【摘要】：腫瘤細胞在生長和轉移過程中會通過分泌各種血管生成因子促進血管生成,進而促進腫瘤轉移。堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是一種有效的促血管生成因子。目前,針對bFGF為靶點進行腫瘤藥物的開發(fā)已經成為一個熱點。三葉青是我國獨有而珍貴的一種中藥材,大量研究表明三葉青具有抗腫瘤活性。因此,以bFGF作為靶向分子篩選三葉青中能與bFGF相互作用的親和因子,以及親和因子對bFGF活性的影響是本文論文研究的重點。本試驗利用bFGF親和層析柱篩選三葉青中與bFGF特異性結合的有效成分,并進行鑒定。運用親和層析法、紫外-可見分光光度法、圓二色譜法和非變性聚丙烯酰氨凝膠電泳(Native-PAGE)測定三葉青中bFGF親和因子與bFGF及其修飾體FGFC的親和性;同時以小鼠胚胎成纖維細胞Balb/c 3T3和神經母細胞瘤細胞SH-SY5Y構建模型,采用MTT法和以神經突觸生長為評價指標,檢測親和因子對FGFC生物活性的影響;為了提高鑒定得到的三葉青bFGF親和因子兒茶素的生物利用率及藥效,采用�；揎椃ㄌ接憙翰杷匮苌锏暮铣�。結果如下:1.三葉青中bFGF親和因子篩選結果顯示,三葉青中與bFGF特異性結合的有效成分為兒茶素和原花青素B1。2.親和層析試驗結果顯示,兒茶素及原花青素B1與FGFC結合,且PBS和甘氨酸中未觀察到洗脫物質。紫外-可見分光光度法結果顯示,兒茶素與蛋白孵育后,蛋白在204 nm處的肽鍵吸收峰紅移,原花青素B1與蛋白孵育后,蛋白在204 nm處的肽鍵吸收峰變強,并且紅移。圓二色譜法顯示,兩種物質均加強蛋白CD光譜正峰和負峰的強度。非變性聚丙烯酰氨凝膠電泳結果顯示,兒茶素及原花青素B1抑制FGFC的遷移,且具有劑量依賴性。以上結果均顯示,兒茶素及原花青素B1可以與FGFC親和,并且改變了蛋白質的構象。3.Balb/c 3T3細胞模型試驗結果顯示,1 mg/mL兒茶素對Balb/c 3T3細胞增殖有顯著的抑制作用。500μg/mL和1 mg/mL兒茶素、原花青素B1均對25 ng/mL FGFC促細胞增殖活性有顯著的抑制作用。當濃度為1 mg/mL時,兒茶素對FGFC的抑制作用最強;當濃度為500μg/mL時,原花青素B1的活性最強。4.SH-SY5Y細胞模型試驗結果顯示,兒茶素及原花青素B1濃度在50μg/mL以上有細胞毒性,濃度從1μg/mL到50μg/mL均顯著抑制FGFC的活性,且具有劑量依賴性。5.兒茶素衍生物合成試驗顯示,初步合成兒茶素衍生物,證明了�；揎椃ǖ目尚行浴�
【圖文】：

黃酮類化合物對 bFGF 活性影響的初步研究起始密碼子從一個共同的 mRNA 翻譯而來[10]。低分UG 起始密碼子翻譯的 18 kDa 蛋白質，存在于細胞質，通過與成纖維生長因子受體（fibroblast growth fa激活下游信號通路；高分子量（HMW）bFGF 異構過在 CUG 位點上游翻譯起始和在 AUG 密碼子框內產于 FGFRs[9]。bFGF 由多種細胞類型產生，包括基質等[7,11-12]。大量研究表明 bFGF 是一種多功能生長因胞和骨髓基質細胞等多種細胞的增殖和分化，并能誘進軸突生長的有效生長因子，通過影響神經細胞、雪進近端神經根的軸突生長，，在周圍神經缺損的再生中

圖 1.2 bFGF/FGFR 信號傳遞模型Figure 1.2 Model for bFGF/FGFR signalingGF/FGFR 偶聯(lián)信號轉導途徑的激活在血管生成過程中發(fā)揮著重要作用。其信號級聯(lián)與細胞生長和分化有關，PI3K/Akt 信號級聯(lián)涉及細胞存活和細而 PI3K 和 PKC 信號級聯(lián)在細胞極性的控制中起作用[7]。在內皮細胞中， ERK1/2 和 PKC 信號通路，以及 Ras-MAPK、PI3K-Akt 信號轉導途徑增殖、遷移、蛋白酶產生和血管生成[9]。bFGF 在腫瘤中的作用機制 bFGF/FGFR 信號轉導失調越多的證據表明，bFGF/FGFR 信號轉導涉及多種生物學功能，如胚胎發(fā)生、創(chuàng)傷修復和正常造血，但同時在腫瘤生長過程中也起著重要的作用 FGFR 在正常細胞中的表達受到高度調控，并且 bFGF 信號轉導的終止實現。然而，腫瘤細胞中的 bFGF/FGFR 信號傳導紊亂，這可能與多種機制有關[20]。癌細胞的耐藥性被認為是藥物失效和疾病惡化的主要原因
【學位授予單位】：浙江農林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2704531