發(fā)布時(shí)間：2020-04-02 02:51

【摘要】：目的本課題通過(guò)對(duì)梔子提取物單次、多次給藥對(duì)大鼠量-時(shí)-毒關(guān)系的研究,明確梔子提取物產(chǎn)生肝腎毒性的量-毒曲線,對(duì)比梔子在正常和黃疸模型動(dòng)物出現(xiàn)毒性的劑量差異。梔子苷及其代謝產(chǎn)物的毒代動(dòng)力學(xué)-毒效動(dòng)力學(xué)(簡(jiǎn)稱TK-TD)結(jié)合模型研究闡明濃度-效應(yīng)-時(shí)間關(guān)系,明確中藥梔子致肝毒性的物質(zhì)基礎(chǔ)。方法1.采用不同劑量的梔子提取物對(duì)正常SD大鼠和黃疸模型SD大鼠進(jìn)行量-毒關(guān)系研究,梔子提取物劑量為0.48、0.76、1.16、1.8、2.76、4.26 g·kg~(-1),單次給藥24 h后取血進(jìn)行肝腎功能檢測(cè):總膽紅素(TBIL)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)和病理解剖,明確梔子提取物產(chǎn)生肝腎毒性的量-毒關(guān)系。2.梔子提取物3個(gè)劑量(0.14,0.28,0.56 g·kg~(-1))連續(xù)對(duì)SD大鼠灌胃給藥4周,并分別在第2周、4周檢測(cè)大鼠的肝腎功能并處死部分動(dòng)物進(jìn)行肝臟腎臟病理檢查,并預(yù)留部分動(dòng)物用于停藥后觀察毒性反應(yīng)是否可逆(觀察期2周)。3.在正常動(dòng)物和黃疸動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行TK研究,給藥后取血分離血漿,繪制血藥濃度-時(shí)間曲線,計(jì)算相關(guān)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。采用DAS 3.2.8藥動(dòng)學(xué)軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù),以梔子苷、京尼平血藥濃度為TK指標(biāo),以ALT、AST、TBIL活性為TD指標(biāo),采用DAS 3.2.8軟件進(jìn)行TK-TD結(jié)合模型的擬合。并對(duì)血漿中梔子苷代謝物進(jìn)行分析。結(jié)果1.與空白組相比,正常大鼠1.16、1.8、2.76、4.26 g·kg~(-1)劑量組給藥后ALT、AST、TBIL均顯著升高并與劑量呈正相關(guān)(P0.05);黃疸模型給藥組與黃疸模型組相比,0.76、1.16、1.8、2.76、4.26 g·kg~(-1)劑量組出現(xiàn)不同程度的ALT、AST、ALP、TBIL明顯升高(P0.05)。與空白組比較,正常大鼠0.48、0.76、1.16、1.8、2.76、4.26 g·kg~(-1)劑量組給藥后大鼠的BUN、CREA均不同程度升高(P0.05,P0.01);黃疸模型0.76、1.16、1.8、2.76、4.26 g·kg~(-1)劑量組給藥后BUN、CREA均有不同程度的升高(P0.05,P0.01),且在一定范圍內(nèi)隨劑量呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)。2.給藥14 d,與模型對(duì)照組相比,模型0.28、0.56 g·kg~(-1)劑量給藥組大鼠ALP、AST、TBIL均明顯升高(P0.05,P0.01)。給藥28 d,與空白組相比,正常0.56 g·kg~(-1)劑量給藥組大鼠TBIL明顯升高(P0.05)。與模型對(duì)照組相比,模型0.14 g·kg~(-1)劑量給藥組大鼠ALP、AST顯著升高(P0.05,P0.01),模型0.28 g·kg~(-1)劑量給藥組大鼠ALT、TBIL顯著升高(P0.05),停藥觀察2周之后,各組大鼠ALP、ALT、AST、TBIL指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3.梔子苷1.2 g·kg~(-1)灌胃給藥,梔子苷和京尼平在72.25-14450 ng·mL~(-1)和45.6-9120 ng·mL~(-1)線性關(guān)系良好,血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾成分測(cè)定,方法符合測(cè)定要求。梔子苷平均血藥濃度-時(shí)間曲線出現(xiàn)雙峰現(xiàn)象,采用非房室模型計(jì)算得到毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù),模型組藥時(shí)曲線下面積AUC(0-t)以及達(dá)峰濃度(C_(max))和平均滯留時(shí)間(MRT)均顯著高于正常組,半衰期延長(zhǎng)。模型組京尼平血藥濃度高于正常組。毒理效應(yīng)-濃度曲線中可看到明顯的逆時(shí)針滯后環(huán)。TK-TD模型符合Sigmoid-E_(max)模型。血漿中指認(rèn)16種代謝物,2組差異代謝物為G2,6,11。結(jié)論1.梔子提取物劑量超過(guò)1.16 g·kg~(-1)對(duì)正常大鼠具有明顯急性肝毒性,且存在劑量依賴性。梔子提取物劑量超過(guò)0.76g·kg~(-1)對(duì)黃疸模型大鼠可以造成急性肝損傷,且梔子提取物劑量0.76-4.26 g·kg~(-1)相同劑量下對(duì)黃疸模型造成更為嚴(yán)重的肝損傷,對(duì)黃疸模型大鼠產(chǎn)生毒性的劑量低于正常大鼠。梔子提取物0.76-4.26 g·kg~(-1)劑量對(duì)正常大鼠和黃疸模型大鼠都造成明顯腎損傷,且呈劑量依賴性,在1.16-4.26 g·kg~(-1)劑量對(duì)黃疸模型大鼠造成更為嚴(yán)重的腎損傷。2.梔子提取物劑量大于0.28 g·kg~(-1)連續(xù)給藥14 d可對(duì)黃疸模型大鼠造成一定肝損傷。大劑量梔子提取物0.56 g·kg~(-1)連續(xù)給藥28 d對(duì)正常大鼠造成一定肝損傷。梔子提取物劑量小于0.28 g·kg~(-1)連續(xù)給藥28 d對(duì)正常大鼠沒(méi)有造成明顯肝損傷,隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng),劑量大于0.14 g·kg~(-1)連續(xù)給藥28 d對(duì)黃疸模型大鼠造成明顯肝損傷。停藥觀察2周之后,各組大鼠各肝腎指標(biāo)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,說(shuō)明梔子提取物劑量在0.14~0.56 g·kg~(-1)對(duì)正常和黃疸模型大鼠造成的肝腎損傷是可逆的。3.梔子苷灌胃給藥后,黃疸模型大鼠相對(duì)于正常大鼠達(dá)峰濃度更高,消除緩慢,滯留時(shí)間較長(zhǎng),說(shuō)明梔子苷、京尼平在黃疸模型大鼠體內(nèi)蓄積嚴(yán)重,持續(xù)時(shí)間長(zhǎng),毒理效應(yīng)滯后于血藥濃度,且可能存在肝腸循環(huán)。結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)推測(cè)梔子苷是梔子產(chǎn)生毒性的物質(zhì)基礎(chǔ),而直接毒性物質(zhì)基礎(chǔ)是梔子苷的體內(nèi)代謝產(chǎn)物京尼平。
【圖文】：

梔子提取物多次給藥對(duì)大鼠肝臟指標(biāo)的影響

梔子提取物多次給藥對(duì)大鼠BUN、CREA的影響
【學(xué)位授予單位】：山西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2611342