目的:研究健脾安腸丸的急性毒性。實(shí)驗(yàn)測(cè)定小鼠LD50,觀察記錄小鼠急性毒性情況,如小鼠外觀、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)、呼吸變化、中毒反應(yīng)及死亡情況。建立大鼠肝郁脾虛模型(腹瀉型腸易激綜合征模型),觀察各劑量組動(dòng)物肝功、腎功能指標(biāo),測(cè)定血清和結(jié)腸組織中VIP、CGRP的含量,觀察記錄結(jié)腸病理改變情況及VIP、CGRP蛋白的表達(dá),旨在研究健脾安腸丸對(duì)腹瀉型腸易激綜合征的作用,初步探討其作用機(jī)制,為臨床進(jìn)一步治療腸易激綜合征提供科學(xué)依據(jù)。方法:1.以最大給藥濃度和容積給小鼠灌胃健脾安腸丸混懸液,對(duì)照組給予同體積生理鹽水,觀察記錄小鼠攝食量、體重變化、死亡情況及行為活動(dòng)等。2.建立肝郁脾虛模型,參照布里斯托大便分類法(Bristol Stool Scale),觀察記錄大鼠大便分型和評(píng)分值。3.末次給藥1小時(shí)后,麻醉大鼠,腹主靜脈取血,測(cè)定肝功(ALT、AST)、腎功(Cr、BUN)和VIP、CGRP含量。4.取距回盲部1cm、2cm和3cm處結(jié)腸組織,生理鹽水沖洗保存?zhèn)溆谩?cm處結(jié)腸組織濾紙吸干,稱重,組織勻漿后離心,取上清液,測(cè)定結(jié)腸中VIP、CGRP含量。其余的在10%中性緩沖多聚甲醛溶液保存24h后取出,沿縱向剪開(kāi),攤平,石蠟包埋,切片。采用HE染色法觀察結(jié)腸組織形態(tài)學(xué)變化;采用免疫組化法(SABC法)檢測(cè)VIP、CGRP蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.健脾安腸丸在給藥20min后部分小鼠活動(dòng)減少,1h后恢復(fù)正常。第一天內(nèi)給藥組小鼠攝食量少于對(duì)照組,但未見(jiàn)顯著性差異。給藥后連續(xù)14天,小鼠全部存活,未見(jiàn)明顯的毒性反應(yīng),攝食量、體重變化與生理鹽水組比較未見(jiàn)明顯差異,動(dòng)物的外觀、行為活動(dòng)、精神狀態(tài)等皆正常。14天后處死并尸檢小鼠,其器官顏色、體積、質(zhì)地皆正常,與生理鹽水組比較未發(fā)現(xiàn)任何改變。2.造模10d后,參照布里斯托大便分類法,所有大鼠造模成功,稀便率達(dá)99%。給藥3周后,與模型組比較,健脾安腸丸大、中劑量組和匹維溴銨組大鼠稀便情況明顯改善(P0.01或P0.05);小劑量組大鼠稀便評(píng)分較模型組有所降低,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.與正常組比較,模型組、健脾安腸丸組及匹維溴銨組大鼠的ALT、AST、Cr、BUN均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果表明大黃水煎劑、健脾安腸丸和匹維溴銨對(duì)大鼠的肝、腎均無(wú)損害。4.VIP結(jié)果:健脾安腸丸各劑量組血清VIP含量較模型組均顯著降低(P0.05或P0.01),匹維溴銨組血清VIP水平有所下降,但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;所有給藥組結(jié)腸組織中VIP含量明顯減少(P0.05)。結(jié)果表明各劑量健脾安腸丸能通過(guò)降低血清及結(jié)腸組織中VIP的含量,有效地改善腹瀉狀況。CGRP結(jié)果:與模型組比較,所有給藥組血清CGRP含量均無(wú)較大差異;而結(jié)腸組織CGRP水平顯著上升,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05或P0.01)。結(jié)果表明各劑量健脾安腸丸均可提高結(jié)腸組織中CGRP的分泌,有一定治療腹瀉型腸易激綜合征的作用。5.HE染色結(jié)果:正常對(duì)照組結(jié)腸組織絨毛及腺體結(jié)構(gòu)清晰、完整,黏膜層及黏膜下層形態(tài)基本正常,細(xì)胞邊界清晰,杯狀細(xì)胞完整。模型組部分杯狀細(xì)胞破裂,黏膜層及黏膜下層可見(jiàn)局灶性炎細(xì)胞浸潤(rùn),炎癥狀況明顯。各給藥組炎癥狀態(tài)明顯減輕,大劑量組與正常組比較幾乎無(wú)明顯差異。6.VIP、CGRP蛋白表達(dá)結(jié)果:與模型組比較,所有給藥組結(jié)腸組織VIP蛋白陽(yáng)性表達(dá)明顯降低,CGRP表達(dá)顯著性提高,其中健脾安腸丸大劑量組和匹維溴銨組具有十分顯著性差異(P0.01)。與匹維溴銨組比較,健脾安腸丸大劑量組也顯著性提高(P0.05)。結(jié)論:健脾安腸丸以最大濃度和給藥容積灌胃,小鼠未出現(xiàn)死亡,也未測(cè)到LD50;大鼠連續(xù)給藥21天對(duì)肝功、腎功也未見(jiàn)影響,說(shuō)明該藥安全低毒。健脾安腸丸能夠減少由束縛及大黃灌胃所致肝郁脾虛模型大鼠的稀便數(shù)量,降低稀便分值;明顯減少血清及結(jié)腸組織中VIP含量及蛋白的表達(dá),提高結(jié)腸組織中CGRP的水平及蛋白表達(dá),具有緩解腹瀉型腸易激綜合征的作用。
【學(xué)位單位】：山東中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 2-1 造模與給藥后大鼠糞便評(píng)分值3.2 健脾安腸丸對(duì)大鼠肝功、腎功的影響由表 2-2、2-3 可見(jiàn)，各組的 ALT、AST、Cr、BUN 值較正常組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差說(shuō)明健脾安腸丸、匹維溴銨及大黃對(duì)大鼠的肝功、腎功無(wú)顯著性影響，安全低毒表 2-3 健脾安腸丸對(duì)大鼠肝功的影響（ x±s）組別 例數(shù)/(n) ALT/（卡門氏單位） AST/（卡門氏單位正常組 12 59.45±9.08 101.00±16.04模型組 15 59.19±7.15 92.58±16.95大劑量組 10 59.35±6.63 94.45±11.00中劑量組 10 56.00±4.65 101.24±11.28小劑量組 10 56.28±5.06 101.81±10.08

4 5 6圖 3-1 健脾安腸丸對(duì)大鼠結(jié)腸病理組織的影響（HE 染色，×400）1 正常對(duì)照組；2 模型組；3 大劑量組；4 中劑量組；5 小劑量組；6 匹維溴銨組3.2 免疫組化結(jié)果由表 3-1，圖 3-2 可見(jiàn)，模型組黏膜及黏膜下層存在大片棕黃色 VIP 蛋白陽(yáng)性達(dá)，且顏色極深。給藥組 VIP 蛋白陽(yáng)性表達(dá)較模型組明顯降低，其中健脾安腸丸大量組和匹維溴銨組具有較大的顯著性差異（P<0.01）。模型組黏膜及黏膜下層僅見(jiàn)極少的棕黃色 CGRP 蛋白陽(yáng)性表達(dá)顆粒。給藥CGRP 蛋白表達(dá)較模型組顯著性提高（P<0.01 或 P<0.05）。與匹維溴銨組比較，健安腸丸大劑量組具有顯著性提高（P<0.05），表明大劑量組更能有效地上調(diào)結(jié)腸CGRP 蛋白的表達(dá)。健脾安腸丸隨著劑量的增加，VIP 蛋白表達(dá)逐漸降低，而 CGRP 蛋白表達(dá)逐漸

健脾安腸丸對(duì)大鼠結(jié)腸組織VIP、CGRP蛋白陽(yáng)性表達(dá)的影響

【參考文獻(xiàn)】

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