發(fā)布時間：2017-10-07 16:47

  本文關(guān)鍵詞：pH響應(yīng)性聚合物PEG-b-PCL-b-PAE遞送萬古霉素靶向皮炎的研究

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【摘要】：智能型納米藥物載體在正常人體生理環(huán)境時,藥物釋放很慢甚至不釋放,而在特定的靶向部位時藥物快速并持續(xù)釋放,從而達到靶向給藥和藥物緩釋的目的。腫瘤內(nèi)部的微酸環(huán)境是研究腫瘤部位靶向給藥的熱點之一,已有國內(nèi)外研究利用納米材料電荷反轉(zhuǎn)的特性增強其在腫瘤部位的聚集,并取得較好的研究效果。炎癥部位與腫瘤組織均呈酸性,pH響應(yīng)性聚合物也可應(yīng)用于抗感染研究。在本研究中,利用聚(β-氨基酯)(PAE)電荷轉(zhuǎn)換的特點,我們設(shè)計并合成了具有pH響應(yīng)的三嵌段共聚物聚乙二醇-b-聚已內(nèi)酯-b-聚氨基酯(PEG-b-PCL-b-PAE),以無pH響應(yīng)的兩嵌段共聚物聚乙二醇-b-聚已內(nèi)酯(PEG-b-PCL)為對照,6-羧基四甲基羅丹明(TAMRA)標記的萬古霉素的載體進行體內(nèi)外作用細菌的研究。實驗結(jié)果表明：通過開環(huán)聚合和邁克爾加成反應(yīng)成功合成了PEG-b-PCL和PEG-b-PCL-b-PAE,利用自組裝技術(shù)分別得到了PEG-PCL和PEG-PCL-PAE膠束。通過MTT實驗證實兩種膠束對NIH 3T3和293T增殖生長無明顯影響；在pH 7.4時,兩種膠束表面均帶負電荷,當pH逐漸降低至小于6.5時,PEG-PCL-PAE膠束表面帶正電,且隨著pH降低其表面所帶正電荷越大,而PEG-b-PCL膠束表面一直帶負電；PEG-PCL-PAE和PEG-PCL分別與萬古霉素通過雙溶劑乳化揮發(fā)法形成53nm和61nm的納米粒(分別以PEG-PCL-PAE/Van和PEG-PCL/Van表示)；通過CLSM對比不同pH(6.5和7.4)下Vanco-TAMRA、PEG-PCL/Van和PEG-PCL-PAE/Van分別與耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)結(jié)合所呈現(xiàn)的熒光,結(jié)果顯示pH 6.5時PEG-PCL-PAE/Van與細菌結(jié)合后其熒光強度明顯增強,其他兩組在不同pH下無明顯變化；裸鼠活體熒光成像結(jié)果表明PEG-PCL-PAE可以有效延長藥物長循環(huán)時間并提高藥物在炎癥部位的聚集。本研究中我們將穩(wěn)定性好、生物相容、具有電荷轉(zhuǎn)變特性的PAE聚合物作為萬古霉素的載體應(yīng)用于體內(nèi)外的研究,結(jié)果顯示該聚合物能有效延長抗生素在體內(nèi)的循環(huán)時間,并增加其在炎癥部位的聚集。PAE利用電荷反轉(zhuǎn)靶向結(jié)合細菌的作用方式使其能廣泛應(yīng)用于各類細菌引起的炎癥,為炎癥的早期診斷和治療提供新的思路和方法。
【關(guān)鍵詞】：pH響應(yīng) β-氨基酯 藥物載體
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R943;R96
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 前言9-18
• 1 研究背景及意義9-16
• 1.1 細菌耐藥性9
• 1.2 納米載體9-14
• 1.2.1 無機納米載體10-12
• 1.2.2 高分子納米載體12-14
• 1.3 刺激響應(yīng)性納米載體14-16
• 1.3.1 pH敏感納米粒子14-15
• 1.3.2 溫度敏感納米載體15
• 1.3.3 還原敏感納米載體15-16
• 2 研究內(nèi)容16-17
• 3 技術(shù)路線17-18
• 實驗材料與方法18-30
• 1. 實驗材料18-22
• 1.1 主要實驗試劑18-19
• 1.2 主要實驗儀器19-21
• 1.3 主要實驗耗材21
• 1.4 細胞株、菌株及動物21
• 1.5 主要溶液配制21-22
• 2. 實驗方法22-30
• 2.1 聚合物合成和納米粒制備23-25
• 2.1.1 PEG-PCL的合成23
• 2.1.2 PEG-PCL-PAE的合成23-24
• 2.1.3 Vanco-TAMRA的合成24
• 2.1.4 PEG-PCL-PAE/Van制備24-25
• 2.1.5 PEG-PCL/Van的制備25
• 2.2 材料表征25
• 2.2.1 質(zhì)譜和~1H NMR分析25
• 2.2.2 納米粒Zeta電位分析25
• 2.2.3 載藥納米粒粒徑分布和形態(tài)觀察25
• 2.2.4 PEG-PCL-PAE/Van的體外穩(wěn)定性檢測25
• 2.3 膠束載藥及體外藥物釋放25-26
• 2.3.1 羅丹明標準曲線測定26
• 2.3.2 載藥量和包封率測定26
• 2.3.3 萬古霉素釋放26
• 2.4 體外靶向研究26-27
• 2.5 抑菌實驗27-28
• 2.5.1 細菌培養(yǎng)27
• 2.5.2 材料抗菌能力測定27-28
• 2.6 細胞毒性實驗28-29
• 2.6.1 細胞培養(yǎng)28
• 2.6.2 細胞毒性測定28-29
• 2.7 體內(nèi)炎癥靶向29-30
• 2.7.1 建立動物皮炎模型29
• 2.7.2 裸鼠體內(nèi)活體熒光成像29-30
• 2.7.3 切片水平驗證30
• 2.8 數(shù)據(jù)分析30
• 實驗結(jié)果30-41
• 1. 材料表征30-35
• 1.1 質(zhì)譜和~1H NMR分析31-33
• 1.2 納米粒Zeta電位分析33-34
• 1.3 納米粒粒徑分布和形態(tài)觀察34
• 1.4 PEG-PCL-PAE/Van的穩(wěn)定性34-35
• 2. 納米粒載藥效率測定及藥物釋放35-37
• 2.1 羅丹明標準曲線35-36
• 2.2 載藥量及包封率36
• 2.3 萬古霉素釋放36-37
• 3. 體外靶向?qū)嶒?/span>37-38
• 4. 體外抑菌實驗38-39
• 5. 細胞毒性實驗39
• 6. 體內(nèi)炎癥靶向39-41
• 6.1 裸鼠體內(nèi)活體熒光成像39-40
• 6.2 CLSM觀察切片熒光40-41
• 討論41-42
• 結(jié)論42-44
• 參考文獻44-48
• 附錄一48-64
• 綜述1：靶向肽在遞送siRNA進行肺癌治療研究中的應(yīng)用48-56
• 參考文獻54-56
• 綜述2：多模態(tài)成像在干細胞研究中的應(yīng)用進展56-64
• 參考文獻61-64
• 附錄二64-66
• 附錄三：英文縮略詞匯表66-68
• 附錄四：致謝68-69
• 附錄五：個人簡歷69-70

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本文編號：988988