發(fā)布時(shí)間：2020-04-30 11:41

【摘要】：近年,非酒精性脂肪肝病(NAFLD)呈現(xiàn)低齡化發(fā)展和患病率升高的趨勢(shì),且NAFLD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣,目前普遍認(rèn)為,NAFLD的發(fā)生與胰島素抵抗、肥胖和血脂異常等因素有關(guān)。臨床研究表明,抗凝療法可以改善NAFLD,而凝血VA烷A2(TXA2)通路與脂類物質(zhì)花生四烯酸的代謝有關(guān),大豆提取物金雀異黃酮具有降低血脂的作用,所以本研究用金雀異黃酮干預(yù)高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD小鼠,探究金雀異黃酮對(duì)NAFLD的預(yù)防作用和其對(duì)TXA2通路的影響以及可能作用機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容如下:首先,研究金雀異黃酮對(duì)小鼠NAFLD的預(yù)防作用。將4周齡C57BL/6J雄性小鼠,隨機(jī)分為5組:正常對(duì)照組(Normal Control,NC)、高脂對(duì)照組(High Fat Diet,HFD)、低劑量金雀異黃酮組(Low Dose Genistein,LGEN)、高劑量金雀異黃酮組(High Dose Genistein,HGEN)、阿司匹林陽(yáng)性對(duì)照組(Aspisin,ASA)。研究金雀異黃酮對(duì)小鼠體重、血糖、基礎(chǔ)代謝指標(biāo)以及血脂指標(biāo)等的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與HFD組相比,金雀異黃酮可以降低小鼠體重,改善胰島素抵抗與葡萄糖耐受,降低肝重、肝重指數(shù)、附睪白色脂肪重,降低高脂飲食小鼠血漿中TG、TC、ALT、AST、LDL-C以及前列腺素系列指標(biāo)的水平。肝臟切片HE染色顯示,干預(yù)組小鼠未見明顯的脂肪變性與脂滴聚集,肝細(xì)胞排列整齊。血漿和肝臟中的TNF-α水平顯著下降。HFD組小鼠肝臟中凝血VA烷受體(TBXA2R)顯著增加。然后,研究金雀異黃酮對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞(Hep-G2)胰島素抵抗的改善作用。測(cè)定金雀異黃酮對(duì)Hep-G2細(xì)胞的毒性,并進(jìn)行預(yù)處理后誘導(dǎo)體外胰島素抵抗模型,使用WB法測(cè)定細(xì)胞中磷酸化的胰島素受體(P-IR)和胰島素受體底物(P-IRS1)表達(dá)量的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與模型組細(xì)胞相比,金雀異黃酮可以上調(diào)Hep-G2細(xì)胞中PIR和P-IRS1蛋白的表達(dá)量,改善細(xì)胞的胰島素抵抗。最后,探究金雀異黃酮改善胰島素抵抗的作用靶點(diǎn)。將Hep-G2細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,沉默TBXA2R基因后,以SQ29548為陽(yáng)性對(duì)照物,I-BOP為陰性對(duì)照物,用金雀異黃酮預(yù)處理后,誘導(dǎo)胰島素抵抗模型。結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)Hep-G2細(xì)胞中TBXA2R基因沉默后,金雀異黃酮不能改善其由TNF-α誘導(dǎo)的胰島素抵抗。細(xì)胞中P-IR和P-IRS1蛋白的表達(dá)量與細(xì)胞消耗葡萄糖量的檢測(cè)結(jié)果一致。綜合分析金雀異黃酮對(duì)小鼠NAFLD的預(yù)防作用和對(duì)Hep-G2細(xì)胞胰島素抵抗的改善作用,發(fā)現(xiàn)金雀異黃酮可以通過調(diào)節(jié)花生四烯酸的代謝,作用于TXA2通路,改善胰島素抵抗,進(jìn)而預(yù)防高脂飲食誘導(dǎo)的NAFLD的發(fā)生。
【圖文】：

第果與討論3 結(jié)果與討論金雀異黃酮的含量酮因其具有雌激素作用，現(xiàn)已作為一種新型飼料添加劑被廣泛應(yīng)異黃酮作為功能成分對(duì)于高脂膳食誘導(dǎo)的 NAFLD 的影響，為更需對(duì)維持飼料和合成高脂飼料中所含有的金雀異黃酮進(jìn)行定量。準(zhǔn)品金雀異黃酮進(jìn)行高效液相分析，發(fā)現(xiàn)其在 260 nm 處的最大吸5.45 min 附近，采用 260 nm 作為檢測(cè)波長(zhǎng)測(cè)定飼料樣品中金雀異黃相色譜圖結(jié)果可知，NC 組飼料樣品，在 5.43 min 處有一個(gè)吸收樣品在 5.45 min 附近沒有峰，如圖 3-1 所示。故可判斷在 NC 組飼的金雀異黃酮，而 HFD 組飼料中則未檢測(cè)到金雀異黃酮的存在。

故可以忽略維持飼料中所含有的金雀異黃酮對(duì)于試驗(yàn)的黃酮干預(yù) NAFLD 小鼠體內(nèi)試驗(yàn)驗(yàn)，長(zhǎng)期高脂飼料喂養(yǎng) C57BL/6J 小鼠，誘導(dǎo) NAFLD 模型。%，過多的脂肪攝入易導(dǎo)致小鼠體內(nèi)脂肪堆積而產(chǎn)生肥胖，同升高，而多數(shù)學(xué)者認(rèn)為 NAFLD 與胰島素抵抗關(guān)系密切[96]，是重要表現(xiàn)[97]。近期研究發(fā)現(xiàn)，肝臟內(nèi)過度的脂肪動(dòng)員和甘油三的游離脂肪酸，造成肝臟脂毒性，其關(guān)鍵因素是胰島素抵抗[98][血脂異常等都會(huì)促進(jìn) NAFLD 的發(fā)生和發(fā)展。因此常用高脂飲食人類脂肪肝的發(fā)展過程極為相似，是小鼠 NAFLD 模型的常用血癥和胰島素抵抗向 NAFLD 轉(zhuǎn)變的過程，方法簡(jiǎn)單，成模率高物福利要求，，由于試驗(yàn)周期較長(zhǎng)，本試驗(yàn)未采用灌胃方式，而鼠飼料中，阿司匹林溶解于水中，每天更換。采用文獻(xiàn)方法[100EN 和 HGEN 組每千克小鼠飼料中分別添加 400mg、800mg 的每 1 L 水中添加 200 mg 阿司匹林。其飼養(yǎng)過程如圖 3-2 所示。
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2645727