發(fā)布時(shí)間：2020-07-02 01:34

【摘要】：金絲草是禾本科金發(fā)草屬植物金絲草(Pogonatherum crinitum(Thunb.)Kunth)的干燥全草,于《中國(guó)沙漠地區(qū)藥用植物》、《全國(guó)中草藥匯編》、《中華本草》等書中均有記載,有著悠久的歷史。近年來,中外學(xué)者對(duì)金絲草的研究在化學(xué)成分方面止步于唯新單體化合物的分離,在藥理學(xué)方面局限于對(duì)金絲草提取物的藥效評(píng)價(jià),為了更加明確金絲草的活性成分,有效地開發(fā)利用該資源,本文開展了聚酰胺富集純化金絲草總黃酮最優(yōu)工藝、金絲草正丁醇部位化學(xué)成分提取分離及單體化合物體外抗HBV活性測(cè)評(píng)的初步研究,主要工作內(nèi)容和研究成果如下:第Ⅰ部分聚酰胺富集純化金絲草總黃酮的工藝研究。目的:應(yīng)用響應(yīng)面法對(duì)聚酰胺富集純化金絲草總黃酮的條件進(jìn)行篩選,以得到最佳工藝條件,為金絲草藥用資源的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。方法:使用聚酰胺對(duì)金絲草70%乙醇提取物中的總黃酮進(jìn)行富集純化,利用單因素試驗(yàn)、Box-Behnken設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法對(duì)上樣液濃度、上樣量、上樣液pH、吸附流速、樹脂徑高比、水洗脫用量、洗脫流速、洗脫劑(乙醇)體積分?jǐn)?shù)、洗脫劑(乙醇)用量等工藝參數(shù)進(jìn)行考察,以總黃酮純度作為評(píng)價(jià)指標(biāo),確定金絲草總黃酮的最佳富集與純化的工藝條件。結(jié)果:通過響應(yīng)面分析法建立的模型得到聚酰胺富集純化金絲草總黃酮的最佳工藝條件為:上樣液濃度為2.00mg/mL,上樣量為13.3mg/g,上樣液pH為4.00,吸附流速5.0BV/h,樹脂徑高比為1:4,水洗脫用量為2.5BV,洗脫流速為3.16BV/h,洗脫劑(乙醇)體積分?jǐn)?shù)70%,洗脫劑(乙醇)用量為3.95BV,得到總黃酮的純度為39.11%,與預(yù)測(cè)值(39.34%)相當(dāng)。結(jié)論:聚酰胺對(duì)金絲草總黃酮的富集效果良好。該試驗(yàn)通過響應(yīng)面分析法得到聚酰胺富集純化金絲草總黃酮的工藝條件較其他方法更加簡(jiǎn)便,預(yù)測(cè)性好,此方法可用于富集純化金絲草總黃酮。第Ⅱ部分金絲草正丁醇萃取部位化學(xué)成分研究目的:分離純化金絲草正丁醇萃取部位的化學(xué)成分,得到單體化合物并鑒定其結(jié)構(gòu),為深入研究金絲草的化學(xué)成分提供科學(xué)依據(jù),為找尋金絲草中具有體外抗乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)活性單體化合物提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:根據(jù)被分離組分的分配系數(shù)、溶解度、極性、解離程度等差異,通過萃取、結(jié)晶、柱層析和制備型高效液相(制備型HPLC)色譜等方法對(duì)金絲草正丁醇萃取部位的化學(xué)成分進(jìn)行分離純化,以獲得單體化合物,并基于化合物的理化性質(zhì)以及波譜數(shù)據(jù)如UV、ESI-MS、~1H-NMR和~(13)C-NMR等鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。結(jié)果:從金絲草正丁醇萃取部位中分離得到了5個(gè)單體化合物,對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,結(jié)果為:5-羥基-4?-甲氧基黃酮-7-O-蕓香糖苷(1)、1,7-二羥基-3,8-二甲氧基Tk噸酮(2)、N-乙酰苯丙氨酸(3)、焦谷氨酸甲酯(4)、杜鵑花酸(5)。結(jié)論:化合物1~5均為首次從金發(fā)草屬植物中分離得到。第Ⅲ部分單體化合物體外抗HBV活性檢測(cè)目的:體外檢測(cè)化合物1~5的抗HBV活性,確定其中具有抗HBV活性的單體化合物。方法:選擇HepG2 2.2.15細(xì)胞作為體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ?以培養(yǎng)細(xì)胞上清液中HBsAg和HBeAg的分泌變化為檢測(cè)指標(biāo),以細(xì)胞存活率以及選擇指數(shù)SI為參考,檢測(cè)每種單體化合物的體外抗HBV活性。結(jié)果:化合物3,即N-乙酰苯丙氨酸對(duì)HepG2 2.2.15細(xì)胞分泌HBsAg及HBeAg有一定的抑制作用,IC_(50)分別為55.5、69.5μg/mL,且SI大于2。結(jié)論:從金絲草正丁醇萃取部位的化學(xué)成分中分離得到的單體化合物3在體外具有良好的抗HBV活性。本部分研究成果具有更深入的研究?jī)r(jià)值,為抗HBV新藥的研發(fā)提供了科學(xué)依據(jù),也可以為闡明金絲草藥材的藥效物質(zhì)奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：承德醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284.1

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