油酸通過誘導(dǎo)凋亡和自噬抑制舌鱗癌細(xì)胞增殖機制的研究
發(fā)布時間：2020-04-18 02:47
【摘要】：目的:油酸是中藥鴉膽子油的主要成分之一,被報道對多種腫瘤具有明顯的抗癌作用。本課題旨在探究油酸(OA)對舌鱗癌細(xì)胞(TSCC)增殖的作用機制。方法:我們通過CCK8、Edu實驗及建立舌鱗癌裸鼠移植瘤模型從體外、體內(nèi)兩方面觀察OA對TSCC增殖的作用;同時利用流式細(xì)胞儀檢測OA作用后TSCC細(xì)胞周期的變化;再應(yīng)用Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡實驗、TUNEL實驗、透射電鏡觀察OA作用后TSCC凋亡和自噬;Western Blot、免疫組化實驗進(jìn)一步驗證相關(guān)蛋白的變化。結(jié)果:1.體內(nèi)外實驗均證實OA能夠有效的抑制TSCC的增殖且具有時間和劑量依賴性;2.OA作用后CyclinD1表達(dá)降低,TSCC周期停滯在G0/G1期;3.細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示:與對照組相比,OA處理后凋亡細(xì)胞增多,Bcl-2的表達(dá)量降低,p53和cleaved-capase-3的表達(dá)升高,表明OA能夠誘導(dǎo)TSCC凋亡;4.自噬結(jié)果顯示:與對照組相比,加入OA后TSCC細(xì)胞中可觀察到自噬溶酶體,p62的表達(dá)量降低,LC3-I/LC3-II比值減小,表明OA可以誘導(dǎo)TSCC發(fā)生自噬;5.與對照組相比,OA降低TSCC中p-Akt,p-mTOR,p-S6K,p-4E-BP1和p-ERK1/2的表達(dá),表明OA抑制TSCC中Akt/mTOR信號通路。結(jié)論:OA抑制TSCC增殖的機制可能是通過抑制Akt/mTOR通路誘導(dǎo)其自噬和凋亡。因此OA可能可以作為一種潛在的抑制舌鱗癌增殖的抗癌藥物。
【圖文】：
第 3 章 實驗結(jié)果第 3 章 實驗結(jié)果3.1 油酸抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖我們通過 CCK8 實驗觀察 OA 對舌鱗癌細(xì)胞（CAL27，UM1）增殖的作用。如圖 3.1 所示：隨著 OA 濃度的增高，OA 對舌鱗癌細(xì)胞抑制率逐漸增高；在同一濃度下，，隨著作用時間的延長，OA 對舌鱗癌細(xì)胞抑制率也逐漸增高，表明OA 在體外可以抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖，并呈時間和劑量依賴性。表 3.1 結(jié)果顯示：OA 作用舌鱗癌細(xì)胞 CAL27 和 UM1 的半抑制濃度（half maximal inhibitoryconcentration，IC50）值分別是 291~228μM 和 159~78μM。表 3.2 結(jié)果顯示：OA作用于舌鱗癌細(xì)胞后，舌鱗癌細(xì)胞的倍增時間延長。CAL27 倍增時間從 69.1h延長到 126.8h，UM1 倍增時間從 67h 延長到 90.7h，細(xì)胞增殖速度減慢。從 CCK8實驗結(jié)果得出 OA 可以抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖且呈時間和劑量依賴性。
16圖 3.2 Edu 實驗驗證油酸抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖（a）：紅色箭頭指示增殖的舌鱗癌細(xì)胞，如圖示紅色熒光逐漸減少表示舌鱗癌細(xì)胞增殖受到抑制。（b）：統(tǒng)計學(xué)分析隨著 OA 濃度的逐漸增高，舌鱗癌細(xì)胞增殖率逐漸下降（*p<0.05,**p<0.01, ***p<0.001 ）。3.2 油酸對舌鱗癌細(xì)胞周期的影響為了進(jìn)一步探討 OA 對舌鱗癌細(xì)胞周期的影響，如圖 3.3 a 所示：隨著 OA濃度的不斷增加，舌鱗癌細(xì)胞增殖被抑制，大部分細(xì)胞停滯在 G0/G1 期。圖 3.3b-c 顯示：CAL27 細(xì)胞 G0/G1 期的占比從 50.28±0.78%增加到 62.21±3.38%，G2/M期占比從17.87±1.57%減少到5.41±0.56%，UM1細(xì)胞的G0/G1期的占比從45.36±1.50%增加到 62.88±0.59%，G2/M 期占比從 9.43±0.95%減少到 2.26±0.30%，兩株細(xì)胞S期的占比均無明顯變化。表明OA可以將舌鱗癌細(xì)胞周期阻滯在G0/G1。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285
本文編號：2631624
【圖文】：
第 3 章 實驗結(jié)果第 3 章 實驗結(jié)果3.1 油酸抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖我們通過 CCK8 實驗觀察 OA 對舌鱗癌細(xì)胞（CAL27，UM1）增殖的作用。如圖 3.1 所示：隨著 OA 濃度的增高，OA 對舌鱗癌細(xì)胞抑制率逐漸增高；在同一濃度下，，隨著作用時間的延長，OA 對舌鱗癌細(xì)胞抑制率也逐漸增高，表明OA 在體外可以抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖，并呈時間和劑量依賴性。表 3.1 結(jié)果顯示：OA 作用舌鱗癌細(xì)胞 CAL27 和 UM1 的半抑制濃度（half maximal inhibitoryconcentration，IC50）值分別是 291~228μM 和 159~78μM。表 3.2 結(jié)果顯示：OA作用于舌鱗癌細(xì)胞后，舌鱗癌細(xì)胞的倍增時間延長。CAL27 倍增時間從 69.1h延長到 126.8h，UM1 倍增時間從 67h 延長到 90.7h，細(xì)胞增殖速度減慢。從 CCK8實驗結(jié)果得出 OA 可以抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖且呈時間和劑量依賴性。
16圖 3.2 Edu 實驗驗證油酸抑制舌鱗癌細(xì)胞的增殖（a）：紅色箭頭指示增殖的舌鱗癌細(xì)胞，如圖示紅色熒光逐漸減少表示舌鱗癌細(xì)胞增殖受到抑制。（b）：統(tǒng)計學(xué)分析隨著 OA 濃度的逐漸增高，舌鱗癌細(xì)胞增殖率逐漸下降（*p<0.05,**p<0.01, ***p<0.001 ）。3.2 油酸對舌鱗癌細(xì)胞周期的影響為了進(jìn)一步探討 OA 對舌鱗癌細(xì)胞周期的影響，如圖 3.3 a 所示：隨著 OA濃度的不斷增加，舌鱗癌細(xì)胞增殖被抑制，大部分細(xì)胞停滯在 G0/G1 期。圖 3.3b-c 顯示：CAL27 細(xì)胞 G0/G1 期的占比從 50.28±0.78%增加到 62.21±3.38%，G2/M期占比從17.87±1.57%減少到5.41±0.56%，UM1細(xì)胞的G0/G1期的占比從45.36±1.50%增加到 62.88±0.59%，G2/M 期占比從 9.43±0.95%減少到 2.26±0.30%，兩株細(xì)胞S期的占比均無明顯變化。表明OA可以將舌鱗癌細(xì)胞周期阻滯在G0/G1。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
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【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285
【參考文獻(xiàn)】
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