本文關(guān)鍵詞：靜注人免疫球蛋白Fc片段唾液酸化及其抗炎活性的初步研究

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【摘要】：背景：靜注人免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIg)是從上千個健康獻血者血漿中分離提取的免疫球蛋白混合物,包含約107種廣譜抗體。IVIg最初主要用于治療先天性免疫缺陷疾病,近三十年其在自身免疫性疾病和炎癥疾病的治療中的發(fā)揮著越來越重要的抗炎活性。近年來有一些研究認為其發(fā)揮抗炎活性的關(guān)鍵與其抗體可結(jié)晶段(Fragment crystallizable,Fc)糖鏈的唾液酸化程度密切相關(guān),高唾液酸化的IVIg及其Fc片段在小鼠關(guān)節(jié)炎模型及免疫性血小板減少性紫癜等模型中表現(xiàn)出較高的抗炎活性：目前關(guān)于此方面的研究還存在爭議,而國內(nèi)尚無關(guān)于IVIg唾液酸化及其抗炎活性機制的研究報道。目的：明確國內(nèi)主要血液制品廠家IVIg的唾液酸含量；制備高唾液酸化的Fc片段及高唾液酸化的IVIg；驗證IVIg及Fc片段的抗炎活性是否與其唾液酸化程度有關(guān)。方法：1.分別建立分光光度法及高效液相-熒光檢測法兩種適合IVIg產(chǎn)品唾液酸含量測定的方法,比較國內(nèi)廠家的IVIg唾液酸含量的差異。2.通過木瓜蛋白酶酶切IVIg,蛋白G柱、分子篩柱兩步柱純化,獲取Fc片段；利用西洋接骨木凝集素,富集唾液酸含量較高的IVIg和Fc片段；通過蛋白電泳及免疫印跡分析制備產(chǎn)物的純度和抗體結(jié)構(gòu)。3.建立THP-1細胞炎癥模型,驗證上述制備的高唾液酸化的IVIg和高唾液酸化的Fc組分的抑制炎癥因子分泌的能力,比較其抗炎活性與唾液酸化程度的關(guān)系。成果：1.建立的兩種唾液酸含量的測定方法均可以應(yīng)用于與本試驗對IVIg及Fc片段的測定；兩種方法各有不同優(yōu)劣之處;國內(nèi)廠家的IVIg制品唾液酸糖基含量范圍在2.75-4.52μg/mg IgG,約合每分子IgG含有1.42-2.34個唾液酸糖基,部分廠家之間存在顯著性差異。2.蛋白電泳及免疫印跡分析顯示,通過多步驟純化制備的高唾液酸化的Fc片段具有良好的純度和抗體活性。3.在誘導(dǎo)的THP-1細胞炎癥模型中,1 mg/mL培養(yǎng)終濃度的IVIg具有良好的抑制兩種炎癥因子TNF-α、IL-6分泌的能力；高唾液酸化的IVIg及Fc片段相比于同濃度未富集唾液酸的IVIg和Fc片段顯示高出2-5倍不等的抑制炎癥因子分泌的能力;結(jié)論：國內(nèi)主要廠家IVIg制品唾液酸含量在2.75-4.52μg/mg IgG之間,部分廠家的制品唾液酸含量存在顯著性差異。IVIg在THP-1細胞誘導(dǎo)的炎癥模型中具有較好的抗炎活性,高唾液酸化的IVIg和Fc片段具有更強的抗炎活性,并且其抗炎活性與其Fc片段的唾液酸化程度有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：靜注人免疫球蛋白 唾液酸 Fc片段 抗炎活性
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第1章 我國主流血液制品廠家市售IVIg制品唾液酸化水平差異11-24
• 1 材料與儀器11-13
• 1.1 試劑材料11-12
• 1.2 儀器設(shè)備12-13
• 2 方法13-17
• 2.1 高效液相色譜檢測IVIg制品唾液酸化水平13-15
• 2.2 間苯二酚法檢測IVIg制品唾液酸化水平15-17
• 3 結(jié)果17-23
• 3.1 高效液相色譜檢測IVIg制品唾液酸化水平結(jié)果17-20
• 3.2 間苯二酚法檢測IVIg制品唾液酸化水平結(jié)果20-23
• 4 討論23-24
• 第2章 唾液酸化的IVIg Fc片段的制備24-38
• 1 材料與儀器24-25
• 1.1 試劑材料24-25
• 1.2 儀器設(shè)備25
• 2 方法25-32
• 2.1 木瓜蛋白酶酶切IVIg26-28
• 2.2 蛋白G柱親和層析28-29
• 2.3 分子篩層析29-30
• 2.4 西洋接骨木凝集素富集唾液酸化的Fc片段30-32
• 3 結(jié)果32-36
• 3.1 木瓜蛋白酶酶切條件優(yōu)化結(jié)果32-34
• 3.2 蛋白G柱純化產(chǎn)物34-35
• 3.3 分子篩層析產(chǎn)物35
• 3.4 西洋接骨木凝集素富集產(chǎn)物35-36
• 4 討論36-38
• 第3章 IVIg Fc片段唾液酸化對炎癥因子表達的影響38-49
• 1 材料與儀器38-39
• 1.1 試劑材料38-39
• 1.2 儀器設(shè)備39
• 2 方法39-43
• 2.1 THP-1細胞炎癥模型的建立39-42
• 2.2 IVIg在細胞炎癥模型中對炎癥因子表達的影響42-43
• 2.3 唾液酸化的Fc片段在細胞炎癥模型中對炎癥因子表達的影響43
• 3 結(jié)果43-47
• 3.1 THP-1細胞炎癥模型驗證43-45
• 3.2 IVIg制品抑制炎癥因子表達結(jié)果45-46
• 3.3 唾液酸化的Fc片段抑制炎癥因子表達結(jié)果46-47
• 4 討論47-49
• 結(jié)論及后續(xù)工作建議49-50
• 參考文獻50-54
• 附錄Ⅰ 英漢縮略詞對照54-55
• 附錄Ⅱ 碩士期間發(fā)表論文55-56
• 附錄Ⅲ 碩士期間參與項目及會議培訓(xùn)56-57
• 文獻綜述57-64
• 參考文獻61-64
• 致謝64-65

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫興權(quán);李靜;耿美玉;管華詩;;糖組學(xué)研究中糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)分析技術(shù)[J];化學(xué)進展;2007年01期

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本文編號：984650