【摘要】：腫瘤細(xì)胞在生長和轉(zhuǎn)移過程中會通過分泌各種血管生成因子促進(jìn)血管生成,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是一種有效的促血管生成因子。目前,針對bFGF為靶點(diǎn)進(jìn)行腫瘤藥物的開發(fā)已經(jīng)成為一個熱點(diǎn)。三葉青是我國獨(dú)有而珍貴的一種中藥材,大量研究表明三葉青具有抗腫瘤活性。因此,以bFGF作為靶向分子篩選三葉青中能與bFGF相互作用的親和因子,以及親和因子對bFGF活性的影響是本文論文研究的重點(diǎn)。本試驗(yàn)利用bFGF親和層析柱篩選三葉青中與bFGF特異性結(jié)合的有效成分,并進(jìn)行鑒定。運(yùn)用親和層析法、紫外-可見分光光度法、圓二色譜法和非變性聚丙烯酰氨凝膠電泳(Native-PAGE)測定三葉青中bFGF親和因子與bFGF及其修飾體FGFC的親和性;同時以小鼠胚胎成纖維細(xì)胞Balb/c 3T3和神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y構(gòu)建模型,采用MTT法和以神經(jīng)突觸生長為評價(jià)指標(biāo),檢測親和因子對FGFC生物活性的影響;為了提高鑒定得到的三葉青bFGF親和因子兒茶素的生物利用率及藥效,采用�；揎椃ㄌ接憙翰杷匮苌锏暮铣伞＝Y(jié)果如下:1.三葉青中bFGF親和因子篩選結(jié)果顯示,三葉青中與bFGF特異性結(jié)合的有效成分為兒茶素和原花青素B1。2.親和層析試驗(yàn)結(jié)果顯示,兒茶素及原花青素B1與FGFC結(jié)合,且PBS和甘氨酸中未觀察到洗脫物質(zhì)。紫外-可見分光光度法結(jié)果顯示,兒茶素與蛋白孵育后,蛋白在204 nm處的肽鍵吸收峰紅移,原花青素B1與蛋白孵育后,蛋白在204 nm處的肽鍵吸收峰變強(qiáng),并且紅移。圓二色譜法顯示,兩種物質(zhì)均加強(qiáng)蛋白CD光譜正峰和負(fù)峰的強(qiáng)度。非變性聚丙烯酰氨凝膠電泳結(jié)果顯示,兒茶素及原花青素B1抑制FGFC的遷移,且具有劑量依賴性。以上結(jié)果均顯示,兒茶素及原花青素B1可以與FGFC親和,并且改變了蛋白質(zhì)的構(gòu)象。3.Balb/c 3T3細(xì)胞模型試驗(yàn)結(jié)果顯示,1 mg/mL兒茶素對Balb/c 3T3細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用。500μg/mL和1 mg/mL兒茶素、原花青素B1均對25 ng/mL FGFC促細(xì)胞增殖活性有顯著的抑制作用。當(dāng)濃度為1 mg/mL時,兒茶素對FGFC的抑制作用最強(qiáng);當(dāng)濃度為500μg/mL時,原花青素B1的活性最強(qiáng)。4.SH-SY5Y細(xì)胞模型試驗(yàn)結(jié)果顯示,兒茶素及原花青素B1濃度在50μg/mL以上有細(xì)胞毒性,濃度從1μg/mL到50μg/mL均顯著抑制FGFC的活性,且具有劑量依賴性。5.兒茶素衍生物合成試驗(yàn)顯示,初步合成兒茶素衍生物,證明了酰基化修飾法的可行性。
【圖文】：

黃酮類化合物對 bFGF 活性影響的初步研究起始密碼子從一個共同的 mRNA 翻譯而來[10]。低分UG 起始密碼子翻譯的 18 kDa 蛋白質(zhì)，存在于細(xì)胞質(zhì)，通過與成纖維生長因子受體（fibroblast growth fa激活下游信號通路；高分子量（HMW）bFGF 異構(gòu)過在 CUG 位點(diǎn)上游翻譯起始和在 AUG 密碼子框內(nèi)產(chǎn)于 FGFRs[9]。bFGF 由多種細(xì)胞類型產(chǎn)生，包括基質(zhì)等[7,11-12]。大量研究表明 bFGF 是一種多功能生長因胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞等多種細(xì)胞的增殖和分化，并能誘進(jìn)軸突生長的有效生長因子，通過影響神經(jīng)細(xì)胞、雪進(jìn)近端神經(jīng)根的軸突生長，，在周圍神經(jīng)缺損的再生中

圖 1.2 bFGF/FGFR 信號傳遞模型Figure 1.2 Model for bFGF/FGFR signalingGF/FGFR 偶聯(lián)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的激活在血管生成過程中發(fā)揮著重要作用。其信號級聯(lián)與細(xì)胞生長和分化有關(guān)，PI3K/Akt 信號級聯(lián)涉及細(xì)胞存活和細(xì)而 PI3K 和 PKC 信號級聯(lián)在細(xì)胞極性的控制中起作用[7]。在內(nèi)皮細(xì)胞中， ERK1/2 和 PKC 信號通路，以及 Ras-MAPK、PI3K-Akt 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑增殖、遷移、蛋白酶產(chǎn)生和血管生成[9]。bFGF 在腫瘤中的作用機(jī)制 bFGF/FGFR 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)失調(diào)越多的證據(jù)表明，bFGF/FGFR 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)涉及多種生物學(xué)功能，如胚胎發(fā)生、創(chuàng)傷修復(fù)和正常造血，但同時在腫瘤生長過程中也起著重要的作用 FGFR 在正常細(xì)胞中的表達(dá)受到高度調(diào)控，并且 bFGF 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的終止實(shí)現(xiàn)。然而，腫瘤細(xì)胞中的 bFGF/FGFR 信號傳導(dǎo)紊亂，這可能與多種機(jī)制有關(guān)[20]。癌細(xì)胞的耐藥性被認(rèn)為是藥物失效和疾病惡化的主要原因
【學(xué)位授予單位】：浙江農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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3 李智敏;羅喜平;曾俐琴;彭秀紅;王意;王澤華;;hsa—miRNA27a和hsa—miRNA451通過調(diào)控MDR1/P—gp的表達(dá)和功能參與卵巢癌和乳腺癌細(xì)胞耐藥[J];中國癌癥雜志;2015年03期

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本文編號：2704531