【摘要】：目的:研究巴戟天寡糖對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響。方法:全骨髓法體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞,通過體外培養(yǎng)和連續(xù)傳代達到純化和擴增骨髓間充質(zhì)干細胞的目的,倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化情況,流式細胞儀檢測分離培養(yǎng)細胞的表面抗原標志;CCK-8實驗檢測不同濃度巴戟天寡糖(0.5-5000ug/ml)干預(yù)組與對照組(0 ug/ml)分別作用于大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)48h后對細胞的毒性作用;使用堿性磷酸酶檢測試劑盒檢測巴戟天寡糖干預(yù)組和對照組成骨誘導(dǎo)7天后堿性磷酸酶活性;采用茜色紅染色法檢測巴戟天寡糖干預(yù)組和對照組成骨誘導(dǎo)14天后鈣結(jié)節(jié)形成情況,以確定巴戟天寡糖對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響;實時熒光定量PCR法檢測巴戟天寡糖干預(yù)組和對照組成骨誘導(dǎo)7天后成骨相關(guān)基因ALP、Col-Ⅰ、Runx2、OCN的表達情況,從基因水平探討巴戟天寡糖對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化的影響機制。、結(jié)果:全骨髓法能有效得到分離純化的骨髓間充質(zhì)干細胞,體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞生長形態(tài)良好,增殖能力活躍,流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的細胞表面抗原標志CD44、CD73、CD90、CD29的陽性率達90%以上,而造血干細胞表面抗原標志CD34、CD45基本不表達,符合骨髓間充質(zhì)干細胞一般生物學特性;與對照組相比,濃度為(0.5、5、50、500ug/ml)的巴戟天寡糖在48h時對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞沒有毒性(p0.05),而較高濃度的巴戟天寡糖(5000ug/ml)對細胞產(chǎn)生毒性作用(p0.05);與對照組相比,巴戟天寡糖在無毒性濃度范圍內(nèi)(0.5-500ug/ml)成骨誘導(dǎo)7天后,堿性磷酸酶的活性降低;與對照組相比,巴戟天寡糖在濃度為5 ug/ml和50 ug/ml時成骨相關(guān)基因(ALP、Col-Ⅰ、Runx2、OCN)的表達量減少(p0.05);成骨誘導(dǎo)14天后,巴戟天寡糖在濃度為5 ug/ml和50 ug/ml產(chǎn)生的鈣結(jié)節(jié)較對照組減少。結(jié)論:巴戟天寡糖可能有抑制骨髓間充質(zhì)干細胞的成骨分化的作用。
【圖文】：

第1代BMSCs（×5）

第1代BMSCs（×10）
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2663399