【摘要】：復方南星止痛膏處方由生天南星、生川烏、丁香、肉桂、白芷、細辛、川芎、徐長卿、乳香、沒藥、樟腦、冰片等12味藥材組成,具有散寒除濕、活血止痛之功效,臨床主要用于治療寒濕瘀阻所引起的骨性關節(jié)炎及類風濕性關節(jié)炎,包括關節(jié)疼痛、肌肉腫脹等,療效確切,應用廣泛。產(chǎn)品上市20余年來,逐漸發(fā)展成骨性關節(jié)炎及類風濕關節(jié)炎的臨床一線用藥,由于其較好的療效,在臨床上受到醫(yī)生和患者的廣泛認可,為國家基本藥物目錄甲類品種,具有較好的臨床優(yōu)勢和市場前景。目前,復方南星止痛膏的研究主要集中在質(zhì)量控制、藥理作用、臨床療效等方面,關于其藥效物質(zhì)基礎的研究甚少。隨著現(xiàn)代分析技術的發(fā)展,該制劑的質(zhì)量控制標準已不能滿足全面可控、綠色環(huán)保、科學合理的質(zhì)控技術要求。因此,有必要采用更先進的技術和更合適的評價指標對復方南星止痛膏進行質(zhì)量標準提升研究,以更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量的均一、穩(wěn)定。本論文采用超高效液相-四級桿串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜(UPLC-Q-TQF-MS/MS)和氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術對制劑的化學成分譜及體外透皮吸收成分譜進行分析,在此基礎上建立基于主要透皮吸收成分的質(zhì)量控制方法,使指標性成分的選擇更科學合理,進而提高產(chǎn)品的質(zhì)量控制水平。本論文具體研究內(nèi)容包括以下幾個方面:1.復方南星止痛膏化學成分譜及透皮吸收成分譜研究采用UPLC-Q-TQF-MS/MS技術和GC-MS技術對復方南星止痛膏的化學成分進行定性分析,共鑒定出115個化合物。其中UPLC-Q-TQF-MS/MS技術鑒定出60個化合物,包括6個氨基酸類,10個酚酸類,17個生物堿類,8個黃酮類,4個川芎內(nèi)酯類,7個香豆素類,2個苯丙素類及6個其他類化合物,其中12個化合物已經(jīng)過對照品比對確認。采用GC-MS技術鑒定出55個化合物,包括單萜類及其含氧衍生物7個,倍半萜類及其含氧衍生物24個,芳香族類16個,有機烷、醇、酯類8個,其中7個化合物已經(jīng)過對照品比對確認。該研究從非揮發(fā)性成分和揮發(fā)性成分兩個方面完善了制劑的化學成分譜信息,為其質(zhì)量控制及藥效物質(zhì)基礎研究提供依據(jù)。采用體外透皮吸收模型,考察復方南星止痛膏可能的透皮吸收成分。實驗首先考察并確定了透皮接收液的組成及樣品前處理方式,然后采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術對制劑體外透皮吸收實驗的接收液進行定性分析,通過與空白基質(zhì)、制劑化學成分譜的對比分析,共鑒定出22個透皮成分,包括11個揮發(fā)性成分,4個內(nèi)酯類成分,4個香豆素類成分及3個雙酯型烏頭生物堿類成分。22個透皮成分均包含在制劑化學成分譜中,且全為化學成分譜研究中的原型成分,未曾找到發(fā)生代謝的成分。2.復方南星止痛膏質(zhì)量標準提升研究.基于化學成分譜及體外透皮吸收研究結果,從定性鑒別、含量測定、常規(guī)檢查等方面對制劑的質(zhì)量標準進行提升研究。試驗首先增加了白芷、川芎2味藥材的薄層鑒別、揮發(fā)性成分的多指標含量測定和馬兜鈴酸Ⅰ的限量檢查,優(yōu)化了揮發(fā)性成分的氣相鑒別、次烏頭堿的含量測定以及制劑的常規(guī)檢查方法,為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量、保證批間一致性提供技術支持。同時,為了進一步提升產(chǎn)品的質(zhì)量控制水平,重點針對制劑中的有效成分,即三個雙酯型烏頭生物堿(新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿),建立了多成分同時測定的在線中心切割的超高效二維液相色譜法(2D-UPLC),并經(jīng)系統(tǒng)的方法學驗證,證明方法的可行性。該方法對中藥復雜體系中微量成分的質(zhì)量控制提供了有益借鑒。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R286.0
【圖文】：

，出準分子離子峰［Ｍ－Ｈ］－。ＭＳ２中黃酮苷元Ｃ環(huán)易發(fā)生ＲＤＡ（Ｒｅｔｒｏ－Ｄｉｅｌｓ－Ａｌｄｅｒ）裂解反應，逡逑即斷裂主要發(fā)生在（＾與。位和（：３與（：４位，產(chǎn)生Ａ環(huán)和Ｂ環(huán)兩個碎片離子，易丟失中性逡逑碎片ＣＯ、Ｃ０２、Ｃ２Ｈ２０等離子，該裂解方式可能和分子的結構和抗氧化活性相關ｔ＇而黃逡逑酮苷類化合物在ＭＳ２中多脫去糖鏈形成苷元離子，而且糖鏈均以均裂方式脫去，脫去糖基逡逑的黃酮苷元離子，同相對應的黃酮類化合物裂解規(guī)律一致｜３５ｉ。以峰４２為例，負離子模式逡逑下可見準分子離子峰［Ｍ－Ｈ］＿Ｗ／ｚ邋２８５．０４２７，首先從準分子離子峰上脫去中性分子Ｃ０生成逡逑ｗ／ｚ２５７．１３９４離子，進而再分別脫去ＣＯ與Ｈ２０生成ｗ／ｚ２２９．丨３４６與ｗ／ｚ邋２３９．０７８７的碎片逡逑離子。同時，準分子離子峰［Ｍ－Ｈ］－ｗ／ｚ邋２８５．０４２７發(fā)生ＲＤＡ反應，Ｃ環(huán)裂解掉Ｃ４Ｈ４Ｏ３生成逡逑ｗ／ｚ邋１８５．１３２４離子。經(jīng)山奈酚標準品比對確認，保留時間和質(zhì)譜裂解的碎片離子一致，因逡逑此峰４２確定為山奈酚，結合文獻推測其可能的裂解途徑如圖２－２所示。峰２４和峰５７逡逑在負離子模式下有準分子離子峰ｗ／ｚ邋４６３．０９２７和ｗ／ｚ邋２９９．０５７３，結合文獻｜２；＞＇３：＞３；｜及二級碎逡逑片離子，推測峰２４和峰５７分別為異槲皮苷和山奈素。峰３０、４９和５２在正離子模式下有逡逑準分子離子峰ｗ／ｚ４７９．１１８８、ｗ／ｚ３１７．０６４７和ｍ／＿？５２Ｌ１２９５，且均符合黃酮類化合物裂解規(guī)逡逑律，再結合文獻［２５，４３，４４１及二級碎片離子，推測峰３０、４９和５２分別為異鼠李素－３－０－葡萄糖逡逑昔、鼠李素（或異鼠李素）和邋ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ－３－０－ｐ

ＣＯ形成碎片離子１７５．０３３３和１４７．０４５４。經(jīng)歐前胡素標準品比對確認，保留時間和逡逑質(zhì)譜裂解的碎片離子一致，因此峰５５鑒定為歐前胡素，結合文獻推測其可能的裂解途逡逑徑如圖２－３所不。峰４５和４６在正離子模式下有準分子離子峰ａｍ／ｚ３１７．１０１６、ｏｔ／ｚ２８７．０２９１，逡逑且各個峰的二級碎片離子均符合呋喃香豆素類化合物裂解規(guī)律，再結合文獻報道，推測逡逑可能為新比克白芷內(nèi)酯和氧化前胡素。峰４１和６０在正離子模式下有準分子離子峰ｍ／ｚ逡逑２１７．０４９３和ｗ／ｚ邋３０１．１０７０，可能的分子式為Ｃ１２Ｈ８0４和Ｃ１７Ｈ１６０５，根據(jù)建立好的數(shù)據(jù)庫和逡逑二級碎片離子比對，推測峰４１可能為佛手柑內(nèi)酯或異佛手柑內(nèi)酯，峰６０可能為珊瑚菜素逡逑或異珊瑚菜素。逡逑0邐、邐ｍｚ邋１７５．０３３３逡逑＿＿／／邐ｗｚ邋２０３．０３４１邐＼逡逑＼邐＼－２（Ｃ０）逡逑ｍ／ｚ邋２７１．０９６５邐－Ｃ００Ｈ邐－ＣＯ逡逑翁逡逑ｍ２邋１５８．００２１邐ｍ邋ｚ邋１４７．０４５４逡逑圖２－３歐前胡素可能的裂解途徑逡逑Ｆｉｇ．２－３邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｐｏｓｅｄ邋ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ邋ｐａｔｈｗａｙ邋ｏｆ邋ｉｍｐｅｒａｔｏｒｉｎ逡逑３．３酚酸類化合物分析逡逑該類化合物主要來源于天南星和川芎，它們的基本結構是酚羥基取代的芳香環(huán)、丙烯逡逑酸、脂類和萜類氨基酸等成分，主要分為羥基苯甲酸類和羥基肉桂酸類。該類化合物易丟逡逑失Ｈ２０和ＣＯＯＨ，且在負離子模式下響應較高。峰１０的在一級質(zhì)譜中可見準分子離子峰逡逑［Ｍ－Ｈ］？為ｗ／ｚ邋１４７．０４５１，在保留時間８．３７５邋ｍｉｎ色譜峰處用Ｍａｓｓ邋Ｈｕｎｔｅｒ軟件設定好相應參逡逑數(shù)

逡逑對，確認峰２３為阿魏酸，結合文獻和特征離子碎片推測其可能的裂解途徑如圖２－４所逡逑示。參考峰１０和２３的裂解規(guī)律，結合二級質(zhì)譜碎片離子及相關參考文獻推測８、逡逑９、１７、１９和２２可能為沒食子酸、２－甲基檸檬酸、綠原酸、卜咖啡�？鼘幩岷停常埃⑽乎ｅ义匣鼘幩幔渲蟹澹保方�(jīng)標準品比對確認為綠原酸。逡逑ＨＯ邐＿邋Ｈ＾Ｈ少，ｏｍ0２７７。逡逑0人人＾0Ｈ邋＼邐）＿0又義＾逡逑0邋－ＣＯＯ邋入邐＂－ＣＨ３邐ｎｔｚ邋１３４．０３８０逡逑默邋＿５邐Ｈ0Ｙ＾邐｜Ｈ．逡逑ｍ＇ｚ邋１４９．０５８９逡逑圖２－４阿魏酸可能的裂解途徑逡逑Ｆｉｇ．２－４邋Ｔｈｅ邋ｐｒｏｐｏｓｅｄ邋ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ邋ｐａｔｈｗａｙ邋ｏｆ邋ｆｅｒｕｌｉｃ邋ａｃｉｄ逡逑３．４生物堿類化合物分析逡逑制劑中鑒別出的生物堿絕大部分出自于生川烏，其類型主要為二萜類生物堿，包括雙逡逑酯型生物堿、單酯型生物堿和醇胺型生物堿［４ＷＩ１。二萜類生物堿母環(huán)結構相對穩(wěn)定，主要逡逑區(qū)別在于Ｃ３、Ｃ８和Ｃ１４位取代基的種類不同。該類成分為川烏中的毒效成分，其中的雙酯逡逑型生物堿毒性最大，但對熱不穩(wěn)定，容易發(fā)生水解反應，失去一個酯鍵，轉(zhuǎn)化成單酯型生逡逑物堿

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