發(fā)布時間：2020-08-02 12:10

【摘要】：研究目的:觀察燈盞益腎顆粒(原“云南燈盞花膠囊”)對糖尿病腎病大鼠TGF-Smad轉導通路的影響,從分子和蛋白水平探討燈盞益腎顆粒對糖尿病腎病可能的作用靶點和機制,為臨床用藥治療糖尿病腎病提供實驗依據。研究方法:1、動物分組:清潔健康的成年雄性SD大鼠90只,體重(230±20)g,8周齡。將90只大鼠隨機分正常組15只(A組)和鏈脲佐菌素模型組75只。將造模成功后的大鼠隨機分成模型組(B組)、鹽酸貝那普利組(C組)、燈盞益腎低劑量組(D組)、燈盞益腎中劑量組(E組)和燈盞益腎高劑量組(F組)各15只。2、模型制備:B組、C組、D組、E組和F組使用1%檸檬酸鹽緩沖液溶解鏈脲佐菌素(STZ,Streptozotocin),按55mg/kg一次性在大鼠左側腹腔注射,A組用等量生理鹽水腹腔注射。造模處理72小時后連續(xù)3天尾靜脈測血糖值≥16.7mmol/L為糖尿病模型制備成功。糖尿病模型大鼠喂養(yǎng)1周后隨機血糖≥16.7mmol/L、尿量大于對照組50%、尿糖呈強陽性、24h尿白蛋白大于對照組50%為糖尿病腎病模型制備成功。3、分組給藥:A組、B組均予生理鹽水10ml/(kg.d),灌胃;C組予鹽酸貝那普利1.05mg/(kg.d),灌胃;D組、E組、F組:分別予燈盞益腎顆粒1.89g/(kg.d)、9.45g/(kg.d)、18.9g/(kg.d),灌胃,連續(xù)灌胃6周。4、指標觀察:各組大鼠每周稱重一次;于灌胃第6周末處死大鼠的前一天取各組大鼠尿液待檢;第2天,稱體重,腹主動脈取血,離心待檢。用全自動多功能生化儀檢測胱抑素C(Cystatin C Cys C)、血肌酐(Serum Creatinine Scr)、血尿素氮(Blood uria nitrogen BUN)、尿蛋白/尿肌酐(Urine protein/Urine creatinine Up/Ucr)等生化指標;取腎臟,稱重,運用免疫組化法測定大鼠腎組織TGF-β1、Smad2、Smad7、Ⅳ型膠原、纖維連接蛋白的表達情況。采用美國MediaCybernetics公司生產的Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件進行圖像分析。任選5個視野,檢測腎組織TGF-β1、Smad2、Smad7、Ⅳ型膠原、FN陽性著色的陽性率,分別取其平均值進行統計學分析。5、結果:5.1、生化指標檢測:(1)空腹血糖、腎系數(腎重/體重)、尿蛋白/尿肌酐(Up/Ucr)、胱抑素C、尿素氮,A組和B組相比,差異有統計學意義(P0.01)。(2)腎系數、Up/Ucr、Cys C:與B組相比,C組、D組Up/Ucr比值、Cys C含量降低(P0.05),E組、F組明顯降低(P0.01);與C組相比,E組、F組Up/Ucr比值、Cys C含量降低(P0.05);與D組相比,E組、F組Up/Ucr比值、Cys C含量降低(P0.05)。(3)BUN:與B組相比,C組、D組、F組BUN含量降低(P0.05),E組明顯降低(P0.01);與C組相比,E組BUN含量降低(P0.05);E組BUN含量比D組降低(P0.05)。與E組相比,F組BUN含量增多(P0.05)。(4)Scr:各組之間兩兩比較差異無統計學意義(P0.05)。5.2、免疫組化TGF-β1、Smad2、Smad7、Ⅳ型膠原、FN檢測:(1)A組和B組相比,差異有統計學意義(P0.01)。與B組相比,C組、D組腎組織TGF-β1、Smad2、Ⅳ型膠原、FN蛋白表達降低(P0.05);E組、F組明顯降低(P0.01);與C組相比,E組、F組腎組織TGF-β1、Smad2、Ⅳ型膠原、FN蛋白表達降低(P0.05)。(2)Smad7:A組和B組相比,差異有統計學意義(P0.01)。與B組相比,C組、D組腎組織Smad7蛋白表達增多(P0.05),E組、F組明顯增多(P0.01);與C組相比,E組、F組腎組織Smad7蛋白表達增多(P0.05)。結論:燈盞益腎顆粒和鹽酸貝那普利都可改善DN大鼠的基本狀況;兩者均可減輕尿微量白蛋白排泄和腎損傷。燈盞益腎顆粒3個劑量組中,中劑量組和高劑量組效果較優(yōu),燈盞益腎顆粒中高劑量組優(yōu)于鹽酸貝那普利組;免疫組化結果分析顯示,燈盞益腎顆粒和鹽酸貝那普利均可抑制TGF-Smad信號通路激活,減輕腎組織纖維化表達。燈盞益腎顆粒中、高劑量組效應優(yōu)于低劑量組和鹽酸貝那普利組;上述治療作用呈現一定的量效關系趨勢。
【學位授予單位】：云南中醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2778495