發(fā)布時(shí)間：2017-10-08 13:25

  本文關(guān)鍵詞：維拉帕米抗小鼠急性肝衰竭作用及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 維拉帕米 凋亡 壞死 急性肝衰竭

【摘要】：目的觀察維拉帕米(Verapamil, VER)抗小鼠急性肝衰竭(acute liver failure, ALF)作用,研究VER對(duì)ALF小鼠肝功能及血流動(dòng)力學(xué)的影響,并初步探討其作用機(jī)制。方法1.采用D-氨基半乳糖(D-GlaN)與脂多糖(LPS)聯(lián)合給藥誘導(dǎo)小鼠ALF。造模前1h尾靜脈注射VER,觀察VER對(duì)ALF小鼠存活率,血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)含量等肝功能指標(biāo)的影響,丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)氧化指標(biāo)活性的變化以及HE染色觀察肝組織病理學(xué)改變,評(píng)價(jià)VER抗小鼠ALF作用。2.通過酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)動(dòng)態(tài)觀察VER對(duì)ALF小鼠造模后1、2、4、6hTNF-α含量和組織蛋白酶B(Cath B)活性的影響；實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)Bax和Bcl-2基因水平的表達(dá),研究VER抗小鼠ALF的分子作用機(jī)制。3.觀察ALF小鼠平均動(dòng)脈壓、心率的變化,以及肝組織血流量、血流速度的改變,研究VER對(duì)ALF小鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響,評(píng)價(jià)VER的不良反應(yīng)。結(jié)果l.D-GlaN/LPS成功誘導(dǎo)小鼠ALF。造模前1h靜脈注射VER可非常顯著地提高小鼠存活率,降低ALT、AST、TBIL水平,改善肝功能。并且降低ALF小鼠MDA水平,升高SOD活性,發(fā)揮抗氧化損傷作用。同時(shí)肝組織切片發(fā)現(xiàn)VER能大大減輕肝組織病理變化,維持肝組織和細(xì)胞正常結(jié)構(gòu),防止肝組織壞死。2. ELISA結(jié)果表明注射D-GlaN和LPS后1h,ALF小鼠TNF-α含量急劇升高,Cath B活性在4h時(shí)達(dá)到峰值,給予VER能下調(diào)TNF-α含量和Cath B活性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明ALF小鼠Bax基因水平表達(dá)量增加,給予VER治療可下調(diào)Bax基因水平,上調(diào)Bcl-2基因水平,降低Bax/Bcl-2比值,發(fā)揮抗凋亡作用。3.ALF小鼠平均動(dòng)脈壓下降,心率加快,肝臟血流量減少,血流速度減慢,說明發(fā)生肝功能衰竭時(shí),肝臟微循環(huán)出現(xiàn)明顯障礙。而VER治療能增加肝臟血流量,改善肝臟微循環(huán),但是大劑量VER能明顯降低血壓和心率,會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重低血壓、心動(dòng)過緩不良反應(yīng)。結(jié)論VER具有極為顯著的抗D-GlaN和LPS誘導(dǎo)的小鼠ALF作用,抑制肝細(xì)胞死亡,減輕肝組織病理改變。該藥可能通過消除鈣超載、抗氧化損傷、抑制TNF-α死亡受體通路和溶酶體Cath B介導(dǎo)的死亡通路,以及阻止Bax基因、促進(jìn)Bcl-2基因上調(diào),抑制線粒體凋亡通路激活而發(fā)揮抗凋亡作用。但是由于大劑量會(huì)降低血壓和心率,會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重低血壓、心動(dòng)過緩不良反應(yīng),后期研究需對(duì)劑量或劑型作進(jìn)一步的改善。
【關(guān)鍵詞】：維拉帕米 凋亡 壞死 急性肝衰竭
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 縮略詞6-7
• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 前言11-13
• 第一部分 維拉帕米抗ALF小鼠藥效學(xué)研究13-21
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法13-15
• (一) 實(shí)驗(yàn)材料13-14
• 1. 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑13
• 2. 實(shí)驗(yàn)儀器13
• 3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13-14
• (二) 實(shí)驗(yàn)方法14-15
• 1. 小鼠ALF模型的建立14
• 2. VER對(duì)ALF小鼠存活率的影響14
• 3. VER對(duì)ALF小鼠肝功能水平的影響14
• 4 VER對(duì)ALF小鼠肝組織病理學(xué)改變的影響14-15
• 5 統(tǒng)計(jì)處理15
• 二 實(shí)驗(yàn)結(jié)果15-19
• 1. 小鼠ALF模型的建立15-16
• 2. VER對(duì)ALF小鼠存活率的影響16
• 3. VER對(duì)ALF小鼠肝功能的影響16-18
• 4. VER減輕ALF小鼠肝組織病理改變18-19
• 三 討論19
• 四 小結(jié)19-21
• 第二部分 維拉帕米抗ALF小鼠肝細(xì)胞死亡作用的分子機(jī)制探討21-33
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法21-26
• (一) 實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 1. 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑21
• 2. 實(shí)驗(yàn)儀器21
• 3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物21-22
• (二) 實(shí)驗(yàn)方法22-26
• 1. 實(shí)驗(yàn)分組22
• 2. 小鼠血清以及組織樣本的采集22
• 3. VER對(duì)ALF小鼠血清TNF-α含量的影響22-23
• 4. VER對(duì)ALF小鼠肝組織勻漿組織蛋白酶B(Cath B)活性的影響23
• 5. RT-PCR法檢測(cè)Bax、Bcl-2基因表達(dá)水平23-26
• 5.1. 實(shí)驗(yàn)中主要器具處理及試劑配制24
• 5.2. 肝組織樣本總RNA的提取24-25
• 5.3. 反轉(zhuǎn)錄合成cDNA25
• 5.4. 熒光定量PCR檢測(cè)引物設(shè)計(jì)和擴(kuò)增條件優(yōu)化25-26
• 5.5. 數(shù)據(jù)收集26
• 6. 統(tǒng)計(jì)處理26
• 二 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-31
• 1. VER對(duì)ALF小鼠血清TNF-α含量的影響26-27
• 2. VER對(duì)肝組織勻漿Cath B活性的影響27-28
• 3. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)VER對(duì)ALF小鼠肝臟Bax、Bcl-2基因表達(dá)的影響28-31
• 3.1. 擴(kuò)增產(chǎn)物特異性28-29
• 3.2. Bax、Bcl-2基因擴(kuò)增效率29-30
• 3.3. VER對(duì)Bax、Bcl-2基因表達(dá)的影響30-31
• 三 討論31-32
• 四 小結(jié)32-33
• 第三部分 維拉帕米對(duì)ALF小鼠血流的影響33-39
• 一、實(shí)驗(yàn)材料與方法33-34
• (一) 實(shí)驗(yàn)材料33
• 1. 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑33
• 2. 實(shí)驗(yàn)儀器33
• 3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物33
• (二) 實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥方法33-34
• 2. VER對(duì)ALF小鼠平均動(dòng)脈壓、心率的影響34
• 3. VER對(duì)ALF小鼠血流量的影響34
• 4. 統(tǒng)計(jì)處理34
• 二 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-37
• 1. VER對(duì)ALF小鼠血壓、心率的影響34-36
• 1.1. VER對(duì)ALF小鼠血壓的影響34-35
• 1.2. VER對(duì)ALF小鼠心率的影響35-36
• 2. VER對(duì)ALF小鼠肝臟血流量的影響36-37
• 2.1. VER對(duì)ALF小鼠肝臟血流量的影響36
• 2.2. VER對(duì)ALF小鼠肝臟血流速度的影響36-37
• 三 討論37
• 四 小結(jié)37-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-42
• 致謝42-43
• 文獻(xiàn)綜述43-55
• 參考文獻(xiàn)52-55

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 徐旭雯;譚德明;魯猛厚;;粒細(xì)胞集落刺激因子對(duì)小鼠急性肝衰竭的保護(hù)作用[J];中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年04期

2 Squires Jr. R.H.;Shneider B.L.;Bucuvalas J. ;郭戰(zhàn)宏;;兒童急性肝衰竭:兒科急性肝衰竭研究組的最初348例患兒[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(兒科學(xué)分冊(cè));2006年12期

3 蘇艷偉;楊繼鑫;黃煥軍;;以急性肝衰竭為主要表現(xiàn)的熱射病1例[J];中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志;2008年03期

4 袁慧琳;張穎冬;葉民;張宙;孫恒斌;;高滲性非酮癥糖尿病昏迷合并急性肝衰竭1例[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2009年36期

5 李汛;何燦明;王魯文;龔作炯;;急性肝衰竭大鼠肝組織組蛋白去乙�；�2的表達(dá)[J];實(shí)用肝臟病雜志;2010年05期

6 李克;成軍;;急性肝衰竭的加強(qiáng)治療管理[J];中國(guó)肝臟病雜志(電子版);2010年02期

7 ;急性肝衰竭的定義與治療[J];臨床薈萃;2011年02期

8 周新民;;急性肝衰竭病情評(píng)估與處理[J];透析與人工器官;2011年02期

9 段鐘平;朱隴東;;急性肝衰竭預(yù)后評(píng)估系統(tǒng)及研究進(jìn)展[J];河南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年03期

10 楊運(yùn)高;;氧化應(yīng)激與急性肝衰竭潛在新靶點(diǎn)[J];中國(guó)基礎(chǔ)科學(xué);2012年06期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 毛青;;急性肝衰竭前期[A];全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病新進(jìn)展講習(xí)班、江西省第二次中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2010年

2 段英;邢卉春;王笑梅;歐蔚妮;魏麗榮;成軍;;藥物性亞急性肝衰竭臨床特點(diǎn)及預(yù)后[A];第二十一次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

3 段英;邢卉春;王笑梅;歐蔚妮;魏麗榮;成軍;;藥物性亞急性肝衰竭臨床特點(diǎn)及預(yù)后[A];全國(guó)第4屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

4 王建鋒;李霄;韓煒;張卓超;姜楠;竇科峰;;急性肝衰竭的治療進(jìn)展[A];2012中國(guó)器官移植大會(huì)論文匯編[C];2012年

5 許爛漫;陳永平;王曉東;黃瑜;高峰;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在急性肝衰竭大鼠中的變化及意義[A];2009香港-北京-杭州內(nèi)科論壇暨2009年浙江省內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

6 張南;鄧國(guó)宏;王宇明;;重慶地區(qū)急性肝衰竭病因和結(jié)局分析[A];病毒性肝炎慢性化、重癥化基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

7 許爛漫;陳永平;王曉東;黃瑜;高峰;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在急性肝衰竭大鼠中的變化及意義[A];第十八次全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

8 許爛漫;陳永平;王曉東;黃瑜;高峰;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在急性肝衰竭大鼠中的變化及意義[A];第二屆傳染病診治高峰論壇暨2009年浙江省感染病、肝病學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

9 李汛;何燦明;王魯文;龔作炯;;組蛋白去乙�；�2在急性肝衰竭大鼠的表達(dá)[A];全國(guó)第3屆中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)傳染病專業(yè)委員會(huì)第2屆委員會(huì)議論文匯編[C];2010年

10 王寶恩;;急性肝衰竭[A];2000年全國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2000年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院全軍傳染病研究所 張緒清 毛青;急性肝衰竭 救治理念獲更新[N];健康報(bào);2012年

2 蕭紅;急性肝衰竭的診治[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2009年

3 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院急診科 教授 羅學(xué)宏;感冒藥致急性肝衰竭一例[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2010年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 徐旭雯;粒細(xì)胞集落刺激因子治療急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2006年

2 劉鳳超;急性肝衰竭模型鼠肝細(xì)胞凋亡機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2009年

3 郝彥琴;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)急性肝衰竭大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥的治療作用及機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

4 姜雪強(qiáng);脂氧素對(duì)急性肝衰竭的保護(hù)作用及其作用機(jī)制探討[D];華中科技大學(xué);2011年

5 李俊剛;可回復(fù)永生化人胎肝細(xì)胞系的建立及其移植預(yù)防小鼠急性肝衰竭[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 周寧;一種新型非生物人工肝系統(tǒng)的構(gòu)建及其療效評(píng)估[D];浙江大學(xué);2015年

7 李建州;李氏人工肝（Li-ALS）與分子吸附再循環(huán)系統(tǒng)（MARS）治療急性肝衰竭動(dòng)物的對(duì)比研究[D];浙江大學(xué);2015年

8 周一鳴;干細(xì)胞分化及其對(duì)急性肝衰竭大鼠治療的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

9 余立敏;茵陳澤蘭方對(duì)急性肝衰竭大鼠肝損傷及肝再生的影響[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2007年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張思婷;維拉帕米抗小鼠急性肝衰竭作用及其機(jī)制研究[D];浙江中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 徐山凌;清熱解毒涼血化瘀法聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療急性肝衰竭模型大鼠及其機(jī)制的初步研究[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

3 張海鳴;甲狀腺激素對(duì)急性肝衰竭大鼠肝細(xì)胞的保護(hù)作用[D];江蘇大學(xué);2010年

4 馬俊苓;生長(zhǎng)激素對(duì)大鼠急性肝衰竭的影響其機(jī)制的初步探討[D];天津醫(yī)科大學(xué);2007年

5 周鵬程;微囊懸浮型流化床式生物人工肝治療急性肝衰竭豬的血清代謝組學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2012年

6 趙欣;急性肝衰竭小鼠腸黏膜通透性變化機(jī)制及微生態(tài)制劑的保護(hù)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

7 李憲;血液灌流聯(lián)合血液濾過治療犬急性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究[D];暨南大學(xué);2010年

8 黃建偉;四氯化碳構(gòu)建犬急性肝衰竭模型及血液凈化效果探索[D];暨南大學(xué);2010年

9 奉婷;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)急性肝衰竭的修復(fù)及移植途徑的優(yōu)化[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

10 焦明靜;過氧化物酶體增殖物激活受體α對(duì)急性肝衰竭的保護(hù)作用與機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：994271