發(fā)布時(shí)間：2020-05-27 19:01

【摘要】：目的:通過(guò)給1型糖尿病下肢缺血小鼠灌胃姜黃素,觀察其對(duì)糖尿病下肢缺血的治療作用及其調(diào)控血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖、衰老、遷移和血管生成的能力。并研究姜黃素處理的高糖環(huán)境下人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的改變,以驗(yàn)證姜黃素的作用。方法:用鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)誘導(dǎo)建立1型糖尿病小鼠模型,糖尿病小鼠與非糖尿病小鼠均接受單側(cè)下肢缺血手術(shù),通過(guò)灌胃方式給予小鼠姜黃素處理14天。分別于手術(shù)當(dāng)日、術(shù)后7日和14日用激光多普勒檢測(cè)下肢血流情況,行組織切片熒光染色法觀察缺血部位毛細(xì)血管密度。然后進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn):第一部分,用密度梯度離心法與培養(yǎng)基分選法分離并培養(yǎng)血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs),并使用DAPI染色和Di I-Ac-LDL內(nèi)吞、流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行EPCs鑒定。行β-半乳糖苷酶染色,比較各組細(xì)胞的衰老、凋亡情況;行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn),比較各組細(xì)胞的遷移能力;行管樣形成實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn),比較各組EPCs的血管生成能力及克隆增殖活力;抽提各組細(xì)胞全部RNA,行RT-PCR、qPCR對(duì)各組細(xì)胞的VEGF-α及Ang-I的表達(dá)量進(jìn)行測(cè)定、比較。第二部分:用不同濃度梯度姜黃素處理高糖環(huán)境中的HUVECs4-5天,進(jìn)行管樣形成實(shí)驗(yàn)及β-半乳糖苷酶染色。結(jié)果:經(jīng)腹腔注射STZ,2周后,測(cè)得小鼠血糖均在20mmol/L左右,證明誘導(dǎo)成功。并成功建立糖尿病C57/BL6小鼠下肢缺血模型。激光多普勒檢測(cè)手術(shù)當(dāng)天術(shù)側(cè)下肢缺血明顯,術(shù)后第7天、14天分別測(cè)血流發(fā)現(xiàn)姜黃素治療組小鼠的下肢血流恢復(fù)較未處理糖尿病組明顯通暢,其血流恢復(fù)程度與正常組相當(dāng)。骨骼肌冰凍切片顯示姜黃素處理組血管數(shù)目明顯多于對(duì)照組,說(shuō)明其有促進(jìn)血管再生的能力。體外實(shí)驗(yàn)方面,DAPI染色、Di I-Ac-LDL染色、qPCR及流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證結(jié)果顯示EBM-2培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得的細(xì)胞符合血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的特性。β-半乳糖苷酶染色結(jié)果顯示糖尿病組及橄欖油組EPCs衰老比例約為50%,而姜黃素處理組的衰老比例約20%,明顯低于處理組,證明姜黃素有逆轉(zhuǎn)延緩EPCs衰老的能力。管樣形成實(shí)驗(yàn)、遷移實(shí)驗(yàn)及克隆形成實(shí)驗(yàn)均表明姜黃素處理組的血管生成、遷移及克隆增殖能力均明顯強(qiáng)于對(duì)照組;并且其中的促血管生成因子相關(guān)基因(VEGF-α、Ang-I)的表達(dá)也明顯高于對(duì)照組。此外,用不同濃度姜黃素處理高糖環(huán)境中的HUVECs顯示,姜黃素亦能促進(jìn)高糖條件下的HUVECs的管樣形成并抑制其衰老,并且發(fā)現(xiàn)濃度為5μmol/L時(shí),效果最好。結(jié)論:綜上所述,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)姜黃素有治療1型糖尿病缺血性疾病的作用。體外實(shí)驗(yàn)證明姜黃素能夠調(diào)控糖尿病EPCs的增殖、遷移、衰老、血管形成及其相關(guān)基因表達(dá);姜黃素還有調(diào)節(jié)高糖處理的HUVECs血管形成和衰老的功能。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2683995