【摘要】：研究目的膽汁淤積,指的是肝細(xì)胞或者膽管內(nèi)的膽汁的生成和外排受阻,導(dǎo)致肝臟和體循環(huán)中的膽汁酸,膽固醇和膽紅素等膽汁成分過度積累,從而損傷肝細(xì)胞。臨床上大多數(shù)藥物具有肝損傷的藥物副作用,藥物性肝損傷又分為細(xì)胞性肝損傷,膽汁淤積性肝損傷和混合型肝損傷,其中膽汁淤積性肝損傷是現(xiàn)代臨床上較為常見的病種,其發(fā)病機制較為復(fù)雜,而目前臨床上治療膽汁淤積性肝損傷的藥物十分有限。根據(jù)臨床報道和前期工作,我們推測五酯膠囊和五味子甲素可拮抗利福平誘導(dǎo)的膽汁淤積性肝損傷。因此,本課題采用利福平構(gòu)建膽汁淤積性肝損傷的模型,在體內(nèi)和體外對五酯膠囊及其質(zhì)控成分五味子甲素的保肝作用機制進行研究,為臨床上開發(fā)治療膽汁淤積性肝損傷的藥物提供理論和實驗依據(jù)。研究方法1.動物水平研究五酯膠囊和五味子甲素抗膽汁淤積性肝損傷的作用及其機制建立利福平致大鼠膽汁淤積性肝損傷模型,并從四個方面進行評價:①血清ALT、AST、ALP、TB、DB和TBA等膽汁淤積性肝損傷相關(guān)生化指標(biāo);②肝組織病理檢查,對大鼠肝臟病理切片進行評估;③提取蛋白,Western blotting法測定MRP2、BSEP和PXR的蛋白表達(dá);④提取RNA,實時熒光定量PCR測定MRP2、BSEP和PXR的mRNA水平。通過灌胃給與五酯膠囊和五味子甲素高、中、低三個劑量,并設(shè)置陽性對照組(熊去氧膽酸給藥),從血清生化指標(biāo)、病理切片、蛋白表達(dá)和mRNA水平四個方面評價五酯膠囊和五味子甲素對利福平致大鼠膽汁淤積性肝損傷的對抗作用。2.細(xì)胞水平研究五酯膠囊及其質(zhì)控成分五味子甲素抗膽汁淤積性肝損傷的作用及其機制以HepG2細(xì)胞為研究對象,體外給予系列濃度利福平,通過細(xì)胞上清ALT、AST、TB、DB等膽汁淤積性肝損傷相關(guān)指標(biāo)的變化,構(gòu)建膽汁淤積性肝損傷的細(xì)胞模型。在膽汁淤積性肝損傷細(xì)胞模型中,從相關(guān)肝損傷生化指標(biāo)、相關(guān)蛋白(MRP2、BSEP和PXR)表達(dá)和mRNA水平三個方面評價五酯膠囊和五味子甲素對利福平致膽汁淤積性肝損傷的作用及其機制。采用本課題組前期慢病毒干擾RNA技術(shù)沉默細(xì)胞PXR基因的沉默細(xì)胞株,與HepG2正常細(xì)胞組對比,從相關(guān)肝功能生化指標(biāo)、相關(guān)蛋白的表達(dá)和mRNA水平三個方面探討PXR通路在五酯膠囊和五味子甲素對抗利福平致膽汁淤積性肝損傷中的所起的作用。結(jié)果1.每日灌胃一次劑量100mg/kg的利福平,在給藥一周后有明顯的致膽汁淤積的效果,與空白對照組相比,模型組大鼠血清的AST、TB、DB、TBA等肝功能指標(biāo)明顯上升(尸0.01),血清中的ALT和ALP無明顯改變(P0.05)。肝臟病理切片HE染色顯示,模型組的大鼠肝組織有明顯的炎癥細(xì)胞浸潤,并伴有膽汁橫流和膽管受損。與利福平誘導(dǎo)的模型組相比,高劑量的五酯膠囊和五味子甲素給藥組顯著降低了大鼠血清中的AST、TB、DB、TBA等肝損傷指標(biāo)含量(P0.001),肝臟病理分析也相對模型組有所改善。模型組大鼠的MRP2、BSEP和PXR蛋白和mRNA水平顯著下降,各治療組大鼠的相關(guān)蛋白和mRNA水平顯著升高,并且呈劑量依耐性。2.細(xì)胞實驗結(jié)果顯示:利福平在正常HepG2細(xì)胞和沉默細(xì)胞中,均能導(dǎo)致明顯的肝損傷,且DB、TB上升明顯(P0.01),AST、ALT無顯著性差異,提示利福平所致肝損傷為膽汁淤積性肝損傷。給與五酯膠囊后的肝損傷細(xì)胞,經(jīng)檢測蛋白表達(dá),發(fā)現(xiàn)PXR及相關(guān)調(diào)控蛋白下調(diào),mRNA的水平也有所下降。并且經(jīng)過五酯膠囊處理的細(xì)胞明顯降低了細(xì)胞的肝功能生化指標(biāo),相應(yīng)的蛋白也有所上調(diào),但是,五味子甲素的給藥在細(xì)胞水平并無明顯差異。結(jié)論五酯膠囊及其質(zhì)控成分五味子甲素對利福平誘導(dǎo)的膽汁淤積肝損傷具有保護作用,結(jié)合體內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn),五酯膠囊的保肝機制可能是通過核受體PXR調(diào)節(jié)膽汁酸轉(zhuǎn)運體MRP2和BSEP功能改變從而調(diào)節(jié)膽汁轉(zhuǎn)運體功能實現(xiàn)的,并且其作用可能還與其他核受體有關(guān)。
【圖文】：

通過檢測各組大鼠的血清肝功能生化指標(biāo)可以發(fā)現(xiàn)利福平能夠引起明顯的逡逑肝損傷，模型組大鼠與對照組相比，谷草轉(zhuǎn)氨酶（ＡＳＴ）、直接膽紅素（ＤＢ）、逡逑總膽紅素（ＴＢ）和總膽汁酸（ＴＢＡ）的水平顯著升高（如圖１－１邋Ａ，邋Ｃ，邋Ｄ，，Ｆ）。逡逑然而，谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ＡＬＴ）和堿性磷酸酶（ＡＬＰ）的水平?jīng)]有顯著差異（圖１－１邋Ｂ，逡逑Ｅ），提示利福平給藥可誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生肝損傷，并且所引起的肝損傷是膽汁淤積逡逑性肝損傷而非細(xì)胞性肝損傷。如圖２－１所示，灌胃不同劑量的五酯膠囊和五味子逡逑甲素可顯著抑制ＡＳＴ，ＤＢ，邋ＴＢ和ＴＢＡ的水平，且五酯膠囊的作用與劑量呈正逡逑相關(guān)。與模型組進行比較，五酯膠囊高劑量組（３２０ｍｇ／ｋｇ）和五味子甲素各劑逡逑量組處理的大鼠ＴＢＩＬ

１．邋５．邋５五酯膠囊及五味子甲素對５５職和Ｐ”？邋ｍＲＮＡ表達(dá)水平的影響逡逑用每組的大鼠的肝臟樣品中提取的總ＲＮＡ作為ＰＣＲ擴增的模板，用于逡逑ＱＲＴ－ＰＣＲ。結(jié)果如圖１－５所示，模型組大鼠的尸規(guī)召見戶和Ｍ兄Ｐ２的ｍＲＮＡ逡逑水平顯著低于對照組（Ｐ０．００１），與模型組相比，中劑量（２４０ｍｇ／ｋｇ）和高劑逡逑量（３２０ｍｇ／ｋｇ）的五酯膠囊給藥使大鼠的相關(guān)基因５Ｓ五Ｐ和Ｍ／？Ｐ２ｍＲＮＡ逡逑水平顯著升高（Ｐ＜０．０１）。五味子甲素給藥組和五酯膠囊組對利福平致大鼠的膽逡逑汁淤積性肝損傷治療具有相似的作用，且基本呈劑量相關(guān)性。逡逑２０逡逑
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R284;R285.5

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4 陳剛;朱蘭;張紅;黃偉;汪芯;李娟;林正斌;;五酯膠囊在臨床腎移植受者的實際應(yīng)用中對他克莫司藥代動力學(xué)的影響及與CYP3A5基因型的相關(guān)性分析[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

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6 位華;繆海均;陳萬生;;保肝中藥五酯膠囊對健康志愿者體內(nèi)他克莫司量效特征影響的研究[A];第四屆全國治療藥物監(jiān)測學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2014年

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2 寇凱;五酯膠囊對不同CYP3A5基因型肝移植患者術(shù)后他克莫司血藥濃度的影響[D];吉林大學(xué);2018年

3 許云鵬;五酯膠囊對難治性腎病綜合征患兒他克莫司血藥濃度影響[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2015年

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8 劉順芳;他克莫司單用和聯(lián)合五酯膠囊治療免疫性腎小球疾病的單中心回顧性研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號：2614181