發(fā)布時間：2020-07-01 21:00

【摘要】：研究背景急性心肌梗死(AMI)是導致死亡的主要原因之一,現已成為多個國家的主要公共衛(wèi)生問題。心肌缺血再灌注損傷的機制復雜,主流觀點認為自由基產生、氧化應激、線粒體損傷與能量耗竭是心肌細胞受損的主要原因。抑制糖原合酶激酶-3β(GSK3β)的磷酸化對心肌缺血再灌注損傷有著非常關鍵的作用,可以通過誘導細胞自噬并激活多個細胞存活信號通路發(fā)揮心肌保護的作用。從酸棗仁中可分離出兩種黃酮碳苷,包括斯皮諾素(SP)和6'''-阿魏酰斯皮諾素(FS),它們是天然的抗氧化劑,但其是否參與心肌缺血再灌注損傷的保護作用目前尚不清楚。研究方法結扎冠狀動脈左前降支(LAD)誘導心肌缺血,30分鐘后恢復血流,再灌注1小時。將雄性Wistar大鼠隨機分為四組:假手術組、模型溶媒對照組、SP和FS給藥組。給藥組中,大鼠在LAD結扎前30分鐘將SP或FS(5mg/kg)腹腔注射。再灌注后收集各組血清,ELISA法檢測心肌肌鈣蛋白1(cTnI)含量,比色法檢測乳酸脫氫酶(LDH)活性。留取心臟組織制作石蠟切片、提取蛋白和RNA。蘇木精-伊紅(HE)染色檢測心肌組織損傷,TUNEL法測定各組心肌細胞凋亡率。Western blot和熒光定量PCR分別檢測各心肌樣本蛋白和mRNA表達以探索潛在的分子機制。實驗結果大鼠造模后,心電圖可見明顯的ST段弓背抬高、T波高聳,提示造模成功。SP和FS可顯著減少cTnI和LDH的釋放,并減少缺血再灌注引起的細胞凋亡。HE染色結果顯示,模型大鼠部分心肌細胞表現出水腫和壞死,伴有局部出血和中性粒細胞浸潤,給藥后能顯著減輕這些病理特征。此外,黃酮碳苷還增加LC3B-Ⅱ表達、降低p62,表明其促進了自噬流。分子機制研究發(fā)現,SP和FS均可導致GSK3β Tyr216的磷酸化水平降低,以及過氧化物酶體增殖物激活受體γ共激活因子(PGC)-1α的升高,同時伴隨著下游的紅系衍生的核因子相關因子-2(Nrf2)和血紅素加氧酶1(HO-1)的表達上調。對比SP,FS給藥能更顯著地降低pGSK3β并增加PGC-1α、Nrf2、HO-1的表達,提示FS在細胞保護信號的調控方面優(yōu)于SP。結論酸棗仁黃酮碳苷(SP和FS)能降低心肌缺血再灌注大鼠的cTnI和LDH釋放,減輕心肌組織損傷和細胞凋亡,促進細胞自噬,而這些作用可能與抑制GSK3βTyr216磷酸化、激活PGC-1α/Nrf2/HO-1通路有關。該研究提示SP和FS可能通過GSK3β抑制、促進自噬和PGC-1α/Nrf2/HO-1途徑保護心肌細胞,從而減輕急性心肌缺血再灌注損傷。該研究不僅可以更好地了解心臟保護機制,而且還可以更新有關酸棗仁活性成分心臟保護作用的現有知識,為臨床研發(fā)救治心肌梗死病人的新藥提供前期基礎研究。
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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1 劉宣辰;崔佳t

本文編號：2737260