本文關(guān)鍵詞：兩株柳珊瑚來(lái)源真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物及生物活性研究

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【摘要】：近30年來(lái),柳珊瑚、軟珊瑚已成為海洋天然產(chǎn)物化學(xué)研究的熱點(diǎn)資源領(lǐng)域,從中發(fā)現(xiàn)了大量的活性次級(jí)代謝產(chǎn)物,并發(fā)現(xiàn)了多個(gè)藥物先導(dǎo)化合物。珊瑚體內(nèi)和表面存在著大量的微生物,近年來(lái)從珊瑚來(lái)源微生物的發(fā)酵產(chǎn)物中分離獲得了越來(lái)越多的具有抗菌活性、細(xì)胞毒活性及抗病毒活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物,使得珊瑚來(lái)源微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究受到極大關(guān)注,已成為海洋天然產(chǎn)物化學(xué)研究的新熱點(diǎn)。本研究對(duì)兩株中國(guó)南海柳珊瑚來(lái)源真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分離鑒定,獲得了抗病毒、細(xì)胞毒等活性化合物。運(yùn)用化學(xué)篩選和活性篩選的方法,從本實(shí)驗(yàn)室柳珊瑚來(lái)源真菌庫(kù)中篩選活性菌株；運(yùn)用大米固體培養(yǎng)基對(duì)兩株活性菌株：柳珊瑚來(lái)源枝孢屬真菌Cladosporium sp (RA07-1)和黑曲霉Aspergillus niger (TA01-24)進(jìn)行培養(yǎng)；對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物綜合運(yùn)用各種色譜分離技術(shù)(正反相硅膠柱層析,凝膠柱層析以及半制備高效液相色譜等)分離純化單體化合物；綜合運(yùn)用現(xiàn)代波譜分析技術(shù)(核磁共振,質(zhì)譜,紅外光譜,紫外光譜,圓二色譜等)對(duì)所獲得的單體化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)解析。采用抗菌、腫瘤細(xì)胞抑制、抗病毒及鹵蟲(chóng)致死活性模型測(cè)試化合物的生物活性。從Cladosporium sp(RA07-1)發(fā)酵產(chǎn)物中分離鑒定了8個(gè)單體化合物(1-8),包括雙環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)化合物1個(gè)(1)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)化合物6個(gè)(2-7)及五元內(nèi)酯化合物1個(gè)(8)�；衔�1是一個(gè)結(jié)構(gòu)非常特殊的二環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)化合物,結(jié)構(gòu)確定時(shí)運(yùn)用了NMR化學(xué)定量計(jì)算法驗(yàn)證了其平面結(jié)構(gòu),用實(shí)測(cè)的旋光值與其計(jì)算的旋光值進(jìn)行比較確定了化合物1 C-8的絕對(duì)構(gòu)型為8S化合物2的絕對(duì)構(gòu)型的確定是通過(guò)改良的Mosher方法得到確定的其絕對(duì)構(gòu)型為4R、5R、11R。從A. niger (TA01-24)發(fā)酵產(chǎn)物中分離鑒定了14個(gè)單體化合物(9-22),包括萘并吡喃酮類(lèi)化合物7個(gè)(9一15)、香豆素二聚體化合物3個(gè)(16-18)、環(huán)肽等其他化合物4個(gè)(19-22)�；衔�9-15為萘并吡喃酮類(lèi)化合物,是真菌Aspergillus niger主要的次級(jí)代謝產(chǎn)物。其中化合物9、10為萘并吡喃酮類(lèi)化合物的單體,11一15為二聚體,由萘并吡喃酮類(lèi)化合物單體9、10以小同形式聚合而成。萘并吡喃酮二聚體雖然沒(méi)有手性碳,但是由于其結(jié)構(gòu)中存在一個(gè)手性軸,使得每個(gè)化合物都有兩種可能的構(gòu)型(R和S)。通過(guò)圓二色譜(CD)測(cè)試并與文獻(xiàn)報(bào)道的該類(lèi)化合物CD曲線相比較,確定了5個(gè)萘并吡喃酮二聚體手性軸的絕對(duì)構(gòu)型均為S構(gòu)型。運(yùn)用鹵蟲(chóng)致死活性、細(xì)胞毒活性、抗病毒活性及抗菌活性模型,對(duì)從柳珊瑚來(lái)源真菌Cladosporium sp (RA07-1)和Aspergillus niger (TA01-24)分離得到的22個(gè)化合物(1-22)進(jìn)行了生物活性測(cè)試�？咕钚越Y(jié)果顯示化合物4和5對(duì)四聯(lián)球細(xì)菌T. halophilus顯示出了較強(qiáng)的活性,其最小抑制濃度MIC值均為3.13,μM。抗病毒活性結(jié)果顯示,化合物9、10和12對(duì)手足口病病毒(EV71)有顯著的抑制活性,IC50分別為43.9μuM、10.3μM和54.7,μM,活性明顯高于陽(yáng)性對(duì)照藥(陽(yáng)性藥利巴韋林對(duì)EV71的IC50為256μM),化合物17、21對(duì)單純皰疹病毒(HSV)有選擇性抑制作用,IC50分別為42.3,μM和117.5,μM(陽(yáng)性藥利巴韋林對(duì)HSV的IC50為128μM)。細(xì)胞毒活性測(cè)試結(jié)果發(fā)現(xiàn),化合物1對(duì)HeLa、P388、 HT-29、A549腫瘤細(xì)胞株均有較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性IC50分別為,0.76μM、1.35μM 2.48μM、3.11μM,化合物19對(duì)所測(cè)腫瘤細(xì)胞株均有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性,對(duì)HeLa、Hep-2、RD、A549和Vero的IC50分別為2.30μM、0.88μM、0.034μM、0.83μM和3.08μM,比陽(yáng)性藥阿霉素活性好很多(0.43μM、0.36μM、0.99μM、14.29μM、 2.03μM)。本研究從柳珊瑚來(lái)源枝孢屬真菌及黑曲霉中獲得二環(huán)內(nèi)酰胺類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、萘并吡喃酮二聚體、香豆素二聚體等結(jié)構(gòu)類(lèi)型的化合物,測(cè)定了化合物的抗病毒和細(xì)胞毒活性,為相關(guān)活性海洋天然產(chǎn)物的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供了基礎(chǔ)和數(shù)據(jù)資料。
【關(guān)鍵詞】：柳珊瑚來(lái)源真菌 枝孢屬的真菌Cladosporium sp 黑曲霉Aspergillusniger 內(nèi)酰胺 大環(huán)內(nèi)脂 萘并吡喃酮 香豆素 抗病毒活性 細(xì)胞毒活性
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R915
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-15
• 前言15-16
• 第一章 柳珊瑚來(lái)源枝孢屬真菌Cladosporium sp次級(jí)代謝產(chǎn)物研究16-44
• 引言16
• 實(shí)驗(yàn)部分16-30
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料與試劑16-17
• 2. 菌株的篩選、鑒定及培養(yǎng)17-24
• 3. 菌株大規(guī)模發(fā)酵24-25
• 4. 發(fā)酵物提取與分離25-27
• 5. 化合物生物活性測(cè)試27-30
• 結(jié)果與討論30-41
• 1. 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定30-37
• 2. 化合物波譜數(shù)據(jù)37-39
• 3 化合物活性結(jié)果39-41
• 小結(jié)41-42
• 參考文獻(xiàn)42-44
• 第二章 柳珊瑚來(lái)源曲霉屬真菌Aspergillus niger次級(jí)代謝產(chǎn)物研究44-67
• 引言44
• 實(shí)驗(yàn)部分44-48
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料與試劑44
• 2. 菌株的篩選、鑒定及培養(yǎng)44-46
• 3. 菌株大規(guī)模發(fā)酵46
• 4. 發(fā)酵物提取與分離46-47
• 5 化合物生物活性測(cè)試47-48
• 結(jié)果與討論48-64
• 1. 化合物結(jié)構(gòu)解析48-57
• 2. 化合物波譜數(shù)據(jù)57-61
• 3 化合物活性結(jié)果61-64
• 小結(jié)64-65
• 參考文獻(xiàn)65-67
• 綜述：海洋來(lái)源曲霉Asperillus sp.次級(jí)代謝產(chǎn)物研究進(jìn)展67-94
• 1. 生物堿類(lèi)化合物研究進(jìn)展67-72
• 2. 萘并吡喃酮類(lèi)化合物的研究進(jìn)展72-75
• 3. 聚酮類(lèi)化合物的研究進(jìn)展75-77
• 4. 萜類(lèi)化合物的研究進(jìn)展77-80
• 5. 其它化合物的研究進(jìn)展80-89
• 參考文獻(xiàn)89-94
• 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)94-95
• 攻讀碩士期間發(fā)表的文章95-96
• 致謝96-97
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷97-98
• 附圖98-104

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本文編號(hào)：932011