本文關鍵詞：穿膜肽聯(lián)合鹽霉素磷脂膠束靶向腫瘤干細胞的實驗研究

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【摘要】：在腫瘤中不僅存在著普通腫瘤細胞,還存在著與腫瘤發(fā)生,復發(fā)和轉移關系密切的腫瘤干細胞,它是原始腫瘤細胞。因此,成功清除腫瘤干細胞對腫瘤治療起著重要作用。眾多癌癥中,肝癌是目前最常見惡性腫瘤之一,過去三十年中,在美國肝癌發(fā)病率增長了90%。由于肝癌的擴散迅速以及轉移率高,五年的肝癌復發(fā)率從40%上升到70%。近年來肝癌腫瘤干細胞的研究開始引起人們的注意。眾多研究表明腫瘤干細胞可以比普通肝癌細胞更能抵御傳統(tǒng)化療方法。鹽霉素是一種離子載體抗生素,并有報道其可以清除多種腫瘤干細胞。在鹽霉素被廣泛認為可以殺傷腫瘤干細胞的同時,研究還發(fā)現(xiàn)其對肝癌和前列腺癌普通細胞具有很好的殺傷效果。因此,由于鹽霉素能同時殺傷肝癌細胞和干細胞,所以其在肝癌治療上具有很強的應用前景[3-5]。本研究論文的研究內容如下：第一章,建立了可靠的SAL檢測方法,實驗結果表明,SAL濃度在7.82～1000μg·mL-1范圍內與樣品峰面積A呈良好相關性(r=0.999),直線回歸方程：A=940.43C+16584。高、中、低三個濃度日內精密度和日間精密度RSD均小于5%,滿足體外檢測要求。第二章,通過偶聯(lián)法將-iRGD中巰基與DSPE-PEG2000-MAI中馬來酰亞胺反應生成DSPE-PEG2000-iRGD,通過MALDI-TOF-MS鑒定DSPE-PEG2000-iRGD的成功合成。考察了DSPE-PEG2000-iRGD膠束的粒徑,zeta電位和形態(tài)結構,并優(yōu)化了膠束的制備條件。結果表明藥物與材料質量比為1：10時包封率較好(96.64%),粒徑較小(13nm左右)。M-SAL-iRGD在pH=5.0和pH7.4的條件下,SAL均呈兩相釋放,在pH=5.0條件下釋放較快。第三章,以NRP-1高表達的HepG2細胞和HepG2肝癌干細胞為模型,以1,2-二油酰基甘油-甘油-3-磷酸氨基乙醇-氮-(羧基二乙酸熒光素)(CFPE)為熒光探針穿插在DSPE-PEG2000-iRGD膠束中,考察膠束的體外NRP-1受體靶向性。結果表明M-CFPE-iRGD膠束在HepG2細胞和HepG2肝癌干細胞攝取明顯強于未接穿膜肽的M-CFPE。即M-CFPE-iRGD可以很好的被細胞攝取的能力。另外,本章還評價了兩種膠束細胞中細胞毒性,和微球體形成率。結果表明空白膠束對肝癌細胞和肝癌干細胞均無毒性,而M-SAL-iRGD可增加對兩種細胞的毒性,且可抑制HepG2微球體的形成。第四章,建立了HepG2荷瘤裸鼠模型,制備出包載熒光探針DiR的DSPE-PEG2000-iRGD膠束,評價其在體內分布和肝癌腫瘤靶向性。結果表明M-DiR-iRGD膠束主要分布在肝和腫瘤組織中,并在腫瘤組織中的聚集多于其它組織。說明M-DiR-iRGD具有很好的腫瘤靶向與腫瘤滲透性。采用HPLC-MS分析了游離SAL、M-SAL膠束和M-SAL-iRGD膠束在SD大鼠中的藥代動力學特征。結果表明兩種膠束均可延緩SAL在血漿中的消除,其中M-SAL-iR GD能更有效地延緩SAL從血循環(huán)中的清除,增長其循環(huán)時間。建立HepG2荷瘤裸鼠模型,評價了游離SAL,M-SAL膠束和M-SAL-iRGD的體內抗肝癌活性及體內腫瘤微球體形成率。結果顯示M-SAL-iRGD組具有最強的腫瘤抑制能力,且能明顯降低體內肝癌腫瘤微球體形成率。綜上所述,M-SAL-iRGD可以很好抑制肝癌及肝癌干細胞,具有較好的開發(fā)和應用前景。
【關鍵詞】：DSPE-PEG2000 膠束 肝癌干細胞 NRP-1受體
【學位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 縮略詞7-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-15
• 第一章 SAL含量測定方法的建立15-20
• 1. 儀器與材料15
• 2. 實驗方法15-17
• 2.1 HPLC色譜條件15
• 2.2 特異性15-16
• 2.3 線性范圍16
• 2.4 提取回收率16-17
• 2.5 精密度17
• 3. 實驗結果17-18
• 3.1 特異性17
• 3.2 線性范圍17-18
• 3.3 提取回收率18
• 3.4 精密度18
• 4. 小結與討論18-20
• 第二章 膠束的制備及表征20-26
• 1. 儀器與材料20
• 2. 實驗方法20-22
• 2.1 M-SAL膠束的制備20-21
• 2.2 M-SAL-iRGD膠束的制備21
• 2.3 材料及膠束的表征21-22
• 3. 實驗結果22-25
• 2.1 不同材料與藥物比例對膠束粒徑,Zeta電位,包封率,載藥量的影響22
• 2.2 膠束的表征22-25
• 4. 小結與討論25-26
• 第三章 膠束的體外細胞學研究26-38
• 1. 儀器與材料26-27
• 2. 實驗方法27-31
• 2.1. 載CFPE膠束的制備27
• 2.2. 腫瘤細胞與腫瘤干細胞的培養(yǎng)27-28
• 2.3 NRP-1受體靶向性評價28
• 2.4 證明膠束的體外細胞結合活性性28-29
• 2.5 激光共聚焦證明膠束的體外細胞結合活性29
• 2.6. CCK-8法對載藥系統(tǒng)的體外細胞毒性評價29-30
• 2.7 膠束體外抗肝癌干細胞活性30-31
• 3. 實驗結果31-37
• 3.1. HepG2腫瘤細胞與腫瘤干細胞表面NRP-1表達分析31-32
• 3.2. 激光共聚焦證明膠束的體外細胞結合活性32-33
• 3.3 CCK-8法對載藥系統(tǒng)的體外細胞毒性評價33-36
• 3.4 膠束體外抗肝癌干細胞活性36-37
• 4. 小結與討論37-38
• 第四章 膠束的體內藥代動力學38-45
• 1. 儀器和材料38
• 2. 實驗方法38-40
• 2.1. 血漿樣品預處理38
• 2.2. 鹽霉素HPLC-MS分析方法學的建立38-40
• 2.3 血藥濃度的測定40
• 3. 實驗結果40-43
• 3.1 SAL HPLC-MS定量分析方法學的建立40-42
• 3.2. 藥代動力學42-43
• 4. 小結與討論43-45
• 第五章 膠束的體內靶向性研究45-53
• 1. 儀器和材料45
• 2. 實驗方法45-47
• 2.1. DIR紫外-可見定量分析方法學的建立45-46
• 2.2. 活體成像觀察膠束的靶向性46-47
• 2.3 腫瘤冰凍切片觀察熒光膠束靶向性47
• 3. 實驗結果47-51
• 3.1 DIR紫外-可見定量方法學考察47-48
• 3.2. 活體成像觀察膠束的靶向性48-50
• 3.3.腫瘤冰凍切片觀察熒光膠束靶向性50-51
• 4. 小結與討論51-53
• 第六章 膠束的體內抗腫瘤活性53-58
• 1. 儀器和材料53
• 2. 實驗方法53-54
• 2.1. 人肝癌腫瘤移植模型的建立53-54
• 2.2. 體內抗肝癌干細胞活性評價54
• 3. 實驗結果54-56
• 3.1 體內抗腫瘤評價54
• 3.2. 系統(tǒng)毒性評價54-55
• 3.3.體內抗肝癌干細胞活性評價55-56
• 4. 小結與討論56-58
• 結論58-59
• 參考文獻59-60
• 致謝60-61
• 文獻綜述61-66
• 參考文獻64-66
• 作者簡歷66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前4條

1 霍曉榮,劉鐵錚,王冉,柳偉榮;鹽霉素和莫能菌素殘留分析方法的研究進展[J];中國畜牧獸醫(yī);2005年07期

2 王凡;郭傳勇;;鹽霉素——一種新型的抗腫瘤藥物[J];同濟大學學報(醫(yī)學版);2013年03期

3 劉以民;彭光林;;地克珠利、鹽霉素、氯苯胍對兔球蟲病的影響[J];中國養(yǎng)兔雜志;2008年11期

4 陳代杰,周光悹,許文思;鹽霉素生物合成的研究——Ⅰ.淺藍菌素對鹽霉素生物合成的影響[J];抗生素;1988年03期

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本文編號：985466