本文關鍵詞：縫隙連接在異丙酚保護腦缺血再灌注損傷中的作用及可能機制

  更多相關文章： 腦缺血再灌注損傷 異丙酚 蛋白激酶C 縫隙連接蛋白43 縫隙連接 凋亡

【摘要】：目的:1.探討縫隙連接在異丙酚抗大鼠腦缺血再灌注損傷中的作用及可能的分子機制方法:1.采用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血/再灌注損傷模型;為了對異丙酚腦保護作用的濃度進行篩選,將50只SPF級雄性SD大鼠隨機分為5組:假手術(sham)組、缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)組、低(I/R+P_(25),25mg/kg)、中(I/R+P_(50),50mg/kg)、高劑量(I/R+P_(100),100mg/kg)異丙酚干預缺血再灌注組。為了研究異丙酚腦保護作用的分子機制,進一步將50只SPF級雄性SD大鼠隨機分為5組:sham組、I/R組、I/R+P_(100)組、甘珀酸(carbenoxolone,CBX)干預缺血再灌注(I/R+CBX)組和高劑量的異丙酚+甘珀酸干預缺血再灌注(I/R+P_(100)+CBX)組。采用Longa’s法對其進行神經(jīng)行為學評分;TTC染色法檢測大鼠腦梗死體積的變化;Western Blot法檢測大鼠腦組織中縫隙連接蛋白43(connexin 43,Cx43)、蛋白激酶C(PKC)以及凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2的蛋白表達變化。2.利用原代培養(yǎng)的星形膠質(zhì)細胞,制備缺氧/復氧損傷的細胞模型。為了對異丙酚保護細胞缺氧/復氧損傷的濃度進行篩選,實驗分為正常對照(control)組、缺氧/復氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)組、低(H/R+P_(25),25μmol/L)、中(H/R+P_(50),50μmol/L)、高劑量(H/R+P_(100),100μmol/L)異丙酚干預缺氧/復氧組。為了研究異丙酚保護作用機制,將實驗進一步分為:control組、H/R組、H/R+P_(100)組、異丙酚高劑量+縫隙連接增強劑(retinoid acid,RA)干預缺氧/復氧(H/R+P_(100)+RA)組、異丙酚高劑量+縫隙連接抑制劑(carbenoxolone,CBX)干預缺氧/復氧(H/R+P_(100)+CBX)組和異丙酚高劑量+PKC激酶抑制劑GF109203X干預缺氧/復氧(H/R+P_(100)+GF)組。分別采用MTT法和Hoechst 33258檢測星形膠質(zhì)細胞的存活率及細胞凋亡情況;熒光示蹤法檢測星形膠質(zhì)細胞間縫隙連接功能的變化;Western Blot檢測星形膠質(zhì)細胞中Cx43、PKC以及凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2的蛋白表達變化。結果:1.各實驗組大鼠神經(jīng)行為學評分和TTC染色的結果顯示:與I/R組相比,除I/R+P_(25)組外,I/R+P_(50)、I/R+P_(100)組神經(jīng)行為學評分和大鼠腦梗死體積百分率都有不同程度的降低,且I/R+P_(100)組效果更佳,甘珀酸可以進一步增強異丙酚對大鼠腦I/R損傷的保護作用。2.各實驗組大鼠腦組織中Cx43、PKC、Bax、Bcl-2蛋白表達變化的檢測結果顯示:較sham組,I/R組的Cx43蛋白表達以及Bax與Bcl-2比值顯著增高,而PKC蛋白表達水平顯著降低;與I/R組相比,I/R+P_(100)組的Cx43蛋白表達及Bax與Bcl-2比值明顯降低,而PKC蛋白表達則明顯增多,且甘珀酸可以增強異丙酚對蛋白表達變化的作用。3.星形膠質(zhì)細胞純度的鑒定結果顯示:星形膠質(zhì)細胞純度為96.3%±1.2%,可以用于后續(xù)的實驗。4.星形膠質(zhì)細胞存活率檢測結果顯示:與H/R組相比,除H/R+P_(25)組外,H/R+P_(50)、H/R+P_(100)組細胞存活率均明顯增高,且高劑量的異丙酚增高效果更佳;甘珀酸使異丙酚對星形膠質(zhì)細胞H/R損傷的保護作用增強,但維甲酸和GF卻使異丙酚的保護作用減弱。5.星形膠質(zhì)細胞間縫隙連接功能的檢測結果顯示,與control組相比,H/R組的星形膠質(zhì)細胞間縫隙連接功能明顯增強;與H/R組相比,H/R+P_(100)組的縫隙連接功能顯著降低,且甘珀酸可以進一步降低H/R+P_(100)組的縫隙連接功能;較H/R+P_(100)組,H/R+P_(100)+RA組和H/R+P_(100)+GF組的細胞間的縫隙連接功能則顯著增強。6.星形膠質(zhì)細胞中Cx43和PKC蛋白表達變化的檢測結果顯示,與control組相比,H/R組的星形膠質(zhì)細胞中Cx43蛋白表達明顯增高,PKC蛋白表達顯著降低;與H/R組相比,H/R+P_(100)組的Cx43蛋白表達明顯降低,而PKC蛋白表達明顯增高,且甘珀酸可以增強異丙酚的這一作用;較H/R+P_(100)組,H/R+P_(100)+RA組和H/R+P_(100)+GF組的Cx43蛋白表達均有不同程度的增加,但PKC蛋白表達均有不同程度降低。7.星形膠質(zhì)細胞凋亡情況檢測結果顯示:與control組相比,H/R組細胞凋亡率明顯增加;與H/R組相比,H/R+P_(100)組細胞凋亡率明顯降低,且甘珀酸可以增強異丙酚的這一作用;較H/R+P_(100)組,H/R+P_(100)+RA組和H/R+P_(100)+GF組的細胞凋亡率均有不同程度的增加。8.各實驗組星形膠質(zhì)細胞中凋亡相關蛋白Bax和Bcl-2蛋白表達變化檢測結果顯示:與control組相比,H/R組Bax與Bcl-2的比值顯著增高;與H/R組相比,使用高劑量異丙酚后Bax與Bcl-2的比值明顯降低,且甘珀酸可以使H/R+P_(100)組Bax與Bcl-2的比值進一步降低;較H/R+P_(100)組,H/R+P_(100)+RA組和H/R+P_(100)+GF組的Bax與Bcl-2的比值均有不同程度的增高。結論:1.異丙酚對腦I/R損傷有一定的保護作用,尤其以高劑量(100mg/kg)的異丙酚保護作用更佳。2.異丙酚對腦I/R損傷保護作用的機制可能與通過PKC信號通路抑制縫隙連接功能有關。3.異丙酚降低腦I/R損傷的星形膠質(zhì)細胞凋亡率可能與其降低Bax和Bcl-2的比值有關。
【關鍵詞】：腦缺血再灌注損傷 異丙酚 蛋白激酶C 縫隙連接蛋白43 縫隙連接 凋亡
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-20
• 1.材料13-14
• 2.主要儀器設備14
• 3.方法14-19
• 4.統(tǒng)計學處理方法19-20
• 實驗結果20-35
• 1.異丙酚對腦I/R損傷大鼠神經(jīng)功能評分的影響20
• 2.異丙酚對腦I/R損傷大鼠腦梗死體積的影響20-22
• 3.異丙酚對腦I/R損傷大鼠腦組織中Cx43、PKC、Bax、Bcl-2 蛋白表達的影響22-23
• 4.異丙酚對腦I/R損傷大鼠神經(jīng)功能評分的影響可能與其抑制縫隙連接功能有關23-24
• 5.異丙酚對腦I/R損傷大鼠腦梗死體積的影響可能與其抑制縫隙連接功能有關24-25
• 6.異丙酚對腦I/R損傷大鼠腦組織中Cx43、PKC、Bax、Bcl-2 蛋白表達的影響可能與其抑制縫隙連接功能有關25-27
• 7.星形膠質(zhì)細胞形態(tài)學觀察和純度鑒定27-28
• 7.1 星形膠質(zhì)細胞形態(tài)學觀察27
• 7.2 GFAP鑒定星形膠質(zhì)細胞純度27-28
• 8.異丙酚對H/R損傷星形膠質(zhì)細胞存活率的影響28-29
• 9.異丙酚對H/R損傷星形膠質(zhì)細胞存活率的影響可能與其抑制縫隙連接功能有關29-30
• 10.異丙酚對H/R損傷星形膠質(zhì)細胞縫隙連接功能的影響30-31
• 11.異丙酚對H/R損傷星形膠質(zhì)細胞中Cx43、PKC蛋白表達的影響可能與其抑制縫隙連接功能有關31-32
• 12.異丙酚對H/R損傷星形膠質(zhì)細胞凋亡的影響可能與其抑制縫隙連接功能有關32-33
• 13.異丙酚對H/R損傷星形膠質(zhì)細胞中Bax、Bcl-2 蛋白表達可能與其抑制縫隙連接功能有關33-35
• 討論35-39
• 結論39
• 課題創(chuàng)新點39-40
• 參考文獻40-45
• 致謝45-46
• 附錄A 主要英文縮略詞表46-47
• 附錄B 主要試劑配制方法47-50
• 附錄C 個人簡歷及發(fā)表文章情況50-51
• 附錄D 綜述 異丙酚對腦缺血再灌注損傷保護作用的研究51-59
• 參考文獻56-59

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1 付麗東,孫肖紅;咪唑安定和異丙酚復合誘導的臨床研究[J];河北醫(yī)學;2003年01期

2 蘭志勛,黃曉波,蔡兵,齊國華;麻黃素拮抗異丙酚復合誘導引起的循環(huán)功能抑制[J];四川醫(yī)學;2000年10期

3 董龍禹;異丙酚對人H-反射的影響[J];國外醫(yī)學.麻醉學與復蘇分冊;2001年06期

4 周少麗;異丙酚對心血管系統(tǒng)的影響[J];國外醫(yī)學.麻醉學與復蘇分冊;2002年06期

5 傅麗東;異丙酚自身復合誘導與咪唑安定、異丙酚復合誘導的臨床應用比較[J];河北醫(yī)學;2003年03期

6 趙軼;朱春仙;虞和永;;剖宮產(chǎn)術中異丙酚的血藥濃度測定及胎盤轉移初探[J];藥物分析雜志;2006年10期

7 范麗麗;梁亞萍;魏兆錦;;異丙酚、芬太尼麻醉在骨折、關節(jié)脫位手法復位的應用[J];新疆醫(yī)學;2007年01期

8 任瑜;薛慶生;于布為;;異丙酚對記憶功能的影響及相關腦機制[J];國際麻醉學與復蘇雜志;2007年05期

9 張麗榮;李文志;孫德峰;;單純異丙酚在無痛人流中的精簡用法[J];齊齊哈爾醫(yī)學院學報;2008年07期

10 蔡健;;異丙酚減少芬太尼誘導的嗆咳反應[J];牡丹江醫(yī)學院學報;2009年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 趙抗美;祝勝美;陳慶廉;;年齡對異丙酚藥效學的影響[A];2009年浙江省麻醉學學術會議論文匯編[C];2009年

2 蔣曉江;李瑋;李訓軍;胡銀;張圓;;異丙酚誘導重建睡眠結構的臨床研究[A];第三屆中國睡眠醫(yī)學論壇論文匯編[C];2009年

3 王平超;;異丙酚在快速順序插管對血壓的影響及防治[A];第十五次長江流域麻醉學學術年會暨2010年中南六省麻醉學學術年會暨2010年湖北省麻醉學學術年會論文集[C];2010年

4 潘立東;盛佩池;;異丙酚誘導睡眠治療急性失眠癥臨床觀察[A];2006年浙江省麻醉學學術年會論文匯編[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 通訊員 朱廣平 記者 趙雪;三軍醫(yī)大首創(chuàng)異丙酚誘導睡眠平衡恢復技術[N];科技日報;2005年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 王浩;異丙酚對肝細胞凋亡及神經(jīng)干細胞增殖的作用及其分子機制研究[D];復旦大學;2009年

2 易杰;靶控輸注異丙酚在腦脊液中藥代動力學的實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2001年

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1 樊宗兵;縫隙連接在異丙酚保護腦缺血再灌注損傷中的作用及可能機制[D];蚌埠醫(yī)學院;2016年

2 羅東;異丙酚對人離體妊娠子宮肌的影響及機制的初步研究[D];四川大學;2003年

3 郭遠波;異丙酚對大鼠內(nèi)毒素血癥外周血單核細胞蛋白質(zhì)表達的影響[D];南方醫(yī)科大學;2010年

4 張?zhí)m;右旋美托咪啶對老年患者異丙酚靶控輸注誘導濃度的影響[D];蘇州大學;2013年

5 欒建革;異丙酚對新生大鼠離體延髓—脊髓標本自發(fā)節(jié)律性呼吸放電作用及相關機制的研究[D];第一軍醫(yī)大學;2000年

6 鄒毅;異丙酚對哮喘小鼠氣道保護作用的炎癥機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2013年

7 毛新俊;異丙酚對兔小腸缺血—再灌注損傷保護作用的研究[D];廣西醫(yī)科大學;2004年

8 陳鴻;用等輻射分析法研究全身麻醉誘導時異丙酚、氯胺酮之間相互作用[D];天津醫(yī)科大學;2002年

9 陳超琴;硬膜外利多卡因阻滯加強異丙酚鎮(zhèn)靜催眠作用的機制探討[D];浙江大學;2012年

10 李峰日;異丙酚持續(xù)輸注對心肌缺血后大鼠星狀神經(jīng)節(jié)所產(chǎn)生的影響[D];延邊大學;2011年

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本文編號：943456