【摘要】：本論文由兩部分組成,第一部分為淫羊藿的質(zhì)量分析研究,第二部分由2-喹諾酮類衍生物化學(xué)合成及其抗腫瘤作用研究。（一）淫羊藿(Epimedii Folium)為常用傳統(tǒng)中藥,收載于歷年版《中華人民共和國(guó)藥典》一部。具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕之功效。該中藥廣泛應(yīng)用于中醫(yī)臨床配伍組方治療多種疾患,亦為諸多中成藥和保健藥品的原料藥材。為了有效控制淫羊藿藥材的質(zhì)量,本論文對(duì)其有效成分群進(jìn)行了含量分析研究,以期在《中國(guó)藥典》再版時(shí)為淫羊藿的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)采用現(xiàn)代超高效液相色譜法(UPLC-DAD),對(duì)淫羊藿有效成分群的總含量進(jìn)行了分析研究,建立了含量測(cè)定方法。以淫羊藿藥材為對(duì)象,同譜檢測(cè)了5種含量較高的黃酮類有效成分。所建立的含量測(cè)定方法線性關(guān)系良好,精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率等試驗(yàn)均符合要求(RSD3%)。本含量測(cè)定方法具有一譜測(cè)定多種成分的特點(diǎn),同時(shí)具有分析時(shí)間短、分離效果好、進(jìn)樣量少、溶劑消耗少等優(yōu)點(diǎn)。采用本含量測(cè)定方法,對(duì)14批次淫羊藿有效成分群總含量進(jìn)行了分析比較研究,其檢測(cè)結(jié)果能有效評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地藥材的質(zhì)量;從而為該藥材建立了一種可靠的質(zhì)量分析方法,能較全面反映其內(nèi)在質(zhì)量。（二）喹諾酮類化合物是很多中藥中重要有效成分。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,很多蕓香科植物的中藥抗腫瘤活性成分是2-喹諾酮類化合物。因此,本論文以2-喹諾酮作為先導(dǎo)化合物進(jìn)行了化學(xué)合成研究,以期發(fā)現(xiàn)高效抗腫瘤化合物,為研究新型抗腫瘤藥物提供目標(biāo)化合物。本文以喹啉系列化合物為反應(yīng)起始物,經(jīng)甲基化和氧化反應(yīng)制得2-喹諾酮類中間產(chǎn)物;經(jīng)硝化反應(yīng)得到硝化了的2-喹諾酮類衍生物;再經(jīng)cine-substitution反應(yīng)獲得1-甲基化-4-氰化-2-喹諾酮類衍生物,這些化合物的結(jié)構(gòu)經(jīng)1H NMR,13C NMR和HR-MS得以確證。采用MTT法評(píng)價(jià)了合成的部分2-喹諾酮類化合物抑制MCF-7,CT-26,A549,H1299,PC-12及Hep G-2腫瘤細(xì)胞增殖的作用。研究結(jié)果表明,部分的化合物對(duì)這6種不同的腫瘤細(xì)胞的抗增殖活性明顯高于喹啉系列物,其中1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹諾酮(化合物15)對(duì)6種腫瘤細(xì)胞的增殖表現(xiàn)出顯著的抑制作用,其中對(duì)A549的抑制活性最高,IC50為2.05μmol·L-1。1-甲基-6,8-二硝基-4-氰基-2-喹諾酮可選擇性抑制A549和CT-26細(xì)胞,IC50分別為9.34μmol·L-1和18.4μmol·L-1。采用Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記法及Western blot蛋白質(zhì)免疫印跡學(xué)法,以A549細(xì)胞為受試對(duì)象,對(duì)化合物1,8-二甲基-3,5,7-三硝基-2-喹諾酮(化合物15)的抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)行初步研究。結(jié)果顯示,化合物15能夠明顯抑制A549細(xì)胞增殖,并呈劑量和時(shí)間依賴性。流式細(xì)胞儀檢測(cè)到化合物15誘導(dǎo)A549細(xì)胞發(fā)生凋亡,其凋亡率在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。蛋白質(zhì)免疫印跡法Western blot表明在不同濃度(0、1.25、2.5和5μg·m L-1)的化合物15作用A549細(xì)胞12 h后,Cleaved-Caspase-3及Bax的表達(dá)隨藥物濃度的增大而上調(diào),Bcl-2的表達(dá)隨藥物濃度的增大而下調(diào)。故推測(cè)化合物15可能是通過(guò)線粒體凋亡途徑來(lái)誘導(dǎo)A549肺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。同時(shí)檢測(cè)了PI3K/AKT/FOXO1通路相關(guān)蛋白,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其可下調(diào)p-AKT和p-FOXO1的表達(dá),上調(diào)Bim的表達(dá)。故推測(cè)化合物15可能通過(guò)抑制PI3K/AKT/FOXO1信號(hào)通路誘導(dǎo)A549肺癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。
【圖文】：

2.5 淫羊藿特征圖譜的建立收集到不同來(lái)源的 14 批淫羊藿藥材，經(jīng)本實(shí)驗(yàn)室鑒定其均為淫羊藿屬。取不同產(chǎn)地或批次的淫羊藿藥材 0.1 g，精密稱定，，按照“2.3”項(xiàng)下的方法，制備供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣。

characteristics of N-unsubstituted and substituted基本母核的化學(xué)合成合成通常有三種方法：（1）直接的喹合；（3）環(huán)轉(zhuǎn)換。這三種方法是相輔環(huán)飾喹啉環(huán)的方法就是先使 MeQone 甲基甲酯反應(yīng)生成中間體 N-甲基喹諾酮鹽二甲酯或者是碘甲烷。接著進(jìn)行的氧化應(yīng)。盡管可以用高錳酸鉀或氧化活性二低。另一方面，在堿性條件下進(jìn)行分子一種有效的方法。
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2597252