【摘要】：目的研究清熱化痰通腑方(HTF)對(duì)卒中相關(guān)性肺炎(SAP)大鼠的干預(yù)作用,并基于超高效液相色譜-四級(jí)桿飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-QTOF/MS)的代謝組學(xué)技術(shù),探討HTF灌腸治療SAP的作用機(jī)制。方法將21只SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)(J)組、模型(M)組和治療(Z)組(HTF,濃度為lg/ml,劑量為7.6ml/d),每組7只,除J組外,其余兩組均采用改良線栓法結(jié)合氣管注射法建立SAP模型。Z組給予HTF干預(yù),其余兩組給予生理鹽水對(duì)照,療程均為7天。造模后,每組隨機(jī)抽取1只大鼠取腦組織行TTC染色觀察腦梗死情況;觀察余下各組大鼠的一般情況(狀態(tài)、被毛、活動(dòng)情況、體溫、鼻周分泌物);于造模第1天及造模第7天進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分;取三組大鼠肺組織進(jìn)行銅綠假單胞菌鑒定;采用HE染色法觀察各組大鼠腦組織、肺組織病理學(xué)變化;采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清ET-1、血清IL-1β和肺組織IL-1β的濃度;采用UPLC-QTOF/MS分析技術(shù)檢測三組大鼠血清中的代謝物。應(yīng)用主成分分析(PCA)法、正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)法和t檢驗(yàn)篩選血清中的代謝物,尋找潛在的生物標(biāo)志物,通過潛在的生物標(biāo)志物得到相關(guān)代謝通路,發(fā)現(xiàn)異常代謝及HTF對(duì)異常代謝的調(diào)節(jié)作用,闡明HTF治療SAP大鼠的作用機(jī)制。結(jié)果1.一般情況:實(shí)驗(yàn)過程中,J組大鼠狀態(tài)良好,被毛平順有光澤,活動(dòng)靈敏,體溫正常,鼻頭濕潤沒有喘促;M組大鼠狀態(tài)差,被毛亂而無光澤,無精打采,高熱,鼻周有大量分泌物并有喘促,Z組大鼠狀態(tài)一般,被毛缺乏光澤,活動(dòng)欠佳,低熱,鼻周有少許分泌物。2.神經(jīng)功能評(píng)分:J組造模第1天及第7天神經(jīng)功能評(píng)分均為0分;造模第1天M組與Z組神經(jīng)功能評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);造模第7天,Z組神經(jīng)功能評(píng)分顯著低于M組;M組造模第7天與第1天相比神經(jīng)功能積分升高;Z組造模第7天與第1天相比神經(jīng)功能積分顯著降低。3.腦、肺組織HE染色腦組織HE染色:J組腦組織幾乎無變化,細(xì)胞無顯著腫脹,排列整齊,間質(zhì)均勻,無炎癥細(xì)胞浸潤。M組細(xì)胞排列紊亂,有大量炎癥性細(xì)胞浸潤,小膠質(zhì)細(xì)胞增多,光鏡下可見神經(jīng)元細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及微血管周隙均增寬、神經(jīng)纖維網(wǎng)疏松,呈海綿狀或空泡樣。Z組腦組織炎癥浸潤程度較M組顯著減輕。肺組織HE染色:J組大鼠肺組織肺泡管周圍及肺泡囊周圍未見炎性細(xì)胞浸潤;M組可見大量炎性細(xì)胞浸潤,肺組織大片實(shí)化,肺泡的輪廓隱約可見;Z組炎性細(xì)胞浸潤較M組少,肺組織實(shí)化較M改善,肺泡的輪廓可見,但炎癥浸潤較J組顯著。4.ELISA檢測結(jié)果:與假手術(shù)組相比模型組的血清IL-1β濃度顯著升高(P0.01),與模型組相比,治療組血清IL-1β濃度顯著低于模型組(P0.01);與假手術(shù)組相比模型組的血清ET-1濃度顯著升高(P0.01),與模型組相比,治療組血清ET-1濃度顯著低于模型組(P0.01);與假手術(shù)組相比模型組的肺組織IL-1β濃度顯著升高(P0.01),與模型組相比,治療組肺組織IL-1β濃度顯著低于模型組(P0.01)。5.大鼠血清的代謝組學(xué)分析:共篩選出22種潛在生物標(biāo)志物,其中,M組與J組相比,血清中3-甲氧基-L-酪氨酸、白三烯B4、苯乙酰甘氨酸、磷酸絲氨酸、前列腺素E2、前列腺素F2α、血栓素B2、11-脫氧皮質(zhì)酮、19-氧睪酮、前列腺素F1α、油酸、棕櫚酸的濃度顯著升高(P0.01),前列腺素E3的濃度升高(P0.05),雌激素、癸二酸、脫氧胞苷、酪氨酸、莽草酸、順烏頭酸的濃度顯著降低(P0.01);N-乙酰谷氨酸鹽酸、胞苷、維生素E的濃度降低(P0.05);Z組與M組相比,N-乙酰谷氨酸鹽酸、雌激素、癸二酸、脫氧胞苷、胞苷、酪氨酸、莽草酸、順烏頭酸、維生素E的濃度顯著升高(P0.01),3-甲氧基-L-酪氨酸、白三烯B4、苯乙酰甘氨酸、磷酸絲氨酸、前列腺素E2、前列腺素F2α、血栓素B2、11-脫氧皮質(zhì)酮、19-氧睪酮、前列腺素E3、前列腺素F1α、油酸、棕櫚酸的濃度顯著降低(P0.01)。涉及15條相關(guān)代謝通路,分別為:花生四烯酸代謝,脂肪酸生物合成,嘧啶代謝,檸檬酸循環(huán)(TCA循環(huán)),類固醇激素生物合成,線粒體脂肪酸伸長,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,泛醌和其他萜類醌生物合成,苯丙氨酸代謝,甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝,乙醛和二羧酸代謝,脂肪酸代謝,半胱氨酸和蛋氨酸代謝,氨酰tRNA生物合成,精氨酸和脯氨酸代謝。按影響值的大小得到密切相關(guān)的7條代謝通路,依次為:苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,檸檬酸循環(huán)(TCA循環(huán)),花生四烯酸代謝,類固醇激素生物合成,脂肪酸代謝,甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝,嘧啶代謝。涉及的異常代謝為脂質(zhì)代謝(花生四烯酸代謝、類固醇代謝、硬脂酸代謝、其他脂質(zhì)代謝),能量代謝,其他(核糖核酸與脫氧核糖核酸合成、嘧啶代謝)。結(jié)論1.HTF對(duì)改良線栓法結(jié)合氣管注射法所致的SAP大鼠具有較好的干預(yù)作用,表現(xiàn)為降低SAP模型大鼠神經(jīng)功能評(píng)分;減輕SAP模型大鼠腦組織、肺組織的炎癥;降低SAP模型大鼠血清IL-1β、ET-1及肺組織IL-1β含量;HTF對(duì)SAP大鼠腦組織以及肺組織具有抗炎和改善缺血缺氧的作用。2.改良線栓法結(jié)合氣管注射法所致的SAP大鼠模型血清代謝輪廓發(fā)生了顯著變化,主要表現(xiàn)為22種生物標(biāo)志物在血清中含量的上調(diào)或下調(diào),擾動(dòng)的代謝通路共15條,其中密切相關(guān)有7條,涉及的異常代謝有脂質(zhì)代謝、能量代謝等。HTF對(duì)SAP大鼠腦組織以及肺組織的抗炎和改善缺血缺氧的作用機(jī)制可能與通過調(diào)節(jié)以上相關(guān)通路,回調(diào)SAP大鼠血清代謝標(biāo)志物水平,使異常代謝恢復(fù)正常有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 三組大鼠腦組織 TTC 染色Fig. 1 TTC staining of brain tissue in three groups of rats組織銅綠假單胞菌鑒定J 組大鼠的肺組織勻漿未培養(yǎng)出銅綠假單胞菌，M 組及 Z 組大鼠的肺組均培養(yǎng)出銅綠假單胞菌。 染色結(jié)果各組大鼠腦組織 HE 染色J 組腦組織幾乎無變化，細(xì)胞無顯著腫脹，排列整齊，間質(zhì)均勻，無胞浸潤。M 組細(xì)胞排列紊亂，有大量炎癥性細(xì)胞浸潤，小膠質(zhì)細(xì)胞光鏡下可見神經(jīng)元細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞及微血管周隙均增寬、神經(jīng)纖維

圖 2 三組大鼠腦組織 HE 染色（×200）Fig.2 HE staining (x 200) of brain tissue in three groups of rats5.2 各組大鼠肺組織 HE 染色J 組大鼠肺組織肺泡管周圍及肺泡囊周圍未見炎性細(xì)胞浸潤；M 組可見大量炎性細(xì)胞浸潤，肺組織大片實(shí)化，肺泡的輪廓隱約可見；Z 組炎性細(xì)胞浸潤較 M 組少，肺組織實(shí)化較 M 改善，肺泡的輪廓可見，，但炎癥浸潤較 J 組顯著。（如圖 3）。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R285.5

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本文編號(hào)：2588262