【摘要】：1.背景創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(Post-traumatic stress disorder,PTSD)是一種恐懼應(yīng)激引發(fā)的精神障礙疾病。PTSD主要的臨床表現(xiàn)包括焦慮、抑郁、恐懼、逃離現(xiàn)實及失眠。抑郁和焦慮的發(fā)生與患者對創(chuàng)傷記憶的恐懼情緒持續(xù)有很大關(guān)系。因此,加速恐懼記憶消退是改善恐懼情緒、調(diào)整神經(jīng)精神活動重要的策略。報道指出恐懼情緒及抑郁焦慮樣行為的發(fā)生依賴于大腦海馬區(qū)。腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族的成員,與恐懼記憶消退和抑郁的發(fā)生密切相關(guān)。仙茅苷(Curculigoside,CUR)是植物石蒜科仙茅的主要有效成分,具有抗氧化和神經(jīng)保護等藥理學功效。課題組前期研究表明CUR可以改善由電刺激應(yīng)激造成的神經(jīng)精神方面的損害。本研究擬進一步探討CUR對條件恐懼模型恐懼記憶和學習無助(Learned helplessness,LH)抑郁模型小鼠抑郁樣行為的影響及其可能的機制,以期為仙茅苷的抗抑郁作用機制提供參考。2.目的研究仙茅苷對恐懼記憶消退的影響及對學習無助抑郁模型小鼠抑郁樣行為的改善作用及從BDNF角度闡述仙茅苷作用的機制。3.方法健康C57BL/6小鼠,體重20-25 g。實驗分為兩個部分:(1)仙茅苷增加BDNF表達促進恐懼記憶消退和改善抑郁樣行為:建立條件恐懼模型,于模型建立前各組分別給予相應(yīng)高(40 mg/kg)、中(8 mg/kg)、低(1.6 mg/kg)劑量的仙茅苷和生理鹽水(i.p.7天),7,8-DHF(TrkB激動劑)組在再暴露前30 min腹腔注射7,8-DHF(5 mg/kg)。通過檢測小鼠凝滯時間(Freezing time)的變化,探討仙茅苷對恐懼記憶消退的影響。條件恐懼實驗結(jié)束后,進行懸尾和強迫游泳等行為學實驗,觀察仙茅苷對小鼠的抑郁樣行為的影響。行為學實驗結(jié)束24 h后取腦,用于生化檢測。(2)仙茅苷增加BDNF表達改善學習無助模型小鼠抑郁樣行為:小鼠隨機分為正常對照組、LH組、LH+DMSO組、仙茅苷高(40 mg/kg)、中(8 mg/kg)、低劑量組(1.6 mg/kg)和7,8-DHF組。仙茅苷高、中、低劑量組和DMSO組分別腹腔注射相應(yīng)劑量的藥物(i.p.14天),模型組和正常組給予等量生理鹽水。給藥第8天時,建立小鼠LH抑郁模型,7,8-DHF組小鼠每天電擊前30 min腹腔注射7,8-DHF(5 mg/kg)。給藥結(jié)束后進行行為學實驗。機制研究:行為學實驗結(jié)束后,取一部分小鼠的海馬組織用于western blot實驗檢測BDNF、p-mTOR及p-Akt等蛋白的表達變化,剩余小鼠取腦固定,冰凍切片,用于TUNEL檢測;4.結(jié)果(1)仙茅苷增加BDNF表達促進恐懼記憶消退和改善抑郁樣行為再暴露期,各組小鼠凝滯時間沒有顯著性差異(p0.05);在恐懼記憶消退的第4天,CUR組和7,8-DHF組小鼠的凝滯時間較FM組顯著降低(p0.05);CUR組和7,8-DHF組小鼠在強迫游泳和懸尾實驗中的不動時間較FM組均顯著減少(p0.05);與FM組小鼠相比,CUR組和7,8-DHF組小鼠海馬BDNF的表達顯著升高(p0.05);mTOR和Akt磷酸化水平較FM組相比顯著性增加(p0.05);而p-Erk和PSD95的蛋白表達水平各組間無顯著性差異(p0.05)。(2)仙茅苷通過增加BDNF表達改善學習無助模型小鼠抑郁樣行為定位航行實驗中,綜合前四天的尋找平臺潛伏期,各組小鼠間無顯著性差異(p0.05);但是空間探索實驗中,LH組小鼠在平臺象限停留的時間顯著低于正常組(p0.05),CUR組小鼠在平臺象限的游泳時間較LH組顯著增加(p0.05);LH組小鼠在懸尾和強迫游泳中的不動時間較正常組均顯著增加(p0.05),CUR組和7,8-DHF組小鼠不動時間較LH組均顯著減少(p0.05);TUNEL結(jié)果顯示,LH小鼠海馬DG區(qū)細胞凋亡較正常組顯著增加(p0.05);CUR組DG區(qū)細胞凋亡較LH組顯著減少(p0.05);Western blot結(jié)果顯示,LH組小鼠海馬BDNF的蛋白表達量較正常組顯著降低(p0.05);與LH組相比,CUR組和7,8-DHF組小鼠海馬BDNF表達均顯著增加(p0.05);LH小鼠海馬p-Akt和p-mTOR的蛋白表達量與正常組相比顯著降低(p0.05);CUR組和7,8-DHF組海馬p-Akt和p-mTOR的蛋白表達量較LH組顯著升高(p0.05)。4.結(jié)論(1)CUR能增加海馬BDNF的表達,促進恐懼記憶的消退,改善抑郁樣行為;(2)CUR抑制LH小鼠海馬DG區(qū)細胞凋亡,改善學習記憶功能和抑郁樣行為,可能性的機制和CUR激活A(yù)kt-mTOR通路,促進BDNF表達相關(guān)。
【圖文】：

圖 1 CUR 處理加速恐懼記憶的消退。A) CUR 給藥方案；B) CUR 處理后再暴露前 5 min的凝滯時間；C) 恐懼記憶的消退。Fig1 Curculigoside (CUR) facilitates fear memory extinction. A) Experimental design forCUR treatment. B) The freezing time in the first 5 min of re-exposure. C) The extinction of fearmemory. *p<0.05 vs. FM.4.2 CUR 改善條件恐懼模型小鼠抑郁樣行為最后一天消退完成后，小鼠休息 1 h，然后進行強迫游泳和懸尾實驗。數(shù)據(jù)顯示，模型組小鼠較正常組小鼠在 TST（圖 2A）和 FST（圖 2B）中的不動時間均顯著增加（p<0.05），經(jīng)仙茅苷各劑量處理后，不動時間均顯著減少（p<0.05）。說明模型組小鼠出現(xiàn)了抑郁樣行為，而仙茅苷可以改善這種抑郁樣行為。本研究將最后一天消退的凝滯時間與 FST、TST 中不動時間進行了相關(guān)性分析。結(jié)果顯示凝滯時間與 TST 中不動時間呈正相關(guān)(圖 2C，r=0.4321)，與 FST 中不動時間呈顯

圖 2 CUR 處理加速恐懼記憶消退影響小鼠的抑郁樣行為。A) 懸尾實驗中小鼠的不動時間；B) 強迫游泳實驗中小鼠的不動時間；C) 最后一天消退的 Freezing time 與懸尾不動時間的相關(guān)性分析；D) 最后一天消退的 Freezing time 與強迫游泳不動時間的相關(guān)性分析。Fig2 Curculigoside (CUR) prevents depression-like activity in animals receiving fearextinction. A) Immobility time in the tail suspension test. B) Immobility time in the forced swimtest. C) Analysis of the correlation between the immobility time in the tail suspension test and thefreezing time. D) Analysis of the correlation between the immobility time in the forced swim testand the freezing time.#p<0.05 vs. control, *p<0.05 vs. FM.4.3 CUR 增加條件恐懼模型小鼠海馬 BDNF 表達水平BDNF 與恐懼記憶的消退密切相關(guān)[30, 31]。本研究采用 western blot 檢測海馬BDNF 的表達水平，發(fā)現(xiàn) FM 小鼠經(jīng) CUR 各劑量處理后，BDNF 表達水平顯著增
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2625549