【摘要】：覆盆子是薔薇科懸鉤子屬植物華東覆盆子的近成熟干燥果實(shí),具有“益腎、固精、縮尿”之功效。課題組前期采用水提醇沉法從覆盆子中分離純化得到4個(gè)糖蛋白分子,通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究表明,其中3號(hào)糖蛋白分子(GP3)的抗氧化活性最強(qiáng)。為了進(jìn)一步探討覆盆子的抗衰老活性,本論文以覆盆子糖蛋白GP3為研究對(duì)象,結(jié)合Klotho基因在抗衰老方面的重要作用,系統(tǒng)研究覆盆子糖蛋白GP3的抗衰老活性及其對(duì)小鼠腎組織中Klotho基因表達(dá)的調(diào)控作用。研究?jī)?nèi)容主要分為以下兩個(gè)方面:1、覆盆子糖蛋白GP3體外抗衰老活性研究。測(cè)定糖蛋白GP3的總還原能力和羥自由基清除率以及對(duì)TCMK-1細(xì)胞作用后SOD、GSH-Px、CAT、MDA的含量。通過(guò)CCK-8法和β-半乳糖苷酶染色法分別測(cè)定糖蛋白GP3對(duì)H_2O_2損傷下TCMK-1、NRK-52E細(xì)胞的存活率及抗衰老活性的影響。結(jié)果表明,糖蛋白GP3能增加氧化損傷狀態(tài)下的TCMK-1、NRK-52E細(xì)胞的存活率,并且能明顯改善TCMK-1細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT、MDA的生理指標(biāo),存在一定的量效關(guān)系。2、覆盆子糖蛋白GP3體內(nèi)抗衰老活性及其對(duì)Klotho基因表達(dá)的調(diào)控研究。通過(guò)腹腔注射D-半乳糖的方法建立小鼠衰老模型,確定建模成功后口服給藥30天,處死小鼠。測(cè)定臟器系數(shù)及小鼠血清、心臟、肝臟、脾臟、腎臟的生理學(xué)指標(biāo),并對(duì)肝腎組織進(jìn)行病理切片,同時(shí)提取小鼠腎臟中的總RNA和蛋白質(zhì),并通過(guò)RT-PCR和Western-blot方法檢測(cè)Klotho基因的表達(dá)量。結(jié)果表明,糖蛋白GP3能有效改善衰老小鼠腎組織器官的病理狀態(tài),使腎儲(chǔ)備能力得到修復(fù),從而起到補(bǔ)腎的作用,并且能明顯改善衰老小鼠體內(nèi)SOD、GSH-Px、CAT、MDA的生理指標(biāo),具有明顯的抗衰老活性;同時(shí)還能明顯增加小鼠腎組織中抗衰老基因Klotho的表達(dá)量。綜上所述,覆盆子糖蛋白GP3具有顯著的抗氧化及抗衰老活性,對(duì)抗衰老基因Klotho起到明顯的調(diào)節(jié)作用,由此推斷糖蛋白可能是覆盆子延緩衰老的物質(zhì)基礎(chǔ),而覆盆子抗衰老的機(jī)制可能是:(1)通過(guò)清除體內(nèi)有害的自由基,從而改善機(jī)體器官的生理狀態(tài),使各組織器官的功能得到修復(fù),特別是對(duì)腎組織的修復(fù)可能與抗衰老作用直接相關(guān);(2)通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)抗衰老基因Klotho的表達(dá)水平而實(shí)現(xiàn)其抗衰老作用。這一結(jié)果為覆盆子作為傳統(tǒng)抗衰延壽方中的重要一員提供科學(xué)依據(jù),同時(shí)也為“補(bǔ)腎是抗衰老的基本途徑”這一中醫(yī)觀點(diǎn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5
【圖文】：

圖 1.1 膜型 Klotho 與分泌型 Klotho 的示意圖[17]Klotho 基因表達(dá)的調(diào)控及其功能tho 基因在調(diào)控衰老以及增齡性相關(guān)疾病中扮演著必不可少的角色Klotho 基因能調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激，防止氧化損傷。例如，Klotho 基因能氧化損傷后人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）的存活率，增強(qiáng)細(xì)胞的減少細(xì)胞炎癥反應(yīng)、衰老和凋亡[18-19]；相反，Klotho 基因缺陷不馬神經(jīng)元的氧化損傷，而且能引起體內(nèi)的磷酸鹽滯留[20]。另外，CKD）野生型小鼠中檢測(cè)到腎臟中具有較低的 Klotho 水平，而 K達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠腎臟的功能得到提高[21]。同樣，在自發(fā)型高血壓大注損傷模型大鼠[22]、糖尿病腎病大鼠[23]、慢性心衰大鼠[24]以及高下的大鼠[25]中 Klotho 基因的表達(dá)量減少。研究已經(jīng)表明，增加小因表達(dá)水平能夠延長(zhǎng)壽命（約為正常小鼠的 20~30%）[26]，增強(qiáng)認(rèn)抗腎臟相關(guān)疾病的發(fā)生[28-30]，對(duì)肺部疾病[31]、血管鈣化[32]、糖尿病[34]都具有改善作用，同時(shí)也能作為體內(nèi)腫瘤抑制劑等[35-38]，另外

圖 2.1 紫外檢測(cè)覆盆子糖蛋白M 1 2圖 2.2 SDS-PAGE 分析覆盆子糖蛋白 GP3（M：蛋白質(zhì) Marker；1：考馬斯亮藍(lán)染色；高碘酸－希夫試劑染色）2.4 覆盆子糖蛋白 GP3 總還原能力及對(duì)羥自由基清除率實(shí)驗(yàn)的測(cè)

【參考文獻(xiàn)】

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1 夏軒軒;李昆;丁研華;周文穎;李政媛;葉婉;謝一輝;黃麗萍;;覆盆子及有效部位對(duì)老年大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響及機(jī)制初探[J];中藥藥理與臨床;2015年03期

2 杜龍飛;李潔;楊龍;賀英;柴欣;張鵬;王躍飛;;覆盆子的化學(xué)成分研究[J];天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā);2014年12期

3 葛亮;王樺;曾爾亢;張艷芳;;衰老相關(guān)基因研究進(jìn)展[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2014年22期

4 張曉暄;楊曉春;遠(yuǎn)航;程海濤;王晶;寶玲;;高表達(dá)Klotho基因?qū)μ悄虿〈笫竽I臟保護(hù)作用的機(jī)制[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2014年15期

5 鄔玉芬;吳俊;喻衛(wèi)武;;覆盆子總黃酮超聲波提取工藝響應(yīng)面法優(yōu)化及其抗氧化特性研究[J];浙江林業(yè)科技;2014年01期

6 師超;林江濤;卞科;;黃肉甘薯糖蛋白的抗氧化作用研究[J];安徽農(nóng)學(xué)通報(bào);2013年18期

7 黃麗萍;熊玉潔;趙夢(mèng)嵐;龔嘉華;謝一輝;;覆盆子有效部位改善腎陽(yáng)虛型癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶作用機(jī)制研究[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2013年19期

8 謝欣梅;龐曉斌;;覆盆子提取物對(duì)2型糖尿病大鼠糖脂代謝的影響及對(duì)肝臟保護(hù)作用的研究[J];中成藥;2013年03期

9 程丹;李潔;周斌;鄭鵬武;;覆盆子化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展[J];中藥材;2012年11期

10 朱會(huì)霞;;覆盆子黃酮抗氧化活性研究[J];現(xiàn)代食品科技;2012年10期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 林書典;Klotho基因調(diào)控機(jī)制及其在高血壓腎間質(zhì)纖維化中的作用研究[D];中南大學(xué);2007年

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1 張耀文;缺血性卒中患者血清Klotho蛋白表達(dá)水平對(duì)NO的調(diào)控作用與Klotho基因多態(tài)性研究[D];吉林大學(xué);2017年

2 亓婷婷;覆盆子總糖蛋白抗衰老活性及其分離、純化研究[D];鄭州大學(xué);2016年

3 雷利芳;覆盆子的抗氧化活性及其與化學(xué)成分和顯微特征常數(shù)的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2013年

4 袁凡麗;高糖及高滲環(huán)境對(duì)Klotho基因表達(dá)的影響[D];長(zhǎng)江大學(xué);2013年

5 宋雙雙;klotho基因啟動(dòng)子片段轉(zhuǎn)錄調(diào)控的初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

6 柴偉;覆盆子化學(xué)成分和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2008年

7 李亞娜;甘薯糖蛋白降血脂功能的研究[D];西南農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

本文編號(hào)：2742741