【摘要】：附子理中丸出自宋代《太平惠民和劑局方》,由制附子、干姜、黨參、炒白術(shù)和炙甘草5味中藥組成,具有溫中健脾的功效,是臨床治療脾胃虛寒、嘔吐、脘腹冷痛最常用方劑之一。傳統(tǒng)劑型為大蜜丸、水蜜丸,經(jīng)劑型改造后制成片劑、濃縮丸,前3種劑型收載于《中華人民共和國藥典》,目前4個劑型均在臨床使用,描述功效一致。影響方劑整體療效的因素很多,如物質(zhì)基礎(chǔ)、病/證生理病理狀態(tài)、輔料等等,其中物質(zhì)基礎(chǔ)是決定因素。附子理中丸同方不同劑型物質(zhì)基礎(chǔ)是否存在差異,目前研究不多。此外,制附子為本方君藥,目前藥典僅以佐使藥甘草中一個成分含量進(jìn)行質(zhì)量控制。而方劑的功效是多成分整體作用的結(jié)果。因此,本研究從多成分角度,采用液相色譜-質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合統(tǒng)計分析方法,比較不同劑型附子理中丸活性成分含量;采用藥代動力學(xué)方法,探討輔料煉蜜用量對活性成分吸收的影響;采用正常和脾陽虛模型動物,研究附子理中丸大蜜丸中活性成分在正常生理和病理狀態(tài)下的藥代動力學(xué)特征,從體內(nèi)外探討同方不同劑型藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的差異,為完善附子理中丸質(zhì)量評價方法和臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。在文獻(xiàn)研究基礎(chǔ)上,本文從下述方面進(jìn)行了實驗研究。1 制備工藝對附子理中丸大蜜丸、濃縮丸和片劑主要成分含量的影響附子理中丸大蜜丸、濃縮丸和片劑,除制附子外,其余4味中藥提取工藝不同,成型工藝也存在差異。為確定制備工藝對不同劑型活性成分的影響,選取同一批次原料飲片,制備3種劑型的成品。采用RRLC-TQ-MS/MS方法,經(jīng)方法學(xué)考察,建立了同時測定處方中16個活性成分含量的方法。因制附子均為原粉入藥,因此3種劑型中制附子6個生物堿含量無顯著差異(P0.05);由于大蜜丸各藥味均為原粉入藥,而濃縮丸和片劑經(jīng)過提取、濃縮等熱處理過程,因此干姜、黨參、炒白術(shù)和炙甘草中的9個成分(除異甘草素在大蜜丸與濃縮丸之間無顯著差異,P0.05),在大蜜丸中的含量均顯著高于濃縮丸和片劑(P0.01);濃縮丸和片劑比較,干姜和白術(shù)均采用滲漉,但乙醇濃度不同,后續(xù)成型工藝也存在差異,引起對應(yīng)的成分6-姜辣素和3個白術(shù)內(nèi)酯成分具有顯著差異(P0.01);黨參在濃縮丸中采用乙醇提取,而在片劑中采用水提取,顯示腺苷含量在濃縮丸中顯著高于片劑(P0.01);甘草在濃縮丸中部分采用乙醇提取、部分原粉入藥,而在片劑中采用水提取,顯示濃縮丸中甘草黃酮成分甘草素、異甘草素和甘草苷的含量都顯著高于片劑(P0.01)。顯示測定的16個活性成分中有9個含量存在顯著差異。結(jié)果提示,不同提取溶劑和乙醇濃度等制備工藝不同,能引起3種劑型成品中活性成分含量顯著差異。同時,遇光遇熱不穩(wěn)定的成分,在制備工藝復(fù)雜的濃縮丸和片劑中,容易受到影響而顯著降低。2不同廠家生產(chǎn)的附子理中丸大蜜丸與濃縮丸主要活性成分含量對比研究復(fù)方整體成分組成還受到原料差異的影響,為從整體上比較附子理中丸傳統(tǒng)劑型與現(xiàn)代劑型活性成分含量的差異,選取11個廠家生產(chǎn)的共49個批次成品作為研究對象,包括大蜜丸27個批次、濃縮丸22個批次,將原料飲片質(zhì)量可能存在的差異納入考慮范疇,測定16個活性成分含量,并采用PCA和OPLS方法對結(jié)果進(jìn)行分析,以科學(xué)評價兩種劑型成分含量的異同。結(jié)果顯示,有14個批次成品原料制附子中3種雙酯型生物堿的總含量超過0.01%,5個批次3種單酯型生物堿的總含量低于0.01%,均不符合藥典規(guī)定;大蜜丸與濃縮丸成分差異顯著,差異主要來源于干姜中的6-姜辣素、白術(shù)中的白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ,大蜜丸成分含量顯著高于濃縮丸;同一劑型不同廠家成品含量差異大于同一廠家的;大蜜丸不同廠家成分含量差異,主要源于制附子中的6個生物堿成分烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿:濃縮丸不同廠家差異,源于干姜中的6-姜辣素、黨參中的腺苷、以及制附子中的苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿。結(jié)果提示,附子理中丸大蜜丸與濃縮丸主要活性成分含量顯著差異成分為對光和熱不穩(wěn)定的成分,與制備工藝有關(guān)。在復(fù)方的質(zhì)量控制中,需要更加注意這些不穩(wěn)定的成分。同時,需要加強中成藥原料質(zhì)量,尤其是有毒中藥制附子的質(zhì)量控制。3附子理中丸大蜜丸和水蜜丸藥代動力學(xué)特征對比研究——煉蜜量的影響附子理中丸大蜜丸和水蜜丸兩種劑型唯一的區(qū)別在于輔料煉蜜的用量不同,大蜜丸的煉蜜用量為水蜜丸的兩倍。為了探究輔料煉蜜對附子理中丸活性成分藥代動力學(xué)的影響,選擇SD大鼠,分別給予含蜜量不同的附子理中丸大蜜丸和水蜜丸,于給藥后不同時間點取血,采用RRLC-TQ-MS/MS方法,經(jīng)方法學(xué)考察,建立了同時測定其中21個活性成分血藥濃度的方法,測定不同時間點血藥濃度,繪制血藥濃度-時間曲線,計算藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示具有顯著差異的藥動學(xué)參數(shù)包括,制附子雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的藥-時曲線下面積(AUC)、藥峰濃度(Cmax)、達(dá)峰時間(Tmax)和半衰期(t1/2)均為大蜜丸水蜜丸,而清除率(CL)為大蜜丸水蜜丸;單酯型生物堿中苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿的AUC(0-t)、Tmax和t1/2均為大蜜丸水蜜丸,而Cmax和CL為大蜜丸水蜜丸,兩種劑型均未檢測到苯甲酰烏頭原堿;醇胺型生物堿烏頭原堿、新烏頭原堿和次烏頭原堿的AUC(0-t)、Tmax和t1/2均為大蜜丸水蜜丸,而Cmax和CL為大蜜丸水蜜丸;干姜中6-姜辣素在兩種劑型中均未被檢測到;黨參中腺苷和黨參炔苷在大蜜丸中均檢測到,而在水蜜丸中均未檢測到;甘草中甘草苷、異甘草苷、甘草素和甘草酸的AUC(0-t)和Cmax均為大蜜丸水蜜丸,異甘草苷、甘草素、異甘草素和甘草酸的t1/2為大蜜丸水蜜丸,異甘草苷和甘草酸的Tmax為大蜜丸水蜜丸,異甘草苷、甘草素、異甘草素和甘草酸的CL為大蜜丸水蜜丸;白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的AUC(0-t)、Cmax均為大蜜丸水蜜丸,而CL為大蜜丸水蜜丸,白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ的AUC(0-t)、Cmax均為大蜜丸水蜜丸,而CL為大蜜丸水蜜丸。即與水蜜丸比較,大蜜丸中制附子3種雙酯型生物堿、甘草4種黃酮和甘草酸、以及白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ或達(dá)峰時間延長,或消除緩慢。輔料煉蜜具有緩和藥物某些成分吸收的作用。4附子理中丸大蜜丸在正常和模型動物的藥代動力學(xué)特征對比研究藥物主要應(yīng)用于病理狀態(tài)下,不同機體狀態(tài)對藥物活性成分藥代動力學(xué)特征可能產(chǎn)生影響。因此采用已建立的RRLC-TQ-MS/MS方法,比較了附子理中丸大蜜丸在正常和脾陽虛模型大鼠單次給藥、以及模型動物單次和多次給藥21個活性成分體內(nèi)吸收情況。正常動物與模型動物單次給藥結(jié)果顯示,具有顯著差異的藥動學(xué)參數(shù)包括:制附子3種雙酯型生物堿的AUC(0-t和 Cmax均為模型組正常組,而CL為模型組正常組,次烏頭堿的t1/2為模型組正常組,;單酯型生物堿中苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿的AUC(0-t)、Cmmx和t1/2均為模型組正常組,而Tmax和CL為模型組正常組,正常組未檢測到苯甲酰烏頭原堿,而在模型組中檢測到;醇胺型生物堿中烏頭原堿和次烏頭原堿AUC(0-t)均為模型組正常組,新烏頭原堿和次烏頭原堿Cmax均為模型組正常組,而烏頭原堿的CL為模型組正常組;干姜中6-姜辣素在兩種動物中均未被檢測到;黨參中腺苷和黨參炔苷在正常組中均檢測到,而在模型組中均未檢測到;甘草中甘草苷和異甘草苷的AUC(0-t)、Cmax和t1/2均為模型組正常組,而CL為模型組正常組,甘草素和異甘草素的AUC(0-t)和t1/2均為模型組正常組,而CL為模型組正常組,甘草酸和甘草次酸的AUC(0-t)和Cmax均為模型組正常組,而甘草次酸的CL為模型組正常組;白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的AUC(0-t)、Cmax和t1/2均為模型組正常組,白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的AUC(0-t)、和Cmax均為模型組正常組,白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ在正常組中檢測到,而在模型組中未檢測到。提示與正常動物比較,模型動物烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿、甘草苷、異甘草昔、甘草酸及甘草次酸9個成分入血增多,消除減慢。表明脾陽虛病理狀態(tài)促進(jìn)了附子理中丸大蜜丸活性成分的吸收入血,代謝和消除減慢,作用時間延長,從而更好地發(fā)揮治療作用。模型動物單次和多次給藥藥動學(xué)結(jié)果顯示,具有顯著差異的藥動學(xué)參數(shù)包括:制附子中3種雙酯型生物堿的AUC(0-t)和Cmax均為單次給藥組多次給藥組,而烏頭堿和新烏頭堿的CL為單次給藥組多次給藥組;3種單酯型生物堿的AUC(0-t)為單次給藥組多次給藥組,苯甲酰烏頭原堿和苯甲酰新烏頭原堿的Cmax為單次給藥組多次給藥組,苯甲酰新烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿的t1/2為單次給藥組多次給藥組,而3種單酯型生物堿的CL為單次給藥組多次給藥組;醇胺型生物堿中烏頭原堿和新烏頭原堿的AUC(0-t)、和t1/2均為單次給藥組多次給藥組,而CL為單次給藥組多次給藥組,新烏頭原堿的Cmax為單次給藥組多次給藥組;甘草中異甘草苷的AUC(0-t)、t1/2和Cmax均為單次給藥組多次給藥組,而CL單次給藥組多次給藥組;白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的AUC(0-t)和Cmax均為單次給藥組多次給藥組,而Tmax和CL為單次給藥組多次給藥組,白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的AUC(0-t)和Cmax均為單次給藥組多次給藥組,而Tmax和CL單次給藥組多次給藥組,白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ在多次給藥組中檢測到,而在單次給藥組中未檢測到。即與模型動物單次給藥比較,模型動物多次給藥后附子理中丸大蜜丸毒性最大的3種雙酯型生物堿、甘草中異甘草苷以及白術(shù)中白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ入血減少且消除加快,并接近于正常動物單次給藥的藥動學(xué)參數(shù)。提示病理狀態(tài)下隨著給藥次數(shù)增加,活性成分體內(nèi)吸收發(fā)生改變。結(jié)論不同劑型的附子理中丸中對光和熱不穩(wěn)定的成分含量存在顯著差異。傳統(tǒng)劑型中的輔料煉蜜能夠起到延緩成分吸收的作用。病理狀態(tài)能夠促進(jìn)附子理中丸活性成分吸收,從而更好地發(fā)揮治療作用。此外,應(yīng)加強中成藥原料尤其是有毒中藥制附子的質(zhì)量控制。
【圖文】：

圖３邋３種劑型附子理中丸各成分含量對比圖逡逑

根據(jù)１６種活性成分對分離的貢獻(xiàn)順序來識別變量，進(jìn)行可變重要性參數(shù)逡逑（ＶＩＰ）分析，具有大于０．３的ＶＩＰ的變量傾向于與樣品的分離相關(guān)。ＶＩＰ分析逡逑結(jié)果顯示（圖４Ｃ），在１６個活性成分的ＶＩＰ值中具有良好置信區(qū)間的是６－姜辣逡逑素、白術(shù)內(nèi)酯Ｉ、白術(shù)內(nèi)酯ＩＩ和白術(shù)內(nèi)酯ＩＩＩ。進(jìn)一步采用ＯＰＬＳ法（圖４Ｄ）和逡逑傳統(tǒng)統(tǒng)計分析方法Ｔ檢驗（圖４Ｅ）對這四種成分進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，大蜜丸逡逑樣品中６－姜辣素、白術(shù)內(nèi)酯Ｉ、白術(shù)內(nèi)酯ＩＩ和白術(shù)內(nèi)酯ＩＩＩ的含量明顯高于濃縮逡逑丸樣品，表明導(dǎo)致大蜜丸和濃縮丸樣品含量差異的最相關(guān)變量正是這４個成分。逡逑研宄結(jié)果中存在差異的４種成分均為遇熱遇光不穩(wěn)定成分，從制備工藝中可逡逑以發(fā)現(xiàn)，大蜜丸原料均為細(xì)粉入藥，，與煉蜜混勻，而在濃縮丸的生產(chǎn)過程中，干逡逑姜、白術(shù)和黨參需使用７０％乙醇進(jìn)行熱提取，因此這４種成分的含量會受到影響逡逑而顯著降低。逡逑表２－３含量測定結(jié)果顯示，除３９號樣品以外，所有樣品均含有較高濃度的逡逑甘草苷，均符合藥典附子理中丸項下的含量標(biāo)準(zhǔn)；甘草次酸在１６個成分中含量逡逑最高
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R286.0

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2662532