本文關(guān)鍵詞：雷帕霉素對轉(zhuǎn)基因絨山羊細(xì)胞中外源基因表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 雷帕霉素 mTORC1 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系 Keratin5啟動子 IGF-1

【摘要】：雷帕霉素(rapamycin),又稱西莫羅斯,屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,在南太平洋復(fù)活節(jié)島(Easter Island, Rapa Nui)的吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus AY B-994)代謝產(chǎn)物中獲得,起初被作為抗真菌藥物使用,后發(fā)現(xiàn)其具有強(qiáng)烈的免疫抑制作用而被用于治療器官移植的排斥反應(yīng)。mTOR (mammalian target of rapamycin)是雷帕霉素在哺乳動物中的靶蛋白,以nTORC1 (mammalian target of rapamycin complex 1)和mTORC2(mammalian target of rapamycin complex 2)兩種蛋白質(zhì)復(fù)合體的形式存在,其中mTORCl對雷帕霉素敏感,而nTORC2對其不敏感,雷帕霉素是rnTORC1的特異性抑制劑。mTOC1通過下游效應(yīng)蛋白4E-BP1和S6K1調(diào)控細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成,也參與基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。盡管對于mTOR信號通路功能的研究已較為深刻,但其對轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系中外源基因表達(dá)的作用尚無報道。本實驗首先利用PCR技術(shù)克隆了人Keratin5啟動子,并通過構(gòu)建啟動子功能驗證載體pK5-DsRed2-1,轉(zhuǎn)染絨山羊細(xì)胞,驗證人Keratin5啟動子的功能；其次,通過克隆絨山羊IGF-1基因,并連接到人Keratin5啟動子下游,構(gòu)建皮膚特異性表達(dá)載體pCDsRed-KI,轉(zhuǎn)染細(xì)胞,構(gòu)建轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系；最后,利用雷帕霉素處理轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,RT-PCR檢測外源基因表達(dá)。結(jié)果顯示：1)人Keratin5啟動子在絨山羊細(xì)胞中驅(qū)動標(biāo)記基因表達(dá)并具有皮膚特異性；2)pCDsRed-KI在皮膚成纖維細(xì)胞中成功表達(dá),通過篩選獲得了轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系；3)用雷帕霉素處理轉(zhuǎn)基因細(xì)胞,可以抑制外源基因IGF-1得轉(zhuǎn)錄。上述結(jié)果表明mTOR信號通路對轉(zhuǎn)基因細(xì)胞中外源基因的表達(dá)可能具有調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：雷帕霉素 mTORC1 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系 Keratin5啟動子 IGF-1
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 縮略詞表9-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-20
• 1. 雷帕霉素與吸水鏈霉菌10
• 2. mTOR和mTOR信號通路10-13
• 3. 角蛋白及K5啟動子13-14
• 4. 胰島樣生長因子-1(IGF-1)14-16
• 參考文獻(xiàn)16-20
• 第二章 皮膚特異性人表皮角蛋白5基因啟動子克隆及表達(dá)載體構(gòu)建20-32
• 1. 材料與方法20-27
• 1.1 材料20-21
• 1.2 人Keratin 5啟動子的克隆21-24
• 1.3 構(gòu)建pK5-DsRed2-1載體并驗證Keratin 5啟動子的皮膚特異性表達(dá)特性24-27
• 2. 結(jié)果27-30
• 2.1 人Keratin5啟動子的克隆27-28
• 2.2 人Keratin5啟動子在內(nèi)蒙古絨山羊皮膚成纖維細(xì)胞中特異性表達(dá)28-30
• 3. 討論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-32
• 第三章 皮膚特異性表達(dá)IGF-1載體構(gòu)建并穩(wěn)定轉(zhuǎn)染絨山羊皮膚成纖維細(xì)胞和胎兒成纖維細(xì)胞32-42
• 1. 材料與方法32-36
• 1.1 質(zhì)粒、細(xì)胞系和菌株32
• 1.2 主要試劑及試驗材料32-33
• 1.3 內(nèi)蒙古絨山羊皮膚特異性表達(dá)IGF-1載體的構(gòu)建33-35
• 1.4 表達(dá)載體pCDsRed2-KI轉(zhuǎn)染內(nèi)蒙古白絨山羊皮膚成纖維細(xì)胞與胎兒成纖維細(xì)胞35-36
• 2. 結(jié)果36-41
• 2.1 皮膚特異性表達(dá)IGF-1載體的構(gòu)建36-39
• 2.2 表達(dá)載體pCDsRed-KI穩(wěn)定轉(zhuǎn)染內(nèi)蒙古絨山羊皮膚成纖維細(xì)胞與胎兒成纖維細(xì)胞39-41
• 3. 討論41
• 參考文獻(xiàn)41-42
• 第四章 雷帕霉素對轉(zhuǎn)基因絨山羊細(xì)胞中外源基因表達(dá)的影響42-46
• 1. 材料與方法42-43
• 1.1 材料與試劑42
• 1.2 方法42-43
• 2. 結(jié)果43-45
• 3. 討論45
• 參考文獻(xiàn)45-46
• 結(jié)論46-47
• 附件47-48
• 致謝48-49
• 攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文49

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 金梅;郭春麗;胡景慧;高文波;王薇;;遼寧新品系絨山羊微衛(wèi)星標(biāo)記與經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)關(guān)系的研究(英文)[J];遺傳學(xué)報;2006年03期

2 白俊艷,李金泉,道爾吉,張勤;用不同模型估計絨山羊早期生長性狀遺傳參數(shù)的比較[J];遺傳學(xué)報;2004年06期

3 張鎖鏈,劉東軍,王建國,廛洪武,何牧人,閆文龍,旭日干;通過體外受精技術(shù)縮短絨山羊育種周期的研究[J];中國實驗動物學(xué)報;1999年02期

4 尹俊,扈庭茂,李金泉,張春蘭,郭志成,周歡敏;與綿羊KAP6-1相似的6個絨山羊全長cDNA的克隆與序列分析[J];遺傳學(xué)報;2004年05期

5 ;[J];;年期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳寧;;絨山羊養(yǎng)殖戶如何應(yīng)對金融危機(jī)[A];《2009中國羊業(yè)進(jìn)展》論文集[C];2009年

2 白文林;羅光彬;尹榮煥;姜午旗;張寶路;張守純;趙志輝;;中國絨山羊品種的起源及遺傳分化研究[A];第十二次全國畜禽遺傳標(biāo)記研討會論文集[C];2010年

3 姜向宏;丁慶慶;;鄂托克旗絨山羊良種繁育體系建設(shè)與思考[A];《2011中國羊業(yè)進(jìn)展》論文集[C];2011年

4 馬寧;;中國絨山羊發(fā)展的階段性特征、現(xiàn)狀及對今后發(fā)展的思考[A];《2008中國羊業(yè)進(jìn)展》論文集[C];2008年

5 孟瑞強(qiáng);張燕軍;王瑞軍;王志新;張文廣;王鵬宇;劉慧;王志英;白X;周娟娟;李金泉;;絨山羊育種信息管理系統(tǒng)的設(shè)計與實現(xiàn)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)羊?qū)W分會2012年全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會議論文集[C];2012年

6 丁家剛;丁巍;;構(gòu)建生態(tài)型絨山羊生產(chǎn)模式的思考與實踐[A];《2009中國羊業(yè)進(jìn)展》論文集[C];2009年

7 韓敏;張金合;馬茂榮;蘇秀玲;何俊琴;王宇;;放牧與圈養(yǎng)絨山羊血液生理生化指標(biāo)比較分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜內(nèi)科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

8 劉斌;李玉榮;王峰;;中國主要絨山羊品種資源及其研究與利用現(xiàn)狀[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)羊?qū)W分會全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會議論文集[C];2010年

9 劉興亮;高愛琴;張文廣;李金泉;王志新;張永斌;;轉(zhuǎn)化生長因子受體Ⅱ在絨山羊皮膚中的表達(dá)[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)羊?qū)W分會全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會議論文集[C];2010年

10 薛樹媛;金海;李華偉;李長青;;不同物候期對放牧絨山羊食性與采食量的影響[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會養(yǎng)羊?qū)W分會全國養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會議論文集[C];2010年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 駐站記者 閆洪君 通訊員 石景君;阿旗絨山羊產(chǎn)業(yè)成為農(nóng)牧民增收的重要來源[N];赤峰日報;2006年

2 高學(xué)海;扎旗推廣絨山羊改良提質(zhì)項目人均增收880元[N];通遼日報;2007年

3 本報記者 董亮;上肥地鄉(xiāng)：絨山羊身上梳下“軟黃金”[N];鐵嶺日報;2006年

4 黨耀翔;岢嵐傾力打造“中國絨山羊之鄉(xiāng)”[N];忻州日報;2007年

5 鐘改清;養(yǎng)絨山羊帶富山區(qū)牧民[N];伊犁日報(漢);2007年

6 許金亭邋李占崇;推廣普及絨山羊飼養(yǎng) 清河力保羊絨霸主地位[N];中國畜牧獸醫(yī)報;2008年

7 王昆;達(dá)旗絨山羊提質(zhì)又增效[N];鄂爾多斯日報;2008年

8 孫國權(quán);阿旗舉行首屆絨山羊評比交易大會[N];赤峰日報;2008年

9 駐站記者 李云飛邋通訊員 石景君;阿旗絨山羊肉用成為產(chǎn)業(yè)增效的新亮點[N];赤峰日報;2008年

10 通訊員 魯紅光 張黎;尉犁絨山羊改良助農(nóng)增收[N];巴音郭楞日報;2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張微;絨山羊微量元素銅需要量的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

2 劉斌;絨山羊絨毛生長相關(guān)基因的篩選、鑒定和多態(tài)性分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 狄冉;中國產(chǎn)絨山羊微衛(wèi)星和單核苷酸多態(tài)性研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

4 郭旭東;絨山羊轉(zhuǎn)胰島素樣生長因子Ⅰ基因體細(xì)胞核移植胚胎的制備[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2008年

5 白文林;中國產(chǎn)絨山羊品種父系與母系起源的分子特征及遺傳分化[D];吉林大學(xué);2009年

6 孫澤威;松嫩羊草草地放牧絨山羊營養(yǎng)限制因素的研究[D];東北師范大學(xué);2008年

7 袁建龍;利用體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因絨山羊的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

8 許騰;絨山羊皮膚絨毛生長期與靜息期基因差異表達(dá)的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

9 趙勝軍;不同氨基酸模式對絨山羊皮膚氨基酸利用的影響及機(jī)理[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 常子麗;持續(xù)埋植褪黑素對絨山羊絨毛生長特性和相關(guān)基因影響的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郭俊清;亮氨酸及β-羥基-β-甲基丁酸鈣對絨山羊免疫機(jī)能和生產(chǎn)性能影響的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 蒙成志;舍飼與放牧條件對絨山羊免疫功能和抗氧化功能的影響[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

3 趙苗;絨山羊6個候選基因遺傳變異及其與經(jīng)濟(jì)性狀關(guān)系研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

4 宋潔;遼寧新品系絨山羊毛囊生長、發(fā)育相關(guān)基因的研究[D];遼寧師范大學(xué);2008年

5 侯越;絨山羊聯(lián)會復(fù)合體蛋白3基因的克隆、轉(zhuǎn)錄表達(dá)及多克隆抗體的制備[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2009年

6 張建軍;隴東絨山羊微衛(wèi)星多態(tài)性與經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)性研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

7 張小芳;遼寧高產(chǎn)系絨山羊5條染色體上的微衛(wèi)星位點分析[D];遼寧師范大學(xué);2009年

8 金永;毛囊細(xì)胞特異表達(dá)胸腺素β4基因轉(zhuǎn)基因絨山羊研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2011年

9 莊玉;絨山羊肥大細(xì)胞的組織化學(xué)分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

10 王敏;絨山羊11號染色體遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

，

本文編號：975399