4.3B）。這些結(jié)bilobetin 的作用機制主要是與其對 AKT 信號傳導(dǎo)的抑制能力有關(guān)。

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1 鞠強,沈丹蓓,夏隆慶;人皮脂腺細(xì)胞與雄激素關(guān)系的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊;2002年06期

2 侯霄梟;曹珂;胡婷婷;潘展硯;Christos C.Zouboulis;鞠強;;苯并芘與肽聚糖體外協(xié)同刺激人皮脂腺細(xì)胞炎癥因子表達(dá)及其意義[J];中國麻風(fēng)皮膚病雜志;2018年02期

3 王辰j(luò);潘展硯;侯霄梟;吳伊旋;Christos C.Zouboulis;鞠強;;FICZ對人皮脂腺細(xì)胞芳香烴受體及炎癥因子mRNA表達(dá)影響及其意義[J];應(yīng)用激光;2017年05期

4 胡婷婷;余茜;莫小輝;宋寧靜;嚴(yán)敏;夏隆慶;Christos C.Zouboulis;鞠強;;尼古丁對SZ95人皮脂腺細(xì)胞增殖、凋亡及脂質(zhì)合成的影響[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2014年02期

5 鞠強;趙建斌;夏隆慶;;鹽酸小聚堿和黃芩苷對SZ95人皮脂腺細(xì)胞內(nèi)I型5α-還原酶mRNA表達(dá)的影響[J];中國麻風(fēng)皮膚病雜志;2009年12期

6 鞠強;尹興平;石繼海;康曉靜;辛燕;夏隆慶;;黃芩苷等中藥單體對人皮脂腺細(xì)胞內(nèi)雄性激素受體mRNA表達(dá)的影響[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報;2007年02期

7 鞠強,尹興平,石繼海,辛燕,康曉靜,陳l

本文編號：2834263