發(fā)布時(shí)間：2020-03-28 17:28

【摘要】：目的:復(fù)制國際公認(rèn)苯并(a)芘(Ba P)致大鼠精子DNA損傷的模型,并以益腎通絡(luò)方煎劑干預(yù),觀察益腎通絡(luò)方對大鼠性激素、睪丸病理、精子DNA完整性及修復(fù)蛋白表達(dá)水平的影響,探討益腎通絡(luò)方保護(hù)男性精子中遺傳物質(zhì)的療效機(jī)制。方法:80只雄性大鼠隨機(jī)分為5組,溶劑對照組、Ba P染毒組及中藥中劑量組每組20只,中藥高劑量組及中藥低劑量組每組10只。溶劑對照組按1ml/kg腹腔注射0.5%的二甲基亞砜,其余各組隔日均按1 ml/kg經(jīng)腹腔注射工作液染毒,染毒濃度為100μg/(Kg·d),共染毒60 d。中藥組均自Ba P染毒第31天開始灌胃,時(shí)間為30d。給藥期間共有10只大鼠死亡。5天稱量一次,觀察一般情況,大鼠末次給藥后溶劑對照組、Ba P染毒組及中藥中劑量組每組隨機(jī)取出5只與性成熟的雌鼠合籠為下一步實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備,其余大鼠水合氯醛(8ml/kg)腹腔注射麻醉,分別收集血清、睪丸、精子懸液,檢測血清卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)、睪酮(T)水平、睪丸組織的病理改變、精子DNA完整性、修復(fù)蛋白X線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白1(XRCC1)及8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)蛋白。結(jié)果:1.與溶劑對照組比較,Ba P染毒組大鼠血清FSH、LH水平均有升高(P0.01),益腎通絡(luò)方煎劑各劑量組大鼠血清FSH、LH水平均低于Ba P染毒組(P0.05),其中中藥高劑量顯著降低(P0.01),各組之間的大鼠血清T水平比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.溶劑對照組睪丸切片示(圖1-2):大鼠生精小管完整,排列整齊密集。生精上皮數(shù)量適中,層次分明,各級生精細(xì)胞形態(tài)正常,管腔內(nèi)能夠見到成熟精子,間質(zhì)細(xì)胞形態(tài)無異常。Ba P染毒組睪丸切片示(圖3-4):大鼠生精小管直徑縮小,生精上皮層數(shù)減少,生精細(xì)胞排列疏松、紊亂,管腔內(nèi)生殖細(xì)胞減少。益腎通絡(luò)方煎劑各劑量組大鼠睪丸形態(tài)結(jié)構(gòu)可見(圖5-10):隨中藥量的增加,損傷程度減輕,生精小管邊界變清晰,同時(shí)生精上皮厚度明顯恢復(fù),生精細(xì)胞數(shù)量增多,部分管腔內(nèi)能夠見到成熟精子,間質(zhì)細(xì)胞沒有變性。中藥高劑量組損傷不顯著,與溶劑對照組相比差異不大。3.與溶劑對照組相比,Ba P染毒組精子DNA損傷顯著增加(P0.01);中藥各劑量組大鼠精子DNA碎片指數(shù)均明顯低于Ba P染毒組(P0.05);其中,高、中劑量組大鼠精子DNA碎片指數(shù)顯著降低(P0.01)。4.Ba P染毒組大鼠睪丸內(nèi)XRCC1蛋白、OGG1蛋白表達(dá)均明顯高于溶劑對照組(P0.01);中藥高劑量組大鼠XRCC1蛋白表達(dá)高于Ba P染毒組(P0.01)。與溶劑對照組組比較,Ba P染毒組睪丸細(xì)胞內(nèi)OGG1蛋白的表達(dá)水平降低(P0.01);與Ba P染毒組相比,中藥各劑量組細(xì)胞內(nèi),OGG1蛋白的表達(dá)水平升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中高劑量組生精細(xì)胞OGG1蛋白表達(dá)顯著增多(P0.01)。結(jié)論:益腎通絡(luò)方可以防護(hù)苯并(a)芘對大鼠造成的精子DNA損傷。益腎通絡(luò)方能夠降低FSH、LH水平,降低生精細(xì)胞的病理損傷,上調(diào)XRCC1蛋白、OGG1蛋白的表達(dá)水平,促進(jìn)機(jī)體對精子DNA損傷的修復(fù),拮抗苯并(a)芘染毒對大鼠精子DNA的損傷。
【圖文】：

圖 11 XRCC1 蛋白及 GAPDH 蛋白圖 12 OGG1 蛋白及 GAPDH 蛋白的 分別表示溶劑對照組、BaP 染毒組、中藥低劑量組、上樣量均為 50 μg，用 GAPDH 作為內(nèi)參。 4 各組大鼠睪丸組織 XRCC1 蛋白、OGG1 蛋白的數(shù)量（只） XRCC1 蛋白 15 0.851±0.050 10 0.726±0.052#低劑量組 10 0.767±0.049 A B C D E1H

圖 12 OGG1 蛋白及 GAPDH 蛋白的表-E 分別表示溶劑對照組、BaP 染毒組、中藥低劑量組、中藥白上樣量均為 50 μg，用 GAPDH 作為內(nèi)參。表 4 各組大鼠睪丸組織 XRCC1 蛋白、OGG1 蛋白的表數(shù)量（只） XRCC1 蛋白 組 15 0.851±0.050 組 10 0.726±0.052#方低劑量組 10 0.767±0.049 方中劑量組 11 0.778±0.080 方高劑量組 9 0.838±0.067*△與溶劑對照組比較#P＜0.01；與 BaP 染毒組比劑量組比較，△P＜0.05。
【學(xué)位授予單位】：河南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2604681