【摘要】：目的:本課題采用響應曲面法優(yōu)化瘤果黑種草子總黃酮的提取工藝,檢測瘤果黑種草子總黃酮體外抗腫瘤細胞增殖能力和體外抗腫瘤細胞遷移能力,進行自噬相關基因的檢測,探討瘤果黑種草子總黃酮體外抗腫瘤活性的作用機制。方法:選取甲醇體積分數(shù)、提取時間、提取溫度等3個因素為考察指標,采用響應面法分析優(yōu)化瘤果黑種草子總黃酮的提取工藝。經(jīng)瘤果黑種草子藥物干預人結(jié)腸癌細胞株SW480、人結(jié)腸癌細胞株Caco-2、人乳腺癌細胞株MCF-7和人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251,采用MTT法檢測瘤果黑種草子總黃酮體外抗腫瘤細胞增殖能力;用倒置顯微鏡觀察對人結(jié)腸癌細胞株SW480、人結(jié)腸癌細胞株Caco-2、人乳腺癌細胞株MCF-7和人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251細胞形態(tài)的影響。通過劃痕實驗檢測對腫瘤細胞遷移能力的影響,并進一步使用熒光定量PCR方法檢測自噬相關基因。結(jié)果:1.響應面法優(yōu)化瘤果黑種草子總黃酮提取工藝:甲醇體積分數(shù)61%、提取時間1.5 h、提取溫度74℃、料液比1:25 g/mL,在此條件下瘤果黑種草子總黃酮得率的平均值2.2314 mg/g。2.瘤果黑種草子總黃酮體外抗腫瘤細胞增殖能力的檢測:瘤果黑種草子總黃酮對人結(jié)腸癌細胞株SW480、人結(jié)腸癌細胞株Caco-2、人乳腺癌細胞株MCF-7、人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251的增殖均有抑制作用。瘤果黑種草子總黃酮對人結(jié)腸癌細胞株SW480、人結(jié)腸癌細胞株Caco-2在藥物濃度為15μg/mL時開始起效(P0.05),之后隨著藥物濃度的升高瘤果黑種草子總黃酮對人結(jié)腸癌細胞株SW480、人結(jié)腸癌細胞株Caco-2的抑制率也不斷升高,呈現(xiàn)良好的量效依賴關系;瘤果黑種草子總黃酮對人人乳腺癌細胞株MCF-7、人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251在藥物濃度為10μg/mL時開始起效(P0.05),之后隨著藥物濃度的升高瘤果黑種草子總黃酮對人乳腺癌細胞株MCF-7、人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251的抑制率也不斷升高,呈現(xiàn)良好的量效依賴關系。3.瘤果黑種草子總黃酮體外抗腫瘤細胞遷移能力的檢測:藥物干預24 h時后,人結(jié)腸癌細胞株SW480、人結(jié)腸癌細胞株Caco-2、人乳腺癌細胞株MCF-7、人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251空白對照組劃痕處細胞趨于匯合,各藥物干預組劃痕處變化不大。各藥物干預組腫瘤細胞遷移距離比各空白對照組小,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.自噬相關基因的熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示:與空白對照組相比,人結(jié)腸癌細胞株SW480、人乳腺癌細胞株MCF-7各藥物干預組自噬相關基因BECN1的相對表達量均有不同程度的上升;人結(jié)腸癌細胞株Caco-2、人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251各藥物干預組自噬相關基因BECN1的相對表達量均有不同程度的下降;且差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與空白對照組相比,人結(jié)腸癌細胞株SW480、人結(jié)腸癌細胞株Caco-2、人乳腺癌細胞株MCF-7各藥物干預組自噬相關基因MAPILC3B相對表達量較空白對照組均有所上升;人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251各藥物干預組自噬相關基因MAPILC3B相對表達量較空白對照組均有不同程度的下降;且差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:綜上,響應面法優(yōu)化了瘤果黑種草子總黃酮提取工藝。瘤果黑種草子總黃酮在體外對人結(jié)腸癌細胞株SW480、人結(jié)腸癌細胞株Caco-2、人乳腺癌細胞株MCF-7和人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251的增殖具有抑制作用。瘤果黑種草子總黃酮在體外對人結(jié)腸癌細胞株SW480、人結(jié)腸癌細胞株Caco-2、人乳腺癌細胞株MCF-7和人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251的遷移有抑制作用。實時熒光定量PCR結(jié)果初步揭示了誘導腫瘤細胞發(fā)生自噬性死亡可能是瘤果黑種草子總黃酮體外抗腫瘤作用的機制之一。
【學位授予單位】：新疆醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R284;R285

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本文編號：2646846