本文關(guān)鍵詞：鎘抑制卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中MPF的活性及其相關(guān)基因的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過觀察卵母細(xì)胞MI期即GV期至第一極體釋放進(jìn)程中,不同劑量鎘暴露卵母細(xì)胞不同時間后,卵母細(xì)胞成熟促進(jìn)因子(MPF)活性及其相關(guān)基因—Cdk1、Ccnb1、Cdc25b的變化,探討鎘是否通過改變MPF相關(guān)基因的表達(dá)調(diào)節(jié)MPF的活性,進(jìn)而影響卵母細(xì)胞MI期的進(jìn)程。方法28日齡的清潔級ICR雌性小鼠腹腔注射PMSG 10 IU/只,48小時后處死,取生發(fā)泡期卵母細(xì)胞于體外暴露鎘0 h、6 h、9 h,鎘暴露劑量分別為0μM、0.05μM、0.5μM、2.5μM、5μM;用體視顯微鏡分別觀察0 h、6 h、9 h各劑量組卵母細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;分別收集0 h、6 h、9 h各劑量組的卵母細(xì)胞,采用ELISA法檢測卵母細(xì)胞MPF活性;采用Real time-PCR方法和Western-blot法檢測各暴露時間點、各劑量組卵母細(xì)胞的Cdk1、Ccnb1、Cdc25b的m RNA及蛋白表達(dá)情況。結(jié)果1、鎘暴露小鼠卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中不同暴露劑量、不同暴露時間點的細(xì)胞形態(tài)觀察:0 h Cd組每個卵母細(xì)胞均可見清晰的細(xì)胞核,核大,外包完整的細(xì)胞膜,卵母細(xì)胞外包裹著層透明帶,此時的卵母細(xì)胞即為GV(Germinal vesicle)期的卵母細(xì)胞。對照組卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)6 h可見卵母細(xì)胞基本都發(fā)生了生發(fā)泡破裂(Germinal vesicle breaking down,GVBD),個別細(xì)胞可見卵周隙(卵母細(xì)胞與透明帶之間的距離)變寬;對照組體外培養(yǎng)9 h可見卵母細(xì)胞均已發(fā)生GVBD,少量細(xì)胞可見第一極體排出;0.05μM Cd組、0.5μM Cd組鎘暴露6h,均可見大量的卵母細(xì)胞發(fā)生GVBD,但仍有少量卵母細(xì)胞可見明顯的細(xì)胞核;2.5μM Cd組、5μM Cd組鎘暴露6 h較0.05μM Cd組、0.5μM Cd組有更多的卵母細(xì)胞可見明顯的細(xì)胞核;0.05μM Cd組、0.5μM Cd組、2.5μM Cd組、5μM Cd組鎘暴露9 h可見卵母細(xì)胞基本都已發(fā)生GVBD,但仍有個別卵母細(xì)胞可見細(xì)胞核;其中,0.05μM Cd組、0.5μM Cd組可見少量卵母細(xì)胞卵周隙變寬。2、鎘暴露小鼠卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中對MPF活性的影響:(1)同一暴露劑量,不同暴露時間:0μM Cd組,隨著培養(yǎng)時間的延長MPF活性呈先上升后下降的趨勢;與0 h比較,MPF活性在6 h和9 h均上升,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);9 h與6 h比較MPF活性降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);余各染毒劑量組,隨著鎘暴露時間的延長MPF活性呈上升趨勢;與0 h比較,MPF活性在培養(yǎng)6 h和9 h均上升,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(2)同一暴露時間,不同暴露劑量:隨著染鎘劑量的增加,MPF的活性呈先上升后下降的趨勢;其中暴露6 h,0.05μM Cd組、0.5μM Cd組MPF活性高于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);暴露9 h,各染毒組MPF活性均高于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);3、鎘暴露小鼠卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中對Cdk1 m RNA及蛋白表達(dá)的影響:(1)同一暴露劑量,不同暴露時間:Cdk1 m RNA表達(dá),0μM Cd組,9 h與0 h比較表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);0.05μM Cd組和5μM Cd組,隨著鎘暴露時間的延長表達(dá)呈上升趨勢;與0 h比較,在6 h和9 h表達(dá)均上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);0.5μM Cd組、2.5μM Cd組,Cdk1 m RNA在6 h表達(dá)下調(diào),9 h表達(dá)又明顯上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);CDK1蛋白表達(dá),0μM Cd組,6 h和9 h與0h比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);各染毒劑量組隨著鎘暴露時間的延長蛋白表達(dá)呈上升趨勢;與0 h比較,各染毒組在6 h和9 h蛋白表達(dá)均上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);(2)同一暴露時間,不同暴露劑量:①暴露6 h,Cdk1 m RNA表達(dá),與對照組比較,0.05μM Cd組、5μM Cd組表達(dá)上調(diào),0.5μM Cd組、2.5μM Cd組表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);CDK1蛋白表達(dá),各染毒組隨著染鎘劑量的增加呈先上升后下降的趨勢,與對照組比較,各染毒組表達(dá)均上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);②暴露9 h,各染毒組Cdk1 m RNA及蛋白表達(dá)隨著染毒劑量的增加呈先上升后下降的趨勢;與對照組比較,各染毒組m RAN及蛋白表達(dá)均上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);4、鎘暴露小鼠卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中對Ccnb1 m RNA及蛋白表達(dá)的影響:(1)同一暴露劑量,不同暴露時間:0μM Cd組,隨著培養(yǎng)時間的延長m RNA和蛋白表達(dá)呈先上升后下降的趨勢;與0 h比較,6 h和9 h m RAN和蛋白表達(dá)上調(diào),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);9 h與6 h比較表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);各染毒劑量組隨著鎘暴露時間點延長m RNA和蛋白表達(dá)呈上升的趨勢;與0 h比較,6 h和9 h表達(dá)上調(diào),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);(2)同一暴露時間,不同暴露劑量:①暴露6 h,Ccnb1 m RNA表達(dá),與對照組比較,0.05μM Cd組、5μM Cd組表達(dá)均上調(diào),0.5μM Cd組、2.5μM Cd組表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);CCNB1蛋白表達(dá),各染毒組隨著染毒劑量的增加呈先上升后下降的趨勢;與對照組比較,各染毒組表達(dá)均上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);②暴露9 h,各染毒組Ccnb1 m RNA和蛋白表達(dá)隨著染毒劑量的增加呈先上升后下降的趨勢;與對照組比較,各染毒組表達(dá)均上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);5、鎘暴露小鼠卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中對Cdc25b m RNA及蛋白表達(dá)的影響:(1)同一暴露劑量,不同暴露時間:各劑量組Cdc25b m RNA及蛋白表達(dá)隨著培養(yǎng)及染得時間的延長呈上升趨勢;與0 h比較,6 h和9 h表達(dá)均上調(diào),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);(2)同一暴露時間,不同暴露劑量:①暴露6 h,Cdc25b m RNA表達(dá),與對照組比較,0.05μM Cd組、5μM Cd組表達(dá)均上調(diào),0.5μM Cd組、2.5μM Cd組表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);CDC25B蛋白表達(dá),各染毒組隨著染毒劑量的增加呈先上升后下降的趨勢;與對照組比較,各染毒組表達(dá)均上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);②暴露9 h,各染毒組Cdc25b m RNA和蛋白表達(dá)隨著染毒劑量的增加呈先上升后下降的趨勢;與對照組比較,各染毒組表達(dá)均上調(diào),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);結(jié)論在本實驗條件下:1、鎘暴露卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中,可使卵母細(xì)胞阻滯于MI期,抑制卵母細(xì)胞第一極體的排出;2、鎘暴露卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中可使MPF維持在高活性狀態(tài),破壞MPF活性的周期性變化,從而使卵母細(xì)胞阻滯于MI期;3、卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中,鎘的暴露可促進(jìn)MPF的催化亞基CDK1及調(diào)節(jié)亞基CCNB1的合成,促進(jìn)MPF活化的激動劑CDC25B合成,這可能是使MPF維持在高活性的分子機制,最終使卵母細(xì)胞無法完成減數(shù)分裂。
【關(guān)鍵詞】：鎘 卵母細(xì)胞培養(yǎng) 卵母細(xì)胞成熟 MPF 蛋白
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114
【目錄】：

• 英文縮寫詞匯表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-13
• 前言13-16
• 技術(shù)路線16-17
• 引言17
• 材料與方法17-28
• 1 材料17-21
• 2 方法21-28
• 3 資料及數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析28
• 結(jié)果與分析28-48
• 1 鎘暴露小鼠卵母細(xì)胞 MI 期進(jìn)程中不同劑量組、不同時間點的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察28-31
• 2 鎘暴露小鼠卵母細(xì)胞 MI 期進(jìn)程中對 MPF 活性的影響31-33
• 3 鎘暴露卵母細(xì)胞 MI 期進(jìn)程中對卵母細(xì)胞 MPF 相關(guān)基因的影響33-48
• 討論48-54
• 1 鎘暴露小鼠卵母細(xì)胞 MI 期進(jìn)程中的影響48-49
• 2 MPF 活性及其相關(guān)基因（Cdk1、Ccnb1、Cdc25b）表達(dá)在鎘暴露小鼠卵母細(xì)胞 MI 期進(jìn)程中的意義49-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-60
• 致謝60-61
• 綜述61-69
• 參考文獻(xiàn)66-69

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 趙涵;李媛;高選;陳子江;;人類卵母細(xì)胞減數(shù)分裂進(jìn)程及形態(tài)學(xué)研究[J];解剖學(xué)報;2006年04期

2 張帆;張純;鄭潔;何聯(lián);;鎘對未成年雌性大鼠卵泡發(fā)育的影響[J];山東醫(yī)藥;2013年47期

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  本文關(guān)鍵詞：鎘抑制卵母細(xì)胞MI期進(jìn)程中MPF的活性及其相關(guān)基因的表達(dá)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：356998