【摘要】：目的:探討在高糖環(huán)境下所誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞損傷,通過(guò)各因素處置后,測(cè)定各個(gè)實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞存活率(MTT)、細(xì)胞內(nèi)ROS含量、Honest 33258熒光檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況以及各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中Nrf2、HO-1的蛋白表達(dá)活性的變化,從而說(shuō)明麝香保心丸抗高糖所致心肌損傷的發(fā)生機(jī)制之一是否與激活Nrf2/ARE信號(hào)通路密切相關(guān),從而進(jìn)一步完善麝香保心丸治療糖尿病心肌病的相關(guān)機(jī)制。方法:(1)細(xì)胞存活率檢測(cè):經(jīng)過(guò)不同處理因素分別處理24h后使用酶標(biāo)儀檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)處理組吸光度并記錄OD值。根據(jù)細(xì)胞活性情況(細(xì)胞存活率(%)=As/Ac×100%)分析并進(jìn)行各處理組之間細(xì)胞存活檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)分組:正常對(duì)照組(Glu:5.5mmol/L)(normal control,Con組)、高糖損傷組(Glu:35mmol/L)(high glucose,HG)組、高糖+0.5g/L麝香保心丸保護(hù)組(HG+0.5g/L SBP組)高糖+1g/L麝香保心丸保護(hù)組(HG+1g/L SBP組)、高糖+2g/L麝香保心丸保護(hù)組(HG+2g/L SBP組)、高糖+5g/L麝香保心丸保護(hù)組(HG+5g/L SBP組)、高糖+10g/L麝香保心丸保護(hù)組(HG+10g/L SBP組)共7組;(2)活性氧(ROS)試劑盒檢測(cè)各處理組細(xì)胞中活性氧的水平,實(shí)驗(yàn)分組同上;(3)使用Hoechst33258染色通過(guò)熒光顯微鏡觀察細(xì)胞核改變情況觀察不同處理因素處理24h后H9c2細(xì)胞凋亡程度,設(shè)置為Con組、HG組、HG+2g/L SBP組;(4)蛋白免疫印跡(Western-blot)法:設(shè)置為Con組、HG組、HG+2g/L SBP組,24 h后檢測(cè)各處理組細(xì)胞中Nrf2、HO-1的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)MTT結(jié)果顯示:H9c2細(xì)胞經(jīng)不同處理因素處理24h后得出各處理組OD值,通過(guò)細(xì)胞增殖公式計(jì)算得出各處理組細(xì)胞的存活率,高糖損傷組較正常對(duì)照組細(xì)胞增殖受到抑制(P0.05);經(jīng)不同濃度麝香保心丸處理后,同高糖損傷組相比均出現(xiàn)明顯增殖,細(xì)胞存活數(shù)量增加,且以濃度為2g/L麝香保心丸+高糖損傷處理組后細(xì)胞活力增加最顯著(P0.05)。(2)Honest染色顯示:熒光顯微鏡下發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組中H9c2細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)出正常的藍(lán)色,細(xì)胞核形態(tài)大小一致、核質(zhì)均勻等正常形態(tài)表現(xiàn)。而高糖組中H9c2細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染而顏色透亮,而細(xì)胞核成分裂現(xiàn)象,染色質(zhì)出現(xiàn)了固縮等細(xì)胞凋亡征象。使用2g/L麝香保心丸干預(yù)后,細(xì)胞凋亡明顯減少,表現(xiàn)為細(xì)胞核顏色出現(xiàn)透亮的細(xì)胞數(shù)量明顯減少。(3)ROS含量測(cè)定:使用酶標(biāo)儀測(cè)量結(jié)果顯示,高糖損傷組中H9c2細(xì)胞內(nèi)熒光值較正常對(duì)照組相比大大增加,表明細(xì)胞內(nèi)ROS含量顯著增加;經(jīng)麝香保心丸處理后,較高糖組比其細(xì)胞內(nèi)ROS含量減少,且呈一定濃度依賴性,并且麝香保心丸的濃度為2 g/L處理H9c2細(xì)胞24h后細(xì)胞內(nèi)ROS含量降低更為顯著(P0.01)。(4)免疫印跡結(jié)果顯示:濃度為2g/L麝香保心丸+高糖損傷處理組中心肌細(xì)胞中Nrf2、HO-1的蛋白表達(dá)水平較單純高糖損傷組顯著增加(P0.05),從而說(shuō)明麝香保心丸抗高糖所致心肌損傷與激活Nrf2/ARE信號(hào)通路密切相關(guān)。結(jié)論:本研究再次驗(yàn)證了高糖環(huán)境(35mmol/L)下可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激損傷。也首次說(shuō)明了Nrf2-ARE信號(hào)通路可能參與麝香保心丸改善高糖誘導(dǎo)的H9c2細(xì)胞的損傷,并通過(guò)抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)發(fā)揮作用。
【圖文】：

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié) 果活力檢測(cè) MTT 結(jié)果顯示：H9c2 細(xì)胞經(jīng)不同處理因素處理 24h 后得出各組 O組細(xì)胞的存活率。高糖損傷組較正常對(duì)照組細(xì)胞增殖受到顯著抑制（度麝香保心丸處理后，較高糖損傷組均出現(xiàn)明顯增殖，細(xì)胞存活增保心丸處理組后細(xì)胞活力增加最顯著（P＜0.01）。（見(jiàn)圖 1）

圖 2 不同處理因素處理 H9c2 細(xì)胞后（24h）細(xì)胞體內(nèi) ROS 含量：與對(duì)照組相比，P＜0.05；**：與對(duì)照組相比，P＜0.01； #：與高糖損傷組相比，##：與高糖損傷組相比，P＜0.01）est 33258 檢測(cè)結(jié)果光顯微鏡下發(fā)現(xiàn):正常對(duì)照組中 H9c2 細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)出正常的藍(lán)色，，小一致、核質(zhì)均勻等正常形態(tài)表現(xiàn)。而高糖組中 H9c2 細(xì)胞的細(xì)胞核呈透亮，而細(xì)胞核成分裂現(xiàn)象，染色質(zhì)出現(xiàn)了固縮等細(xì)胞凋亡征象。使用丸干預(yù)后，細(xì)胞凋亡明顯減少，表現(xiàn)為細(xì)胞核顏色出現(xiàn)透亮的細(xì)胞數(shù)量圖 3-圖 5）
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉紅梅;;冠心病穩(wěn)定型心絞痛患者口服麝香保心丸的療效及安全性分析[J];心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2018年06期

2 任蘭芳;趙顯杰;;麝香保心丸的臨床應(yīng)用進(jìn)展[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2019年15期

3 張偉;梅益斌;喻暉;;麝香保心丸預(yù)防糖尿病患者冠脈支架術(shù)后再狹窄的臨床效果分析[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生;2019年26期

4 吳幫衛(wèi);李劍;金波;李慧洋;施海明;羅心平;;麝香保心丸促血管新生的機(jī)制[J];中成藥;2018年06期

5 彭青;王宏;;麝香保心丸治療冠心病慢性心力衰竭的療效觀察[J];深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志;2018年12期

6 張琴悅;李梅;;麝香保心丸治療心絞痛的療效觀察[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2016年14期

7 祁國(guó)杰;;麝香保心丸的臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J];山西醫(yī)藥雜志;2015年20期

8 陳群娟;;麝香保心丸治療冠心病患者60例臨床效果分析[J];健康之路;2016年10期

9 溪雨;;中西藥合用有禁忌[J];家庭醫(yī)藥.就醫(yī)選藥;2017年02期

10 吳海霞;王成全;馮雪影;白焱;王妍敏;;麝香保心丸治療冠心病慢性心力衰竭的臨床觀察[J];中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué);2014年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 宋華;;麝香保心丸的藥理研究與臨床評(píng)價(jià)[A];新世紀(jì)全國(guó)中藥研究暨中藥房管理學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2001年

2 全軍民;姚琪;陶袁;邱j;史一成;;麝香保心丸對(duì)慢性心力衰竭患者療效的臨床觀察[A];2013年浙江省心電生理與起搏學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2013年

3 呂寶經(jīng);;麝香保心丸對(duì)血管保護(hù)的幾種作用[A];第七次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

4 朱平先;曾少堅(jiān);;麝香保心丸對(duì)冠心病舒張功能不全的臨床研究[A];第八次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

5 李德倫;顧忠紅;;麝香保心丸治療冠心病患者20例[A];全國(guó)第十屆心臟學(xué)學(xué)會(huì)、第十三屆心功能學(xué)會(huì)、《心臟雜志》編輯部聯(lián)合學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2007年

6 李德倫;馬麗平;;麝香保心丸在老年冠心病中的作用[A];全國(guó)第十一屆心臟學(xué)會(huì)第十四屆心功能學(xué)會(huì)《心臟雜志》編委會(huì)聯(lián)合學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2009年

7 張薇薇;劉海濤;李占全;;麝香保心丸治療肺動(dòng)脈高壓的臨床觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十五次全國(guó)心血管病學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2013年

8 何寧芳;;麝香保心丸治療老年冠心病療效觀察(摘要)[A];第九次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合虛證與老年病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

9 童嘉毅;徐琢;錢娟英;劉粉梅;姜殿紅;;麝香保心丸對(duì)急性冠脈綜合征患者超敏C反應(yīng)蛋白的影響[A];第一屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合心血管病中青年醫(yī)師論壇論文匯編[C];2008年

10 于榕;史念慈;魯映青;;麝香保心丸對(duì)家兔心肌梗死的作用及機(jī)制[A];第七屆全國(guó)生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2000年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 施海明;麝香保心丸中藥方劑研究榮獲“國(guó)家科學(xué)技術(shù)進(jìn)步獎(jiǎng)”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2019年

2 柏楊;上海和黃藥業(yè)麝香保心丸獲西普金獎(jiǎng)[N];健康報(bào);2019年

3 羅晶;匠心傳承，榮耀前行[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2019年

4 何聞;滿載榮譽(yù)，砥礪前行[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2018年

5 柏楊;系統(tǒng)研究闡釋中藥方劑科學(xué)內(nèi)涵[N];健康報(bào);2017年

6 本報(bào)記者 楊志云;系統(tǒng)研究闡釋中藥方劑科學(xué)內(nèi)涵[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2017年

7 青木;麝香保心丸大型循證研究揭盲[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2017年

8 柏楊;麝香保心丸基礎(chǔ)與臨床研究獲進(jìn)展[N];健康報(bào);2016年

9 柏楊;麝香保心丸的循證方案解讀[N];健康報(bào);2016年

10 柏楊;麝香保心丸研究成果刊登于《科學(xué)》雜志[N];健康報(bào);2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 朱業(yè);豬VSELs生物學(xué)特性和G-CSF聯(lián)合麝香保心丸治療心肌梗死的研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2018年

2 姜鵬;麝香保心丸代謝組學(xué)和代謝動(dòng)力學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

3 周青;高糖低氧條件對(duì)HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性影響的機(jī)制及藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2011年

4 章茜;通陽(yáng)益氣法對(duì)心肌梗死大鼠促血管新生作用及MEK/ERK信號(hào)通路的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 肖帥;麝香保心丸抗高糖所致心肌損傷的機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2019年

2 劉群;基于代謝組學(xué)的麝香保心丸中人參皂苷類成分PK-PD研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

3 陳茜;胸痛中心模式聯(lián)合麝香保心丸治療對(duì)STEMI患者的影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2017年

4 冀慶榮;麝香保心丸治療慢性穩(wěn)定性冠心病的臨床轉(zhuǎn)歸的臨床研究[D];山東大學(xué);2015年

5 向麗;麝香保心丸及組分配伍代謝組學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2012年

6 黃明華;麝香保心丸對(duì)心力衰竭大鼠心肌細(xì)胞凋亡的影響及與Bcl-2信號(hào)通路的關(guān)系研究[D];南昌大學(xué);2017年

7 黃靜靜;麝香保心丸聯(lián)合尼可地爾對(duì)氣虛血瘀型STEMI患者心肌血流灌注及近期預(yù)后的影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2017年

8 李敏;麝香保心丸對(duì)缺氧復(fù)氧心肌細(xì)胞的保護(hù)及作用機(jī)制研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2013年

9 姜鵬;麝香保心丸藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 施珊嵐;麝香保心丸抑制白細(xì)胞粘附改善心梗小鼠微循環(huán)障礙的作用研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2663261