【摘要】：大蔥(Allium fistulosum L)作為常見(jiàn)食物及輔食香料中的一種,因其具有抗菌解毒去腥的功效備受人們青睞。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為蔥屬溫性,具有祛除風(fēng)寒、康健脾胃以及殺菌的功效,還可祛痰、利肺通陽(yáng)、促進(jìn)排汗解表、鎮(zhèn)痛療傷、疏通乳腺、快速止血。因此大蔥作為藥食兩用品應(yīng)用十分廣泛。目前大蔥的生物活性研究比較稀少,實(shí)際應(yīng)用領(lǐng)域相對(duì)較窄,為了更加充分的利用和開(kāi)發(fā)大蔥天然資源,本研究以大蔥為原料,通過(guò)工藝優(yōu)化得到大蔥乙醇提取物(E001),用有機(jī)溶劑萃取法將大蔥醇提物粗分為石油醚萃取物(F001)、乙酸乙酯萃取物(F002)、正丁醇萃取物(F003)和水溶物(F004)4個(gè)溶劑極性部位,對(duì)大蔥乙醇提取物和各極性部位體外降糖活性和抗菌活性進(jìn)行了篩選,并初步探討了大蔥F002部位對(duì)HepG_2細(xì)胞胰島素抵抗模型糖代謝的作用機(jī)制;同時(shí)對(duì)大蔥乙醇提取物和各極性部位進(jìn)行抗菌活性研究,并且對(duì)經(jīng)過(guò)工藝優(yōu)化提取大蔥的揮發(fā)性成分進(jìn)行了抗菌活性和化學(xué)成分分析。(1)以經(jīng)鑒定為Allium fistulosum L的市售普通大蔥為原料,以總黃酮含量和浸膏得率為評(píng)價(jià)指標(biāo),乙醇為溶劑,利用回流提取的方法提取得到大蔥乙醇提取物(E001),采用單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)乙醇濃度,料液比,回流時(shí)間這三個(gè)因素進(jìn)行考察,得到最優(yōu)回流提取條件為:采用1:20料液比、60%乙醇在80℃下水浴加熱回流提取4小時(shí)。以?xún)?yōu)化后的提取方案得到乙醇提取物(E001),依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇逐步萃取分別得到4個(gè)不同極性部位,即石油醚萃取物(F001)、乙酸乙酯萃取物(F002)、正丁醇萃取物(F003)和水溶性部位(F004)。(2)由于發(fā)生葡萄糖代謝主要部位在肝臟,因此選用HepG2細(xì)胞研究大蔥各部位降糖作用。采用高濃度的葡萄糖誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞產(chǎn)生胰島素抵抗,大蔥乙醇提取物(E001)和4個(gè)不同極性部位通過(guò)葡萄糖氧化酶法進(jìn)行初篩,最后選取能夠增加胰島素抵抗細(xì)胞模型對(duì)葡萄糖吸收的F002作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象、通過(guò)葡萄糖氧化酶法檢測(cè)F002對(duì)胰島素抵抗細(xì)胞模型的葡萄糖攝取量、四哩鹽比色試驗(yàn)(MTT)檢測(cè)F002對(duì)細(xì)胞毒性和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)胰島素信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示誘導(dǎo)胰島素抵抗模型的最佳葡萄糖濃度為40 mmol/L,且通過(guò)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證葡萄糖抵抗模型構(gòu)建成功。F002濃度在20-80 mg/mL干預(yù)胰島素抵抗模型細(xì)胞時(shí),可以增加細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取量,且在相同濃度下細(xì)胞存活率保持在80%以上,說(shuō)明F002在此濃度下對(duì)細(xì)胞毒性較小且有效;Western blot檢測(cè)結(jié)果表明F002可以調(diào)節(jié)因胰島素抵抗細(xì)胞中p-IRS-1水平的升高、IRS-1、IRβ和GLUT2水平下降的情況,從而改善胰島素抵抗。(3)選取金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌和蘇云金桿菌8種廣譜細(xì)菌,用濾紙片法對(duì)乙醇提取物及不同極性部位高低濃度(0.1 g/mL和0.05 g/mL)進(jìn)行抑菌活性測(cè)定,有抑菌活性的部位進(jìn)一步測(cè)定其最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)。結(jié)果:高低濃度E001和F001對(duì)8種細(xì)菌均有較強(qiáng)抑菌作用,尤其是F001對(duì)銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌極強(qiáng),MIC值為3.125 mg/mL,MBC值在50 mg/mL;F002對(duì)8種細(xì)菌均有明顯抑菌效果,尤其是對(duì)和肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌和大腸桿菌抑菌效果極強(qiáng);F003抑菌效果最差,低濃度下只對(duì)肺炎克雷伯菌有抑制作用,而高濃度下也對(duì)銅綠假單胞菌和糞腸球菌無(wú)抑制作用。F004抑制細(xì)菌生長(zhǎng)能力較弱,但對(duì)金黃色葡萄球菌抑制作用最明顯。(4)以超聲輔助水蒸氣蒸餾的方法提取大蔥揮發(fā)性成分,以揮發(fā)性成分提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo),通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)對(duì)超聲時(shí)間,料液比和提取時(shí)間進(jìn)行考察,運(yùn)用GC-MS對(duì)其主要化學(xué)成分進(jìn)行鑒定并對(duì)提取獲得的大蔥揮發(fā)性成分進(jìn)行抗菌活性評(píng)價(jià)。結(jié)果:大蔥揮發(fā)性成分提取最佳工藝為超聲40 min,料液比1:3,蒸餾時(shí)間3 h。大蔥揮發(fā)性成分實(shí)際提取率為0.0416%。通過(guò)GC-MS分析,NIST質(zhì)譜庫(kù)檢索,鑒定了其中42個(gè)主要化合物,占總揮發(fā)性成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為99.99%,運(yùn)用峰面積歸一法確定各個(gè)組分的含量,其中主要物質(zhì)為含硫化合物,含量較多的是氟胞嘧啶、烯丙基異丙基硫醚、丙烯基甲基硫醚,二甲基三硫化物、二丙基三硫化物、四硫化物、噻吩、噻烷和噻唑類(lèi)。生物活性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)表明大蔥揮發(fā)性成分對(duì)所選取的8種菌株均有很好的活性。(5)采用淀粉和糊精作為輔料,90%乙醇作為潤(rùn)濕劑對(duì)大蔥乙醇總提物進(jìn)行制粒,研究大蔥提取物硬膠囊制備工藝。結(jié)果:按照最佳提取工藝大量提取,回收乙醇,在真空干燥箱中干燥至恒重,稱(chēng)取16.2 g干燥大蔥總提取物粉末,添加4.9 g淀粉,4.9 g糊精,混勻,用90%乙醇作為潤(rùn)濕劑進(jìn)行濕法制粒,60℃真空干燥后,制粒,過(guò)40目篩,200目篩除去細(xì)粉,濕度低于60%環(huán)境下將藥粉顆粒裝入3號(hào)膠囊,制粒100粒,測(cè)得每粒膠囊含總黃酮5 mg。即成大蔥提取物膠囊。
【圖文】：

法分離純化得到兩種化合物，并命名為紅蔥乙素和異紅蔥乙素，鑒定結(jié)構(gòu)如下：圖1-1 紅蔥中兩種蒽醌類(lèi)化合物紅蔥乙素和異紅蔥乙素Fig.1-1 Red onion in two anthraquinones red onion B and allium red onion B prime1.3.3 黃酮類(lèi)成分自然界中，黃酮類(lèi)化合物存在于幾乎所有植物中，因?yàn)橹参锏纳L(zhǎng)、發(fā)育、開(kāi)花、結(jié)果與它息息相關(guān)，黃酮類(lèi)化合物也廣泛應(yīng)用于治療心血管疾病，，還有多種功效，因此對(duì)它的研究顯得格外重要，大多數(shù)研究天然產(chǎn)物的科研工作者，都主要提取其黃酮類(lèi)成分來(lái)研究其各種生物學(xué)活性。對(duì)大蔥的黃酮類(lèi)化合物研究不多，董勇U喌萚18]提取大蔥黃酮類(lèi)成分，利用各種柱色譜進(jìn)行分離純化，得到 6 種黃酮類(lèi)成分

保健劑提供功效實(shí)驗(yàn)說(shuō)明。對(duì)于大蔥活性研究非常有必要，可為大蔥后續(xù)開(kāi)發(fā)推廣具有實(shí)踐意義。圖1-2 大蔥提取物中6種黃酮類(lèi)化合物Fig.1-2 Allium fistulosum L extract 6 flavonoids
【學(xué)位授予單位】：武漢工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R285

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本文編號(hào)：2661173