發(fā)布時(shí)間：2020-07-20 10:19

【摘要】：目的通過觀察糖尿病腎病(Diabetic nephropathy,DN)大鼠的生化指標(biāo)的變化和腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改變以及腎組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)相關(guān)因子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP的表達(dá)變化和腎臟細(xì)胞凋亡情況。探討參芍口服液(Shenshao oral liquid,SS)對糖尿病腎病大鼠腎組織ERS介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的影響及對糖尿病腎病保護(hù)作用的可能機(jī)制。方法將50只健康雄性SPF級Wistar大鼠在實(shí)驗(yàn)動物房適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,將大鼠隨機(jī)分為正常對照組(Nomal control,NC組)、模型組(Diabetic nephropathy,DN組)、低劑量參芍口服液組(Low dose Shenshao oral liquid,LSS組)、中劑量參芍口服液組(Medium dose Shenshao oral liquid,MSS組)和高劑量參芍口服液組(High dose Shenshao oral liquid,HSS組),每組10只。NC組以普通飼料喂養(yǎng),DN組和SS不同劑量組采用高脂飼料喂養(yǎng),飼養(yǎng)1個(gè)月后。DN組和SS不同劑量組禁食12 h后,予以鏈脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)25mg/kg一次性腹腔注射,制備DN模型,分別于第3、7、14天連續(xù)3次監(jiān)測血糖(GLU)≥16.7 mmol/L,收集尿液測尿糖為3+至4+(強(qiáng)陽性),24h尿蛋白量(24h UA)30 mg/24 h,為DN大鼠模型構(gòu)建成功。造模成功后進(jìn)行藥物干預(yù),LSS組、MSS組、HSS組分別給予參芍口服液4ml/kg.d、8ml/kg.d、12ml/kg.d灌胃,NC組和DN組每日1次給予1ml的蒸餾水灌胃。藥物灌胃干預(yù)12周后采集大鼠24 h尿液,腹主動脈取血,檢測各組血糖、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)及24h尿蛋白定量(24h UA);HE染色及Masson染色光鏡下觀察大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)改變和腎組織纖維化情況;免疫組化染色檢測大鼠腎組織ERS相關(guān)因子GRP78、CHOP表達(dá)情況;Western blot檢測大鼠腎組織ERS相關(guān)因子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP表達(dá)情況;原位末端細(xì)胞凋亡法(Td T-mediated d UTP Nick-End labeling,TUNEL)檢測大鼠腎組織細(xì)胞凋亡的情況。結(jié)果1一般狀況:NC組大鼠血糖水平正常,神態(tài)、進(jìn)水食正常,反應(yīng)靈敏好動;與Sham組相比,DN組大鼠血糖明顯升高(P0.05),被毛暗淡無澤且并伴部分脫落,進(jìn)食及飲水量明顯增加,排尿增多,精神倦怠;SS不同劑量物組與DN組相比較大鼠進(jìn)食水及精神、活動狀況明顯改善,血糖水平下降(P0.05)。2腎功能指標(biāo)檢測:與NC組相比,DN組BUN、Scr及24h UA均顯著增高(P0.05);與DN組相比,SS不同劑量組BUN、Scr及24h UA均顯著降低(P0.05)。3 HE觀察腎組織病理情況:與NC組相比,DN組可見腎小球體積明顯肥大,腎小管毛細(xì)血管腔受擠壓變窄,腎小球系膜區(qū)變寬及系膜基質(zhì)顯著增多,腎小管基底膜變厚,部分腎小球體積縮小并硬化,部分腎小管上皮細(xì)胞肥大且胞漿出現(xiàn)空泡變性;SS不同劑量組與DN組相比上述病變均明顯減輕。4 Masson觀察腎組織纖維化情況:與NC組相比,DN組可見腎小球及腎小管間質(zhì)內(nèi)膠原組織大量沉積,藍(lán)色膠原纖維粗大排列雜亂,并相互連接形成呈網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)分布;SS不同劑量組與DN組相比腎組織纖維化均明顯改善。5免疫組化檢測結(jié)果:與NC相比較,DN組腎臟組織大鼠的GRP78、CHOP蛋白表達(dá)顯著增多(P0.05);SS不同劑量組GRP78、CHOP蛋白表達(dá)均明顯減少(P0.05),其中HSS組表達(dá)減少程度最明顯。6 Western blot檢測結(jié)果:與NC組相比,DN組腎臟組織GRP78、PERK、e IF2α、CHOP蛋白表達(dá)均顯著升高(P0.05);SS不同劑量組與DN組相比腎組織GRP78、PERK、e IF2α、CHOP蛋白表達(dá)均明顯降低(P0.05);其中HSS組表達(dá)減少程度最明顯。7 TUNEL檢測結(jié)果:NC組可見少量的細(xì)胞凋亡;與NC相比,DN組腎臟組織可見大量細(xì)胞凋亡;SS不同劑量組較DN組細(xì)胞凋亡均顯著減少,其中HSS組細(xì)胞凋亡的情況較接近NC組。結(jié)論1糖尿病腎病大鼠腎組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP高度表達(dá),腎臟細(xì)胞大量凋亡,提示糖尿病腎組織存在ERS的激活,PERK-e IF2α-CHOP通路誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的發(fā)生。2參芍口服液可減輕糖尿病腎病大鼠腎臟病理損害,延緩腎功能減退,具有腎保護(hù)作用,其機(jī)制可能與降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子GRP78、PERK、e IF2α、CHOP的表達(dá),減少PERK-e IF2α-CHOP通路誘導(dǎo)的腎臟細(xì)胞凋亡有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5
【圖文】：

- 14 -注：A: NC 組; B: DN 組; C: LSS 組; D: MSS 組; E: HSS 組圖 1 各組大鼠腎組織 HE 染色比較（400×）Figure 1 Comparison of HE staining in kidneys of each group（400×）

注：A: NC 組; B: DN 組; C: LSS 組; D: MSS 組; E: HSS 組圖 2 各組大鼠腎臟組織 Masson 染色（400×）Figure 2 Masson staining of kidney tissue in each group （400×）1.2.4 免疫組化檢測 GRP78、CHOP 蛋的表達(dá)情況免疫組化染色顯示 GRP78、CHOP 陽性細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞漿呈棕黃色，其表達(dá)部

注：A: NC 組; B: DN 組; C: LSS 組; D: MSS 組; E: HSS 組圖 3 各組大鼠腎臟組織 GRP78 免疫組化染色結(jié)果（400×）Figure 3 he results of GRP78 immunohistochemical staining of kidney tissue in each group (400×)

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙陽;劉佳琨;陳強(qiáng);徐杰;王天生;;雷公藤多苷灌胃對大鼠糖尿病腎病的治療作用及機(jī)制[J];山東醫(yī)藥;2015年47期

2 魏靜;張建榮;;纈沙坦抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對糖尿病腎損害大鼠足細(xì)胞的保護(hù)作用[J];武警醫(yī)學(xué);2015年12期

3 陳欣;文武;郁正亞;;高糖高脂飼料聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素制備SD大鼠2型糖尿病模型[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)刊;2015年07期

4 陳凱;張承英;李建民;張建榮;;纈沙坦對糖尿病大鼠腎臟中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及炎癥反應(yīng)的抑制作用[J];中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報(bào);2015年02期

5 張琦;李映雪;尚小明;劉曉X;薛忠文;韓全樂;;參芍口服液對冠狀動脈介入治療術(shù)后患者血清血管活性物質(zhì)和細(xì)胞因子的影響[J];中國老年學(xué)雜志;2015年06期

6 張瑜珊;汪年松;王筱霞;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在糖尿病腎病中的研究進(jìn)展[J];中國中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志;2014年09期

7 聶彥娜;李姝玉;崔蕾;易月娥;柴欣樓;吳瑩;王羽儂;賈德賢;王謙;;葛根素注射液對高糖誘導(dǎo)的HK-2細(xì)胞GRP78 mRNA表達(dá)的影響[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年01期

8 易月娥;聶彥娜;李姝玉;李玉杰;柴欣樓;賈德賢;王謙;;葛根素注射液對糖尿病KKA~y小鼠腎小管上皮細(xì)胞的影響[J];中國病理生理雜志;2013年12期

9 陳曦;汪永忠;段賢春;姚先梅;韓燕全;吳健;高家榮;方朝暉;夏倫祝;;中藥有效成分防治糖尿病腎病的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J];安徽醫(yī)藥;2013年09期

10 成杰;;早期糖尿病腎病的中醫(yī)治療進(jìn)展[J];中醫(yī)臨床研究;2013年04期

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1 李寶靜;蔡怡;任鈺;劉永建;;2型糖尿病動物模型的建立[A];中國轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和整合醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)交流會（上海站）論文匯編[C];2015年

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1 陶莉;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡在四氯化碳致小鼠急性肝損傷中的作用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

本文編號：2763311