【摘要】：目的:研究山楂有機酸對心肌缺血再灌注損傷的保護作用是否通過抑制HIF-1α,抑制凋亡及調節(jié)凋亡相關蛋白Bcl-2和Bax的表達而實現(xiàn)的,并探討該作用是否通過激活PI3K/Akt、MAPK傳導通路而起作用。方法:體外實驗:1.將正常生長的H9c2細胞隨機分為6組:Control組、H_2O_2組、H_2O_2+NAC組和H_2O_2+山楂有機酸(高、中、低濃度)組。心肌細胞在H_2O_2 100μmol/L刺激2 h后,采用MTS法檢測細胞增殖吸光值,利用標準試劑盒測定細胞內Caspase 3和Caspase 9的酶活性,以及流式細胞術測定H9c2細胞的凋亡率,Western blot檢測H9c2細胞中p-NF-κB/NF-κB蛋白水平的表達。2.實驗分組:Control組、H_2O_2組、山楂有機酸預給藥組(給藥組)、ERK激動劑組、JNK抑制劑組、PI3K抑制劑組。H9c2細胞在抑制劑或激動劑處理之后,用山楂有機酸預處理2 h后,加入H_2O_2 100μmol/L作用2 h后,采用MTS法檢測細胞增殖吸光值,利用試劑盒測定細胞內Caspase 3的酶活性。體內實驗:將正常飼養(yǎng)的SD大鼠隨機分成4組:Sham組、I/R組、山楂有機酸給藥+I/R組、山楂有機酸預給藥+Sham組。Western blot檢測心肌組織中HIF-1α、Bcl-2及Bax蛋白水平的表達。結果:體外實驗:1.山楂有機酸對H_2O_2誘導的H9c2心肌細胞損傷的保護作用與Control組相比,給予H_2O_2刺激2 h后的心肌細胞數(shù)量顯著減少;與H_2O_2組相比較,H_2O_2+山楂有機酸組使H9c2心肌細胞數(shù)量增加,并在6.25μg/ml、25μg/ml時效果及重復性最好,H_2O_2+NAC組也具有顯著效果。2.山楂有機酸對H_2O_2誘導H9c2細胞凋亡及凋亡相關蛋白的影響與Control組相比,H_2O_2組細胞數(shù)量凋亡增加,Caspase 3及Caspase 9酶活性增強,p-NF-κB的蛋白表達增強。與H_2O_2組相比較,山楂有機酸組凋亡細胞數(shù)量減少,Caspase 3及Caspase 9酶活性減少,p-NF-κB的蛋白表達降低。3.山楂有機酸對H_2O_2誘導H9c2細胞PI3K/Akt、MAPK、JNK信號通路的影響與Control組相比,H_2O_2組細胞數(shù)量減少,Caspase 3酶活性顯著升高,與H_2O_2組相比較,山楂有機酸組細胞數(shù)量增加,Caspase 3酶活性顯著降低,與山楂有機酸預給藥組比較,ERK激動劑、JNK抑制劑、PI3K抑制劑細胞數(shù)量明顯減少,Caspase 3酶活性顯著升高。體內實驗:1.山楂有機酸對心肌缺血再灌注損傷的作用與Sham組比較,模型組大鼠心肌組織HIF-1α的蛋白表達明顯增加;Bcl-2的蛋白表達顯著減少;Bax蛋白表達顯著升高;給藥組與模型組相比,HIF-1α的蛋白表達明顯減少;Bcl-2的蛋白表達顯著增加;Bax的蛋白表達顯著下降。結論:山楂有機酸抗心肌缺血再灌注損傷作用可能與調控缺氧誘導因子HIF-1α、抑制凋亡及凋亡相關蛋白Bcl-2/Bax和激活PI3K/Akt、MAPK信號通路有關。
【學位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

圖 1：不同濃度 H2O2對 H9c2 心肌細胞存活率的影Effect of different concentrations of H2O2on the survivcardiomyocytes注：與 Control 組比較***P<0.001。

圖 2：山楂有機酸對 H2O2誘導的 H9c2 細胞損傷的保護作用 2: Protective effect of Organic Acids of Crataegus pinnatifida oinduced H9c2 cell injury與 Control 組比較 *** P<0.001；與模型組比較##P<0.01，### P<0.0

山楂有機酸對H2O2誘導的H9c2細胞損傷凋亡的影響

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