【摘要】：目的牙周炎是一種累及牙周支持組織的慢性炎性、破壞性疾病,是發(fā)病率最高的口腔感染性疾病之一。在我國成年人群中牙周炎患病率居于患齲率之上已是不容置疑的事實,最新的流行病學調查數(shù)據(jù)顯示我國80%～96%的成年人有不同程度的牙周問題,而且呈逐年增高趨勢,牙周炎已成為影響成年人口腔健康的首要原因,牙周健康狀況亟待重視。目前越來越多的研究觀點認為在牙周炎發(fā)生發(fā)展過程中,除菌斑微生物及其產物對牙周組織造成的直接破壞外,由細菌激發(fā)的宿主炎癥反應和免疫反應也是造成牙周組織破壞的決定性因素。因此減少菌斑微生物及調節(jié)宿主過度免疫反應是牙周炎治療成功的兩個關鍵。但抗生素的長期使用會造成菌群失調、耐藥菌株產生及其他毒副作用,對機體造成損害,使其在臨床應用中受到一定限制。目前中草藥因其副作用小、標本兼治、價格低廉引起許多學者在中醫(yī)藥治療牙周炎的領域進行了大量的探索。研究證實一些中草藥的提取物具有抑制IL-1 β、TNF-α等多種炎性因子釋放、調控破骨細胞的分化及功能、調節(jié)宿主免疫活性等生物學作用。從中草藥中提取抑炎、抑骨吸收的有效成分,已成為開發(fā)治療牙周炎藥物的新途徑之一。姜黃素是一種具有抗炎、免疫調節(jié)、抗氧化活性的傳統(tǒng)中藥,可通過調節(jié)炎癥因子、免疫分子、具有氧化活性的酶及其相關信號通路的傳導而發(fā)揮效應。目前姜黃素已成為抗炎、抗腫瘤及心血管疾病治療的研究熱點。姜黃素作為一種多效分子,能夠與炎癥相關的眾多分子靶點相互作用。這種生物學特性為其治療多種炎性疾病提供了很大的潛力。牙周炎作為一種炎性破壞性疾病,姜黃素對其抗炎作用的相關機制及宿主體內保護作用如何還缺乏系統(tǒng)的研究。本實驗以體外培養(yǎng)大鼠牙齦成纖維細胞為實驗模型,觀察姜黃素對脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)誘導的大鼠牙齦成纖維細胞中炎性因子表達及炎癥信號通路激活的影響,探討姜黃素在牙周抗炎作用中的可能機制;同時建立大鼠實驗性牙周炎模型,評價姜黃素在牙周支持組織破壞中的保護作用,為其在臨床進一步的應用提供理論依據(jù)。方法1.體外實驗:培養(yǎng)大鼠牙齦成纖維細胞,MTT法檢測姜黃素對細胞生長活性的影響;按加入藥物及濃度的不同將細胞分為四組::脂多糖組(LPS);脂多糖+低濃度姜黃素組(LPS+Curcumin 10 μM/L);脂多糖+高濃度姜黃素組(LPS+Curcumin 20 μμM/L);正常牙齦成纖維細胞為對照組(Control)。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定牙齦成纖維細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-1β、OPG和sRANKL表達,計算OPG/sRANKL L比值;提取上述不同分組中牙拃成纖維細胞的核蛋白,Western bloting檢測NF-κB p65和IκBα磷酸化水平。2.體內實驗:成年雄性Wister大鼠隨機分為3組:單純結扎組(L);結扎+低劑量姜黃素組(L+C30,姜黃素按30 mg/kg體重}f予);結扎+高劑量姜黃素組(L+C100,姜黃素按100 mg/kg體重}f予);通過正畸結扎絲被繞縫合絲線纏繞于大鼠下頜第一磨牙牙頸部,誘導大鼠實驗性牙周炎,并于結扎前一天給藥組大鼠按上述劑量每天一次、連續(xù)30天經胃給予姜黃素。術后1月取材,分離下頜骨,部分標本剝離新鮮牙齦組織液氮保存,放射免疫法檢測牙齦組織中TNF-αα及IL-1β表達;部分保留牙齦組織的標本經EDTA脫鈣后制備石蠟切片,分別行HE染色及天狼星紅染色,觀察牙齦形態(tài)及膠原纖維的變化情況;Micro-CT分析下頜第一磨牙六個位點牙槽嵴頂至釉牙骨質界距離變化及下頷第一第二磨牙牙槽間隔骨吸收量;通過對骨小梁厚度(trabecular thickness)、骨礦化密度(bone mineral density)、骨小梁分離度(trabecular separation)、骨小梁數(shù)量(trabecular number)等骨生物學參數(shù)定量分析牙槽骨吸收情況。結果1.體外實驗:姜黃素(用藥濃度分別是10 μM/L 20 μM/L)無論是單純用藥還是LPS刺激下用藥,對牙齦成纖維細胞的生長均無明顯不良影響,各組間細胞存活率無顯著差異;姜黃素可降低細胞上清液中TNF-α、IL-1β及sRANKL的表達,使OPG/sRANKL比值升高;;不同濃度的姜黃素間有統(tǒng)計學差異;姜黃素可抑制LPS誘導的p-p65和p-I κ B α的高表達,減輕NF-κB p65和IκBα磷酸化水平,高濃度姜黃素抑制作用更明顯。2.體內實驗:將改良縫合絲線嚴密纏繞正畸結扎絲,從下頜第一二磨牙鄰間隙內穿過并結扎于下頌第一磨牙牙頸部,在實驗周期內可誘發(fā)牙齦組織的炎癥和牙槽骨的吸收,牙周炎模型成功建立。絲線加鋼絲結扎+姜黃素組可觀察到齦乳頭退縮明顯減少,牙齦乳頭形態(tài)可見;膠原纖維破壞減少,走向規(guī)則有序;牙齦組織中TNF-α和IL-1β的表達明顯下降。Micro-CT骨生物學參數(shù)分析顯示:高劑量姜黃素組病損區(qū)骨組織面積百分比、骨小梁厚度、骨礦化密度等,均較單純結扎組及低劑量姜黃素組顯著增加;低劑量姜黃素組與對照組之間無明顯統(tǒng)計學意義。結論姜黃素可減少炎性因子TNF-α和IL-1β的表達,抑制NF-kB信號通路的激活,改善OPG/RANKAL比值,進而減輕牙齦炎癥,減少牙槽骨的吸失,在牙周組織破壞中發(fā)揮保護作用。
【圖文】：

姜黃素（用藥濃度分別是ｌ0ＨＭ／Ｌ，２0ｎＭ／Ｌ）無論是單純用藥還是在ＬＰＳ刺逡逑激下對大鼠牙齦成纖維細胞的生長均無明顯不良影響，，不同藥物及相同藥物不同濃逡逑度下細胞存活率無顯著差異（Ｐ＞0．0５）（圖１－２）。逡逑Ａ邐Ｂ邐—逡逑ｆ邐—邋Ｄ邐—逡逑Ｅ邐＿邋Ｆ逡逑Ｉ－邐ＴＣ？聲逡逑圖１－１？不同藥物組大鼠牙齦成纖維細胞形態(tài)觀察ｘｌ0邋（圖中Ｂａｒ＝２０（Ｈｉｍ）逡逑１６逡逑

姜黃素（用藥濃度分別是ｌ0ＨＭ／Ｌ，２0ｎＭ／Ｌ）無論是單純用藥還是在ＬＰＳ刺逡逑激下對大鼠牙齦成纖維細胞的生長均無明顯不良影響，不同藥物及相同藥物不同濃逡逑度下細胞存活率無顯著差異（Ｐ＞0．0５）（圖１－２）。逡逑Ａ邐Ｂ邐—逡逑ｆ邐—邋Ｄ邐—逡逑Ｅ邐＿邋Ｆ逡逑Ｉ－邐ＴＣ？聲逡逑圖１－１？不同藥物組大鼠牙齦成纖維細胞形態(tài)觀察ｘｌ0邋（圖中Ｂａｒ＝２０（Ｈｉｍ）逡逑１６逡逑
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

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本文編號：2622730