【摘要】：糖尿病已經(jīng)成為全球發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一,其并發(fā)癥更是嚴(yán)重威脅了患者的健康。目前常用的藥物如阿卡波糖、二甲雙胍等,雖然能夠降低血糖,但是常常伴隨著不良反應(yīng)的發(fā)生。黃芩苷元是一種黃酮類化合物,具有抗炎、抗氧化、抗菌等活性,并有降低血糖,改善糖尿病并發(fā)癥的作用,但是黃芩苷元的降糖機(jī)理尚不完全清楚。本論文主要研究黃芩苷元對高糖誘導(dǎo)的肝臟細(xì)胞和組織中的抗氧化應(yīng)激及凋亡作用,分析了其抵御氧化應(yīng)激與凋亡的信號通路,為將黃芩苷元開發(fā)為糖尿病藥物奠定理論基礎(chǔ)。研究內(nèi)容主要包括以下幾個方面:(1)建立高糖誘導(dǎo)正常肝細(xì)胞HL7702細(xì)胞的模型。確定60.5 mM為最佳的葡萄糖誘導(dǎo)濃度。采用MTT的方法考察了不同濃度的黃芩苷元與高糖處理對細(xì)胞存活率產(chǎn)生的影響。高糖處理的細(xì)胞存活率顯著低于正常細(xì)胞,黃芩苷元處理后則能夠提高細(xì)胞存活率�？疾炝它S芩苷元對于高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和凋亡的影響,通過分光光度法檢測了細(xì)胞內(nèi)氧化指標(biāo)SOD,CAT,GSH,MDA含量的變化,通過DCFH-DA探針檢測了ROS含量的變化,通過Annexin V/PI雙染技術(shù)檢測了細(xì)胞凋亡水平的變化。黃芩苷元處理后,細(xì)胞內(nèi)SOD,CAT,GSH水平顯著上升,MDA水平顯著下降,ROS含量顯著降低,早期凋亡比例也顯著減少。糖尿病小鼠肝組織的氧化指標(biāo)結(jié)果與細(xì)胞中的結(jié)果類似。(2)研究了黃芩苷元抵御高糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激和凋亡的分子機(jī)制。對黃芩苷元給藥糖尿病鼠的肝組織進(jìn)行基因表達(dá)譜分析,結(jié)果表明黃芩苷元能夠顯著調(diào)控內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白進(jìn)程中的PERK/Nrf2/CHOP通路。在細(xì)胞水平上,qRT-PCR和Western blot分析表明,黃芩苷元能夠下調(diào)高糖誘導(dǎo)的HL7702細(xì)胞中PERK,CHOP蛋白和mRNA的表達(dá)水平,上調(diào)Nrf2,HO-1蛋白及mRNA的表達(dá)水平。在動物組織水平上,各蛋白表達(dá)水平變化規(guī)律和細(xì)胞結(jié)果一致,并能夠上調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平,下調(diào)促凋亡蛋白Bax表達(dá)水平。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2745354