【摘要】：目的:本研究通過運用陽離子化牛血清白蛋白(Cationic Bovine Serum Albumin,C-BSA)的方法復制膜性腎病(membranous nephropathy,MN)大鼠模型,并應用益腎祛濕通絡中藥對模型進行干預性治療,通過觀察大鼠的24小時尿蛋白定量(24 hours urine protein,24hUTP)、血清總蛋白(serum total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)等生化指標以及腎組織Nephrin、NEPH1的mRNA與蛋白的表達,探討益腎祛濕通絡中藥對膜性腎病的干預性治療作用及其可能機制,從而為臨床治療膜性腎病提供新的思路和方法。方法:選用清潔級健康SD雄性大鼠40只,體重160~180g,普通飼料適應性喂養(yǎng)一周,取各大鼠24小時尿液,檢測24hUTP均為陰性。采用隨機法將大鼠分為正常組(NG)10只、造模組30只。除NG外,造模組大鼠均應用自備陽離子化牛血清白蛋白預免疫一周,隨后隔日尾靜脈注射C-BSA復制MN大鼠模型。NG尾靜脈注射等體積生理鹽水。連續(xù)注射4周后,檢測大鼠24hUTP確認造模成功以后,將造模組隨機分為中藥組(TCMG)、雷公藤+激素組(T+HG)、模型組(MG)。T+HG及TCMG給予相應的藥物灌胃治療,NG及MG給予等量的生理鹽水,各組共給藥4周。給藥結(jié)束后,留取24小時尿液,檢測24hUTP,隨后將大鼠處死,取血,留取大鼠腎組織。全自動生化分析儀檢測各組大鼠血清TP、ALB、TC、TG、BUN、Scr,并應用光鏡、電鏡、免疫熒光觀察大鼠腎小球基底膜及足突的變化情況,實時熒光定量PCR(Quantitative real-time reverse transcription PCR,real-time PCR)、蛋白免疫印跡(Weston-blot)法檢測Nephrin、NEPH1的mRNA與蛋白在腎組織中的表達情況。結(jié)果:1 24hUTP檢測結(jié)果與ng相比,其余各組均出現(xiàn)明顯蛋白尿,有顯著性差異(p0.05);與mg相比,兩治療組24hutp均明顯降低,有顯著性差異(p0.05);兩治療組之間相比,無顯著性差異(p(29)0.05)。2各組大鼠的生化指標比較2.1血清tp、alb檢測結(jié)果與ng相比,其它各組血清tp、alb均明顯降低,有顯著差異(p0.05);與mg相比,兩治療組血清tp、alb均明顯升高,有顯著性差異(p0.05);兩治療組之間相比,無顯著性差異(p(29)0.05)。2.2血清tc、tg檢測結(jié)果與ng相比,其它各組血清tc、tg均明顯升高,有顯著性差異(p0.05);與mg相比,兩治療組血清tc、tg均明顯降低,有顯著性差異(p0.05);兩治療組之間相比,tcmg血清tc、tg明顯低于t+hg,有顯著性差異(p0.05)。2.3血bun、scr檢測結(jié)果各組大鼠血清bun、scr之間無顯著性差異(p(29)0.05)。3腎組織病理形態(tài)學觀察光鏡下ng腎小球結(jié)構(gòu)未見明顯異常,mg大鼠腎小球上皮下嗜復紅蛋白沉積,基底膜(glomerularbasementmembrane,gbm)彌漫性增厚,足細胞足突彌漫性融合,兩治療組病理變化較mg減輕。電鏡下ng腎小球結(jié)構(gòu)未見明顯異常,mg可見腎小球上皮下大量排列有序的電子致密物沉積,基底膜彌漫性增厚,足細胞足突彌漫融合,釘突形成,兩治療組病理變化較mg減輕,基底膜輕度增厚,電子致密物沉積較少,足細胞足突部分融合。免疫熒光顯示:ng未見明顯異常,mg可見igg沿腎小球毛細血管壁及部分系膜區(qū)沉積呈細顆粒狀沉積。與mg相比,兩治療組病理變化較輕,可見少量的igg沿腎小球毛細血管壁呈細顆粒狀沉積。4腎組織中nephrin、neph1的表達情況4.1real-timepcr結(jié)果與ng相比,其它各組nephrinmrna、neph1mrna的表達明顯降低,有顯著性差異(p0.05);與mg相比,兩治療組中nephrinmrna、neph1mrna的表達有所升高,有顯著性差異(p0.05);兩治療組之間相比,無顯著性差異(p(29)0.05)。4.2 Western Blot結(jié)果與NG相比,其它各組Nephrin、NEPH1蛋白的表達明顯降低,有顯著性差異(P0.05);與MG相比,兩治療組中Nephrin、NEPH1蛋白的表達有所升高,有顯著性差異(P0.05);兩治療組之間相比,無顯著性差異(P(29)0.05)。結(jié)論:1益腎祛濕通絡中藥可以改善MN大鼠的尿蛋白,提高血漿蛋白,與雷公藤聯(lián)合激素作用相似。2益腎祛濕通絡中藥可改善脂代謝,作用優(yōu)于雷公藤聯(lián)合激素。3益腎祛濕通絡中藥可有效減少MN大鼠腎小球基底膜免疫復合物的沉積,從而改善腎小球基底膜的病理損害。4益腎祛濕通絡中藥可以上調(diào)MN大鼠腎組織中Nephrin、NEPH1的mRNA及蛋白的表達,修復腎小球裂孔隔膜蛋白的損失,保護了腎小球基底膜濾過屏障的完整性及通透性,這可能是其控制蛋白尿作用途徑之一。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1 各組大鼠 24hUTP 比較Fig.1 The changes of 24h urine protein in four groups(x±s)△P<0.05 vs NG;▲P<0.05 vs MG.

圖 1 各組大鼠 24hUTP 比較Fig.1 The changes of 24h urine protein in four groups(x±s):△P<0.05 vs NG;▲P<0.05 vs MG.

圖 3 各組大鼠 TC、TG 比較Fig.3 TC and TG of blood serm in four groups(x±s):△P<0.05 vs N G;▲P<0.05 vs M G;☆P<0.05 vs T+HG.圖 4 各組大鼠 BUN、Scr 比較

【參考文獻】

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本文編號：2759165