發(fā)布時間：2020-04-04 23:06

【摘要】：研究目的膽汁淤積,指的是肝細胞或者膽管內的膽汁的生成和外排受阻,導致肝臟和體循環(huán)中的膽汁酸,膽固醇和膽紅素等膽汁成分過度積累,從而損傷肝細胞。臨床上大多數(shù)藥物具有肝損傷的藥物副作用,藥物性肝損傷又分為細胞性肝損傷,膽汁淤積性肝損傷和混合型肝損傷,其中膽汁淤積性肝損傷是現(xiàn)代臨床上較為常見的病種,其發(fā)病機制較為復雜,而目前臨床上治療膽汁淤積性肝損傷的藥物十分有限。根據(jù)臨床報道和前期工作,我們推測五酯膠囊和五味子甲素可拮抗利福平誘導的膽汁淤積性肝損傷。因此,本課題采用利福平構建膽汁淤積性肝損傷的模型,在體內和體外對五酯膠囊及其質控成分五味子甲素的保肝作用機制進行研究,為臨床上開發(fā)治療膽汁淤積性肝損傷的藥物提供理論和實驗依據(jù)。研究方法1.動物水平研究五酯膠囊和五味子甲素抗膽汁淤積性肝損傷的作用及其機制建立利福平致大鼠膽汁淤積性肝損傷模型,并從四個方面進行評價:①血清ALT、AST、ALP、TB、DB和TBA等膽汁淤積性肝損傷相關生化指標;②肝組織病理檢查,對大鼠肝臟病理切片進行評估;③提取蛋白,Western blotting法測定MRP2、BSEP和PXR的蛋白表達;④提取RNA,實時熒光定量PCR測定MRP2、BSEP和PXR的mRNA水平。通過灌胃給與五酯膠囊和五味子甲素高、中、低三個劑量,并設置陽性對照組(熊去氧膽酸給藥),從血清生化指標、病理切片、蛋白表達和mRNA水平四個方面評價五酯膠囊和五味子甲素對利福平致大鼠膽汁淤積性肝損傷的對抗作用。2.細胞水平研究五酯膠囊及其質控成分五味子甲素抗膽汁淤積性肝損傷的作用及其機制以HepG2細胞為研究對象,體外給予系列濃度利福平,通過細胞上清ALT、AST、TB、DB等膽汁淤積性肝損傷相關指標的變化,構建膽汁淤積性肝損傷的細胞模型。在膽汁淤積性肝損傷細胞模型中,從相關肝損傷生化指標、相關蛋白(MRP2、BSEP和PXR)表達和mRNA水平三個方面評價五酯膠囊和五味子甲素對利福平致膽汁淤積性肝損傷的作用及其機制。采用本課題組前期慢病毒干擾RNA技術沉默細胞PXR基因的沉默細胞株,與HepG2正常細胞組對比,從相關肝功能生化指標、相關蛋白的表達和mRNA水平三個方面探討PXR通路在五酯膠囊和五味子甲素對抗利福平致膽汁淤積性肝損傷中的所起的作用。結果1.每日灌胃一次劑量100mg/kg的利福平,在給藥一周后有明顯的致膽汁淤積的效果,與空白對照組相比,模型組大鼠血清的AST、TB、DB、TBA等肝功能指標明顯上升(尸0.01),血清中的ALT和ALP無明顯改變(P0.05)。肝臟病理切片HE染色顯示,模型組的大鼠肝組織有明顯的炎癥細胞浸潤,并伴有膽汁橫流和膽管受損。與利福平誘導的模型組相比,高劑量的五酯膠囊和五味子甲素給藥組顯著降低了大鼠血清中的AST、TB、DB、TBA等肝損傷指標含量(P0.001),肝臟病理分析也相對模型組有所改善。模型組大鼠的MRP2、BSEP和PXR蛋白和mRNA水平顯著下降,各治療組大鼠的相關蛋白和mRNA水平顯著升高,并且呈劑量依耐性。2.細胞實驗結果顯示:利福平在正常HepG2細胞和沉默細胞中,均能導致明顯的肝損傷,且DB、TB上升明顯(P0.01),AST、ALT無顯著性差異,提示利福平所致肝損傷為膽汁淤積性肝損傷。給與五酯膠囊后的肝損傷細胞,經檢測蛋白表達,發(fā)現(xiàn)PXR及相關調控蛋白下調,mRNA的水平也有所下降。并且經過五酯膠囊處理的細胞明顯降低了細胞的肝功能生化指標,相應的蛋白也有所上調,但是,五味子甲素的給藥在細胞水平并無明顯差異。結論五酯膠囊及其質控成分五味子甲素對利福平誘導的膽汁淤積肝損傷具有保護作用,結合體內外的研究發(fā)現(xiàn),五酯膠囊的保肝機制可能是通過核受體PXR調節(jié)膽汁酸轉運體MRP2和BSEP功能改變從而調節(jié)膽汁轉運體功能實現(xiàn)的,并且其作用可能還與其他核受體有關。
【圖文】：

通過檢測各組大鼠的血清肝功能生化指標可以發(fā)現(xiàn)利福平能夠引起明顯的逡逑肝損傷，模型組大鼠與對照組相比，谷草轉氨酶（ＡＳＴ）、直接膽紅素（ＤＢ）、逡逑總膽紅素（ＴＢ）和總膽汁酸（ＴＢＡ）的水平顯著升高（如圖１－１邋Ａ，邋Ｃ，邋Ｄ，，Ｆ）。逡逑然而，谷丙轉氨酶（ＡＬＴ）和堿性磷酸酶（ＡＬＰ）的水平沒有顯著差異（圖１－１邋Ｂ，逡逑Ｅ），提示利福平給藥可誘導大鼠產生肝損傷，并且所引起的肝損傷是膽汁淤積逡逑性肝損傷而非細胞性肝損傷。如圖２－１所示，灌胃不同劑量的五酯膠囊和五味子逡逑甲素可顯著抑制ＡＳＴ，ＤＢ，邋ＴＢ和ＴＢＡ的水平，且五酯膠囊的作用與劑量呈正逡逑相關。與模型組進行比較，五酯膠囊高劑量組（３２０ｍｇ／ｋｇ）和五味子甲素各劑逡逑量組處理的大鼠ＴＢＩＬ

１．邋５．邋５五酯膠囊及五味子甲素對５５職和Ｐ”？邋ｍＲＮＡ表達水平的影響逡逑用每組的大鼠的肝臟樣品中提取的總ＲＮＡ作為ＰＣＲ擴增的模板，用于逡逑ＱＲＴ－ＰＣＲ。結果如圖１－５所示，模型組大鼠的尸規(guī)召見戶和Ｍ兄Ｐ２的ｍＲＮＡ逡逑水平顯著低于對照組（Ｐ０．００１），與模型組相比，中劑量（２４０ｍｇ／ｋｇ）和高劑逡逑量（３２０ｍｇ／ｋｇ）的五酯膠囊給藥使大鼠的相關基因５Ｓ五Ｐ和Ｍ／？Ｐ２ｍＲＮＡ逡逑水平顯著升高（Ｐ＜０．０１）。五味子甲素給藥組和五酯膠囊組對利福平致大鼠的膽逡逑汁淤積性肝損傷治療具有相似的作用，且基本呈劑量相關性。逡逑２０逡逑
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R284;R285.5

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 高素華;鄭海文;鮑賢富;唐潔;胡鈴;;五酯膠囊對慢性乙型肝炎抗肝纖維化的實驗研究[J];臨床薈萃;2011年19期

2 王彤光;五酯膠囊治療谷丙轉氨酶持續(xù)反復升高32例療效分析[J];中國中醫(yī)藥信息雜志;1999年05期

3 張忠銀;王欣怡;;五酯膠囊對萬古霉素所致腎損傷大鼠的影響及其機制研究[J];中國藥師;2017年11期

4 張山水;五酯膠囊治療病毒性肝炎的療效觀察[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2001年08期

5 練祥,章麗影;五酯膠囊治療慢性乙型肝炎32例療效觀察[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志;2000年20期

6 方桂女;五酯膠囊聯(lián)合中藥治療慢性乙型肝炎72例[J];浙江中西醫(yī)結合雜志;2000年06期

7 張瑞梅;五酯膠囊佐治慢性乙型肝炎93例[J];實用中醫(yī)藥雜志;2000年09期

8 楊福泰,李向東,黃巧云;五酯膠囊治療各種病因所致血清轉氨酶升高120例[J];現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志;2004年08期

9 田榮茂;;五酯膠囊聯(lián)合復方甘草酸苷治療非酒精性脂肪肝效果觀察[J];海峽預防醫(yī)學雜志;2018年05期

10 楊婧;楊輝;劉麗宏;;腎移植術后他克莫司聯(lián)合五酯膠囊致1例高鉀血癥[J];藥學與臨床研究;2018年02期

相關會議論文 前8條

1 楊福泰;李向東;黃巧云;;五酯膠囊治療各種病因所致血清轉氨酶升高120例[A];中國中西醫(yī)結合學會第十五次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2003年

2 劉華夏;;關于五酯膠囊與他克莫司相互作用的研究[A];中國中西醫(yī)結合學會腎臟疾病專業(yè)委員會2018年學術年會論文摘要匯編[C];2018年

3 吳笑春;辛華雯;李罄;余愛榮;朱敏;沈楊;蘇丹;熊磊;;五酯膠囊對健康受試者他克莫司藥動學的影響[A];湖北省藥學會第十一屆會員代表大會暨2007年學術年會論文匯編[C];2007年

4 陳剛;朱蘭;張紅;黃偉;汪芯;李娟;林正斌;;五酯膠囊在臨床腎移植受者的實際應用中對他克莫司藥代動力學的影響及與CYP3A5基因型的相關性分析[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

5 劉婷婷;李寧;郭文萍;王明君;董塬;趙艷霞;武小桐;;五酯膠囊聯(lián)合鹽酸地爾硫卓片提高他克莫司血藥濃度的臨床觀察[A];2012中國器官移植大會論文匯編[C];2012年

6 位華;繆海均;陳萬生;;保肝中藥五酯膠囊對健康志愿者體內他克莫司量效特征影響的研究[A];第四屆全國治療藥物監(jiān)測學術年會資料匯編[C];2014年

7 黃立峰;;1例肝移植術后應用五酯膠囊提高環(huán)孢霉素血藥濃度的病例分享[A];第四屆全國治療藥物監(jiān)測學術年會資料匯編[C];2014年

8 范曉萍;孫海英;王曉彬;寧鵬;沈丹;溫子榮;;恩替卡韋聯(lián)合五酯膠囊治療慢性乙型肝炎肝纖維化療效觀察[A];第七次全國中西醫(yī)結合傳染病學術會議論文匯編[C];2016年

相關重要報紙文章 前1條

1 深圳市懷新企業(yè)投資顧問有限公司;重組明晰主業(yè) 二元支撐發(fā)展[N];證券時報;2005年

相關博士學位論文 前1條

1 位華;五酯膠囊的藥代動力學及與他克莫司相互作用研究[D];第二軍醫(yī)大學;2010年

相關碩士學位論文 前9條

1 艾陽文;五酯膠囊及其質控成分五味子甲素抗膽汁淤積性肝損傷的作用研究[D];南方醫(yī)科大學;2019年

2 寇凱;五酯膠囊對不同CYP3A5基因型肝移植患者術后他克莫司血藥濃度的影響[D];吉林大學;2018年

3 許云鵬;五酯膠囊對難治性腎病綜合征患兒他克莫司血藥濃度影響[D];新疆醫(yī)科大學;2015年

4 郭曉偉;五酯膠囊對腎移植受者他克莫司血藥濃度的影響[D];華中科技大學;2011年

5 黃琪;五酯膠囊/甘利欣膠囊對拉米夫定片藥物動力學影響的研究[D];中南大學;2007年

6 石慶玲;五酯膠囊對阿托伐他汀藥動學的影響[D];復旦大學;2014年

7 楊敏;CYP3A5基因多態(tài)性、五酯膠囊對特發(fā)性膜性腎病患者他克莫司藥代動力學指標的影響研究[D];濱州醫(yī)學院;2016年

8 劉順芳;他克莫司單用和聯(lián)合五酯膠囊治療免疫性腎小球疾病的單中心回顧性研究[D];大連醫(yī)科大學;2016年

9 李冰;五味子制劑對他克莫司血藥濃度的影響及對肝損傷防護作用的研究[D];福建醫(yī)科大學;2013年

本文編號：2614181