發(fā)布時(shí)間：2017-09-23 11:01

  本文關(guān)鍵詞：牛磺酸與DFP聯(lián)合使用對(duì)鋁致神經(jīng)系統(tǒng)氧化損傷及細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用

  更多相關(guān)文章： 鋁 DFP �；撬� 抗氧化系統(tǒng) 細(xì)胞凋亡

【摘要】：[目的]鋁作為地殼中含量最多的金屬元素,廣泛存在于空氣、水以及土壤中。因鋁獨(dú)特的理化性質(zhì),它被大量應(yīng)用于水凈化劑、餐具、食品包裝、食品添加劑以及醫(yī)藥等領(lǐng)域。因此,機(jī)體接觸并攝入鋁的機(jī)會(huì)大大增加,鋁蓄積會(huì)導(dǎo)致多種器官以及組織的毒性作用。其中,鋁的神經(jīng)毒性是研究熱點(diǎn)之一,研究發(fā)現(xiàn)鋁與多種神經(jīng)退行性疾病存在聯(lián)系,包括帕金森氏病(PD)、透析性腦病(DE)以及老年癡呆(AD)等。鋁可以通過(guò)加強(qiáng)脂質(zhì)過(guò)氧化水平,產(chǎn)生氧化損傷,進(jìn)一步導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,造成神經(jīng)毒性。前期研究表明1,2-二甲基-3-羥基-吡啶酮(DFP)是一種螯合劑,可有效排鋁,價(jià)格低廉,可口服,副作用小；牛磺酸是一種廣泛存在的游離氨基酸,具有多種的生物學(xué)效應(yīng)。關(guān)于牛磺酸與DFP聯(lián)合作用對(duì)鋁致大鼠神經(jīng)系統(tǒng)氧化損傷及細(xì)胞凋亡影響的研究未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)選擇Wistar大鼠,采用六水氯化鋁灌胃的方式建立鋁中毒模型并用�；撬岷虳FP單獨(dú)或聯(lián)合使用進(jìn)行解毒。通過(guò)測(cè)定抗氧化酶活力、氧化損傷情況、三磷酸腺苷酶(ATPase)活力和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因以及蛋白的表達(dá)情況,研究和探討牛磺酸與DFP聯(lián)合作用拮抗鋁致大鼠神經(jīng)系統(tǒng)氧化損傷及細(xì)胞凋亡的作用。[方法]1.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)將84只健康雄性SPF級(jí)Wistar大鼠按體重(180-220g)隨機(jī)分為7組,每組12只。采用灌胃方式進(jìn)行染毒,每天1次。陰性對(duì)照組連續(xù)8周給予1.0 ml/d生理鹽水。在前4周,鋁染毒組、牛磺酸組、低劑量DFP組、高劑量DFP組、牛磺酸+低劑量DFP組以及�；撬�+高劑量DFP組分別給予281.40 mg/kgAlCl3溶液；在后4周,各實(shí)驗(yàn)組分別給予1.0 ml生理鹽水、400 mg/kg Tau.13.82 mg/kg DFP.27.44 mg/kg DFP.400 mg/kg Tau.400 mg/kg Tau;牛磺酸+低劑量DFP組以及�；撬�+高劑量DFP組給予400 mg/kg Tau 6 h后分別給予13.82.27.44 mg/kg DFP。每組隨機(jī)選擇2只大鼠,麻醉后采用4%多聚甲醛灌注腦組織,用于海馬細(xì)胞凋亡情況的檢測(cè)。其他剩余大鼠在染毒結(jié)束后禁食24h,采用斷頭取血,收集血液,并迅速剖離出腦組織,分離出皮層和海馬,保存?zhèn)溆谩?.DFP與牛磺酸聯(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠皮層抗氧化系統(tǒng)的影響在分離出大鼠皮層后,準(zhǔn)確稱(chēng)重,按質(zhì)量體積比加入4℃的生理鹽水手動(dòng)研磨制成大鼠皮層勻漿。對(duì)各組大鼠皮層丙二醛(MDA)含量以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力值進(jìn)行檢測(cè),以探究DFP與牛磺酸聯(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠皮層氧化損傷的恢復(fù)作用。3.DFP與�；撬崧�(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠血清抗氧化系統(tǒng)的影響大鼠斷頭取血后,靜置離心收集血清。對(duì)各組大鼠血清丙二醛(MDA)含量以及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力值進(jìn)行檢測(cè),以探究DFP與牛磺酸聯(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠血清氧化損傷的恢復(fù)作用。4.DFP與�；撬崧�(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠皮層中ATPase活力的影響在分離出大鼠皮層后,準(zhǔn)確稱(chēng)重,按質(zhì)量體積比加入4℃的生理鹽水手動(dòng)研磨制成大鼠皮層勻漿。對(duì)大鼠皮層中Mg2+-ATPase.Na+K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活力進(jìn)行測(cè)定,研究DFP與�；撬崧�(lián)合作用對(duì)鋁致大鼠皮層ATPase活力下降的拮抗作用。5.DFP與�；撬崧�(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠全血中ATPase活力的影響取各組大鼠的部分抗凝全血制成溶血液。對(duì)大鼠全血中Mg2+-ATPase. Na+ K+-ATPase和Ca2+-ATPase的活力進(jìn)行測(cè)定,研究DFP與�；撬崧�(lián)合作用對(duì)鋁致大鼠全血中ATPase舌力下降的保護(hù)作用。6.DFP與�；撬崧�(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠海馬細(xì)胞凋亡的影響染毒結(jié)束后,采用4%多聚甲醛進(jìn)行灌注以固定大鼠腦組織,并制作石蠟切片。采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記測(cè)定法(TUNEL)法檢測(cè)凋亡總體情況,RT-PCR法檢測(cè)Bcl-2和Bax的mRNA表達(dá)水平,Western法檢測(cè)Bcl-2、Bax和cleaved Caspase-3表達(dá)水平,研究DFP與牛磺酸聯(lián)合作用對(duì)染鋁致大鼠海馬細(xì)胞凋亡的拮抗作用。[結(jié)果]1.DFP與牛磺酸聯(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠皮層抗氧化系統(tǒng)的影響與陰性對(duì)照相比,鋁染毒組的大鼠大腦皮層中SOD以及GSH-Px活力明顯降低,MDA含量顯著上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與鋁染毒組相比,牛磺酸組、高劑量DFP組、�；撬�+低劑量DFP組、�；撬�+高劑量DFP組大鼠大腦皮層抗氧化酶活力均明顯提高,而MDA含量明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在單獨(dú)用藥組的比較,�；撬�+低劑量DFP組大鼠皮層的GSH-Px和SOD活力較牛磺酸組和低劑量DFP組均有顯著提升(P0.05),同時(shí)MDA的含量明顯降低(P0.05)；與牛磺酸組相比,�；撬�+高劑量DFP可以顯著提高GSH-Px和SOD的活性,降低MDA的含量,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余各組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.DFP與�；撬崧�(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠血清抗氧化系統(tǒng)的影響與陰性對(duì)照相比,鋁染毒組的大鼠血清中GSH-Px活力明顯降低,MDA含量顯著上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與鋁染毒組相比,�；撬峤M、高劑量DFP組、牛磺酸+低劑量DFP組、牛磺酸+高劑量DFP組大鼠血清中GSH-Px活力均明顯提高,而MDA含量明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在單獨(dú)用藥組的比較,牛磺酸+低劑量DFP組大鼠血清的GSH-Px活力較�；撬峤M和低劑量DFP組均有顯著提升(P0.05),同時(shí)MDA的含量明顯降低(P0.05)；與�；撬峤M相比,牛磺酸+高劑量DFP可以顯著提高血清GSH-Px的活性,降低MDA的含量,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余各組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.DFP與牛磺酸聯(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠皮層中ATPase活力的影響與陰性對(duì)照相比,鋁染毒組的大鼠大腦皮層中Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活力明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與鋁染毒組相比,牛磺酸組、高劑量DFP組、�；撬�+低劑量DFP組、�；撬�+高劑量DFP組大鼠皮層中ATPase活力均明顯提高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在單獨(dú)用藥組的比較,�；撬�+低劑量DFP組大鼠皮層的Na+K+-ATPase、 Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活力較�；撬峤M和低劑量DFP組均有顯著提升(P0.05)。牛磺酸組相比,�；撬�+高劑量DFP可以顯著提高皮層Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase的活性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余各組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.DFP與牛磺酸聯(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠全血中ATPase活力的影響與陰性對(duì)照相比,鋁染毒組的大鼠全血中Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活力明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與鋁染毒組相比,高劑量DFP組、牛磺酸+低劑量DFP組、牛磺酸+高劑量DFP組大鼠全血中Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase舌力均明顯提高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在單獨(dú)用藥組的比較,�；撬�+低劑量DFP組大鼠全血的Na+K+-ATPase Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase活力較牛磺酸組和低劑量DFP組均有顯著提升(P0.05)。�；撬峤M相比,牛磺酸+高劑量DFP可以顯著提高全血Na+K+-ATPase、Mg2+-ATPase和Ca2+-ATPase的活性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余各組間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.DFP與�；撬崧�(lián)合作用對(duì)鋁暴露大鼠海馬細(xì)胞凋亡的影響陰性對(duì)照組中可觀察到的凋亡細(xì)胞極少；與陰性對(duì)照組比較,鋁染毒組的凋亡細(xì)胞占全部神經(jīng)細(xì)胞比例明顯增加；與鋁染組相比,牛磺酸組、低劑量DFP組、高劑量DFP組、牛磺酸+低劑量DFP組以及�；撬�+高劑量DFP組的凋亡細(xì)胞均有一定程度的下降；其中�；撬�+高劑量DFP組凋亡細(xì)胞明顯下降,接近陰性對(duì)照組。與陰性對(duì)照相比,鋁染毒組的大鼠海馬中Bcl-2的mRNA表達(dá)量明顯降低,Bax的-nRNA表達(dá)量明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與鋁染毒組相比,牛磺酸、低劑量DFP、高劑量DFP、牛磺酸+低劑量DFP、牛磺酸+高劑量DFP均可以顯著增強(qiáng)Bcl-2的mRNA表達(dá)量(P0.05),降低Bax的mRNA表達(dá)量(P0.05)。在單獨(dú)用藥組的比較,�；撬崤cDFP聯(lián)合用藥組大鼠海馬的Bcl-2的mRNA表達(dá)量較�；撬峤M或DFP組均有顯著提升(P0.05),而B(niǎo)ax的mRNA表達(dá)量顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與陰性對(duì)照相比,鋁染毒組的大鼠海馬中Bcl-2的蛋白表達(dá)量明顯降低,同時(shí)Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)量明顯增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與鋁染毒組相比,牛磺酸、低劑量DFP、高劑量DFP、牛磺酸+低劑量DFP、牛磺酸+高劑量DFP均可以顯著增強(qiáng)Bcl-2的蛋白表達(dá)量(P0.05),降低Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)量(P0.05)。在單獨(dú)用藥組的比較,牛磺酸+低劑量DFP組大鼠海馬的Bcl-2的蛋白表達(dá)量較�；撬峤M有顯著提升(P0.05),而B(niǎo)ax和cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)量顯著降低。與牛磺酸組以及高劑量DFP組相比,�；撬�+高劑量DFP可以顯著提高Bcl-2的蛋白表達(dá)量,明顯降低Bax和cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)量,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。[結(jié)論]1.DFP與�；撬崧�(lián)合作用對(duì)染鋁大鼠皮層和血清抗氧化系統(tǒng)有顯著地保護(hù)作用。2.DFP與�；撬崧�(lián)合作用能夠有效地緩解鋁致大鼠皮層和全血ATP酶活力的降低。3.DFP與�；撬崮軌蝻@著地調(diào)節(jié)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的基因和蛋白表達(dá),從而有效地拮抗鋁致海馬細(xì)胞凋亡。綜上所述,�；撬崤cDFP聯(lián)合使用能夠更有效緩解鋁染毒所致大鼠神經(jīng)系統(tǒng)過(guò)氧化損傷及細(xì)胞凋亡,對(duì)大鼠神經(jīng)系統(tǒng)具有更強(qiáng)地保護(hù)作用,優(yōu)于牛磺酸或DFP單獨(dú)使用。
【關(guān)鍵詞】：鋁 DFP �；撬� 抗氧化系統(tǒng) 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R965
【目錄】：

• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-16
• 符號(hào)說(shuō)明16-17
• 前言17-23
• 材料與方法23-36
• 結(jié)果36-44
• 討論44-50
• 結(jié)論50-51
• 附錄51-53
• 參考文獻(xiàn)53-61
• 致謝61-62
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文62-63
• 附件63

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8 張茗晰;�；撬岷铣申P(guān)鍵酶及轉(zhuǎn)運(yùn)體在綿羊組織器官中的表達(dá)研究[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

9 向志宇;牛磺酸對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的胰島β細(xì)胞凋亡的影響[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

10 繆迪;�；撬釋�(duì)高尿酸血癥性腎病大鼠肝臟XOD和ADA表達(dá)的影響[D];沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

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