【摘要】：研究背景丹酚酸A(Salvianolic acid A,SAA)是傳統(tǒng)中藥丹參的一種水溶性提取物,研究證實其具有抗炎、抗血栓形成等多種生物學(xué)作用,但其抗腫瘤作用尤其是對急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的調(diào)控作用尚未見報道。研究目的探索SAA在體內(nèi)外對AML細(xì)胞生長增殖、凋亡等的調(diào)節(jié)作用以及對PI3K/Akt信號通路的影響;并進(jìn)一步探索SAA對初發(fā)成人AML患者中提取的原代腫瘤細(xì)胞及正常骨髓單核細(xì)胞的作用差異。研究方法1.MTS法檢測SAA作用下對AML細(xì)胞活性的影響;PI/Annexin V雙染法檢測SAA是否誘導(dǎo)AML細(xì)胞凋亡,并用免疫蛋白印記(Western blot)法進(jìn)一步檢測SAA作用下凋亡相關(guān)蛋白Bcl-x L、Bak、caspase-3、PARP及PI3K/Akt信號通路中關(guān)鍵蛋白分子的表達(dá)水平變化;2.構(gòu)建BALB/c裸鼠AML皮下成瘤模型,腹腔注射SAA研究SAA在裸鼠體內(nèi)對AML腫瘤生長速度的影響;3.Ficoll分離初發(fā)AML患者與非骨髓惡性增殖性疾病患者骨髓中的單個核細(xì)胞(BMMCs),比較SAA誘導(dǎo)兩組細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用及差異;實驗結(jié)果SAA對AML的三個細(xì)胞株(THP-1,KG-1,Kasumi-1)均能顯著抑制其細(xì)胞活性,且SAA作用24小時的半數(shù)抑制率(IC50)分別為42.55μM、39.16μM和5.86μM;SAA通過活化線粒體凋亡通路,活化PARP、caspase-3等凋亡相關(guān)蛋白從而顯著誘導(dǎo)AML細(xì)胞凋亡,且其作用效果與SAA的濃度及作用時間相關(guān);SAA作用后AML細(xì)胞中p-Akt表達(dá)下降,明顯抑制PI3K/Akt信號通路的活性。體外實驗結(jié)果證實腹腔注射SAA能抑制小鼠體內(nèi)AML腫瘤細(xì)胞生長。另外,更重要的是我們發(fā)現(xiàn)SAA對于原代AML腫瘤細(xì)胞也具有同樣的誘導(dǎo)凋亡作用,且與正常骨髓單核細(xì)胞相比其促凋亡作用更為顯著。結(jié)論我們的研究表明SAA在AML中具有誘導(dǎo)凋亡和抗腫瘤作用,提示SAA作為靶向AML的抗腫瘤藥物具有良好的研究前景。
【圖文】：

寧波大學(xué)碩士學(xué)位論文丹參（Salvia miltiorrhiza Bge），為唇形科鼠尾草屬植物丹參的是一種傳統(tǒng)的活血化瘀中藥，其復(fù)方制劑及有效成分提取物廣泛運性肝病、心血管疾病、高脂血癥等的治療[14, 15]。自 20 世紀(jì) 30 年代中分離出丹參酮以來，已有 90 余種化學(xué)成分相繼從丹參中分離鑒分為水溶性與脂溶性化合物兩大類。SAA 是丹參水溶性提取物中的種具有咖啡�？s酚酸結(jié)構(gòu)及新木脂素骨架的水溶性成分，其具有多構(gòu)，，是各類丹參提取物中藥理學(xué)活性最強的成分之一[16]。其化學(xué)C26H22010，化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示：

圖2. SAA 抑制AML 細(xì)胞活性AML 三個細(xì)胞株 THP-1, KG-1, and Kasumi-1 分別用不同濃度的 SAA作用 24 小時后，用MTS 法檢測細(xì)胞活性。以上數(shù)據(jù)為三次獨立重復(fù)實驗的± SD）。SAA 處理組與 PBS 處理組的 AML 細(xì)胞活性相比，* 表示 P<0.05, 表示 P<0.001。Figure 2. SAA reduced cell viability in AML cells.THP-1, KG-1, and Kasumi-1 cells were treated with or without SAA (1-1024-h incubation, cell viability was measured using MTS assay. Data were presenSD from at least three independent experiments. * P<0.05, P<0.01, and Pcells treated with PBS.3.2 SAA 誘導(dǎo) AML 細(xì)胞凋亡鑒于 SAA 在 AML 細(xì)胞中顯著的生長抑制作用，我們用 Annexin V/測了 SAA 對 AML 細(xì)胞凋亡狀態(tài)的影響以進(jìn)一步研究其生長抑制的原因
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285

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本文編號：2704297